DNS法测定总糖和还原糖精选文档

1、DNS法测定总糖和还原糖精选文档TTMS system office room TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-实验九总糖和还原糖的测定（二）3,5-二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。二、实验原理：在NaOH和丙三醇存在下，3, 5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生 成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有 最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法 可测定样品中的含糖量。黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干

2、燥恒重的葡萄糖lOOmg,加少量蒸個水 溶解后，以蒸備水定容至100ml,即含葡萄糖为l.Omg/ml。（2）3, 5二硝基水杨酸试剂：称取6. 3 g 3, 5二硝基水杨酸并量取262 ml2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中）,再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮 于棕色瓶中。(3) 碘一碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸憎水中。(4) 6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸饵水中。(5) 0. 1%酚猷指示剂。(6) 6 mol/L HC1 溶液2、材料小麦

3、淀粉或玉米淀粉。3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mmX 180mm试管，按下表加入1. Omg/ml葡萄糖标准液和蒸馆水。试剂管号012345678葡萄糖标准液 0(ml)蒸備水2.0(ml)水杨酸溶液 1.5(ml)葡萄糖含量 0(mg)0.2 0.4 0.61.8 1.6 1.41. 5 1. 5 1. 50.2 0.4 0.60.8 1.01.2 1.01. 5 1. 51.2 1.4 1.60.8 0.6 0.41. 5 1. 5 1. 51.2 1.4 1.6将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min,取出后立即用冷水冷

4、却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸憎水，摇匀。X=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。2、样品中还原糖的提取准确称取0.5g小麦（淀）粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸備水（约2 ml） 调成糊状，然后加入40ml蒸憎水，混匀，于50C恒温水浴中保温20min,不时搅 拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤液全部收集在50ml的容量瓶中，用蒸憎水定容 至刻度，即为还原糖提取液。3、样品总糖的水解及提取准确称取0.5g小麦（淀）粉，放在锥形瓶中，加入6mol/L HC1 10ml,蒸偶水 15ml,在沸水浴中加热0. 5h,取出12滴置于白瓷板上，加

5、1滴I-KI溶液检査 水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却至室温后加入1滴酚 猷指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100ml,过滤取滤液 10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用 于总糖测定。4、样品中含糖量的测定试剂空白还原糖总糖样品溶液(ml)01.01.0蒸馋水(ml)2.01.01.0水杨酸(ml)1.501.501.50将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min,取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馈水，摇匀。X =540nm处测定吸光度样品溶液中还原糖和总糖测定后，取样品的光吸收值在标准曲线上查出相应的糖量。五、结果处理按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量:式中：C还原糖或总糖提取液的浓度，mg/ml；V还原糖或总糖提取液的总体积，ml；m样品重量，g:1000mg