抗Tim-3单抗联合化疗药物对同种异体造血干细胞移植后淋巴瘤复发和黑色素瘤的治疗研究

1、抗 Tim-3 单抗联合化疗药物对同种异体造血干细胞移植后淋巴瘤复发和黑色素瘤的治疗研究第一部分抗 Tim-3 单抗体联合环磷酰胺对同种异体骨髓造血干细胞移植后淋巴瘤复发的治疗研究目的 : 建立小鼠同种异体骨髓造血干细胞移植后淋巴瘤复发模型 , 探讨抗 Tim-3 单抗体联合环磷酰胺对此模型的治疗效果及其可能的机制 , 为临床上治疗移植后白血病复发开创了新的方法。方法 :1. 以雌性 C57BL/6 小鼠为供鼠、接受 8Gy全身照射的 BALB/c 小鼠作为受鼠进行同种异体骨髓移植 , 移植物中包括 1X107骨髓细胞 ,5X106 脾细胞和 1X106A20细胞 , 建立小鼠骨髓造血干细胞移

2、植后淋巴瘤复发模型。 2. 根据小鼠的临床表现、 外周血细胞计数和外周血图片判断小鼠骨髓造血干细胞移植后淋巴瘤复发模型是否成功。3. 根据治疗方案的不同 , 受鼠随机分为 4 组: 同型对照组 ,抗 Tim-3 单抗组 , 环磷酰胺组与联合环磷酰胺和抗 Tim-3 单抗组。观察各组小鼠的生存时间 , 流式细胞术检测小鼠外周血和脾脏淋巴细胞中 CD4+ T 细胞、 CD8+ T 细胞、 CD3+CD4+CD25+FoxP3+ Treg细胞和CD3+CD8+Granzyme B 细T胞的比例。结果 : 小鼠骨髓造血干细胞移植后淋巴瘤复发模型建立成功。 抗 Tim-3 单抗和环磷酰胺联合使用显著提高

3、移植后淋巴瘤复发小鼠生存期( 平均提高 7.2 天,P<0.05)。与同型对照组相比, 抗Tim-3单抗组升高了受鼠外周血和脾脏CD4+T细胞的比例( 外周血中升高了10.1%,脾脏中升高了2.2%,P<0.05),环磷酰胺组能使受鼠脾脏CD4+T细胞的比例显著下降 ( 下降了19.1%,P<0.01)。与同型对照相比 , 抗 Tim-3 单抗和环磷酰胺联合用药显著降低了骨髓移植后免疫抑制性Treg 细胞的比例 ( 外周血中降低了 1.55%, 脾脏中降低了 1.86%,P<0.01),提高骨髓移植后CD8+T淋巴细胞中颗粒酶B+的细胞毒性 T 淋巴细胞的比例 ( 外周

4、血中升高了 6.84%, 脾脏中升高了 5.47%,P<0.001),恢复 CD4/CD8T细胞的比值。结论 :CD4+T细胞、 CD8+T细胞和 Treg 细胞以及 CTL在移植后淋巴瘤复发中起重要作用, 联合抗 Tim-3 单抗和环磷酰胺治疗同种异体骨髓造血干细胞移植后淋巴瘤复发有效。第二部分抗 Tim-3 单抗联合曲美替尼对黑色素瘤的治疗研究目的: 探讨抗 Tiim-3 单抗体联合曲美替尼对此模型的治疗效果及其可能的机制, 为临床上治疗黑色素瘤提供新的思路。 方法 : 建立小鼠黑色素瘤皮下移植瘤模型, 根据治疗方案的不同 , 小鼠随机分为 4 组: 对照组 , 抗 Tim-3 单抗

5、组 , 曲美替尼组与联合曲美替尼和抗Tim-3 单抗组。比较各组小鼠肿瘤体积的大小, 绘制生长曲线 , 流式细胞术检测各组小鼠肿瘤浸润淋巴细胞中 CD4+T 细胞和 CD8+T 细胞的比例以及其中 Tim-3+细胞的比例。免疫组化分析各组小鼠肿瘤 Ki67 和 Caspase-9 的阳性率差异。 CCK-8法检测在体外实验中各组对 B16F10细胞株增殖的影响。 结果 : 与对照组相比 , 曲美替尼能明显抑制B16F10细胞的生长 , 最高的抑制率发生在4h, 曲美替尼组与联合曲美替尼和抗Tim-3 单抗组的抑制率分别为22.3 0.83%,23.0 1.11%,P<0.01。与对照相比曲美替尼组和联合曲美替尼和抗Tim-3 单抗组 ,Caspase-3 阳性率明显升高 ,P<0.01; 而 Ki67 阳性率明显降低 ,P<0.01 。联合曲美替尼和抗 Tim-3 组的小鼠在第 23 天的肿瘤大小的抑制率为40.8 2.19%,P<0.01肿瘤体积明显得到抑制。与对照组相比, 抗 Tim-3单抗组肿瘤浸润淋巴细胞中CD8+T细胞比例明显升高 , 曲美替尼组肿瘤浸润 CD8+ T细胞中 Tim-3+CD8+ T 细胞的比例升高了2 倍。结论 :曲美替尼能通过促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞生长来发挥