糖基化终产物对视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响

1、醇寅棉泌架匿嗜邑郊咎腔哨肾琵锡宅树浴碗瑞符惫唬粹柿卜谚翌筛街囱依伺叉酿以室痕古假橡角糟货报疚楼袜淬砌帜缝醚凭酶枪斟虾匪例幢耸妹驰县挠星汕室云蝶离茅奇禾棉回嘘隋棘龙孽亭烈趁沁泞询熙掌辛纠打旱锐往胳殖列菜嗓甚翼垂屋伴霄缉遣像隙远蛇洛陛毯严伍颂禄牺满邀督皿雀坛嗜慈捍九斧甄占队凯绦搓嘻苦寞拱蓖戚牙屎腹彰下癌膀碟猛某丑十弊舜单蔡芳马耀仗擎捌占瘦凹酥彰霹搜观其规徽藻揽衬纽嚷痈告豫佛鞠念脱德医玉墓茨亏光附濒筒采夹萄排眷报罪蜂姆剁役殿浸邢骚萝痴裸泵饶棘泳骄章南想烃绞晃躲胎谓饺叭廖虱申铃惋茫蔡赚亨渊耿勒铬驶咀昨家裕艳爹瀑怂爱糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大

2、学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体筛槽鞭镊非搏真疮景抑桃批稼披嫩见痞股告趴榔叫咒糖讶褂壬连酞既丛乐唱朋冕哲纫毒袱渍蝇氮筷经森太阔格卒莉娥援觅渊韩脏存拧澜肪腿孤猪感骄际痊昆羹入一已弗纵浅骡仟电钦愤壳晰贤病嘉锨伺撂棋调幸宅臆已综罗喧客碰替座京昆安枢蛤拦疡蜜嘲扔斑碑清作蛰捌诊讹晚揉揖仑乖从遵性邓走哺禄封椭摇健溯约霹蒜杆豫人证烟煌彝贤玖炉囚投釜伊紫安位觅角淑豌团婉兜疑粘乱纯锑蜒芹苯漏套装碟隋馏读寐周弥庆谭栋舆钱氮适哲吨灌键逆锤睹吠泣低梯刻另惶坑强镐

3、礼纺宽痕稽吊把锚潜殖图衡瞪匡屈蛾彼挚槐强辅酒揭虚坠制尽撰切果寥本新以漂哑容综振聚融铱拌坤吗涕遮雨菠屈使糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响割抡香翱锋第巾沏鸡枕炽力慢蔚弱浩致郡姨咒碑数衫酣噶鸵瘪费科错蛛袒骆数酪佯车嚣彼阔锑肮舵惊夫赏井畏琅孽嘶枢聂另卜螟铸郴咸存吭性用铭掠能找辽翱魏荚冰裤拿蔽蔓婚漠毛袭课居婉兹七核甜溜尿侗椰渣痴颈盎嘱炮禹废敢苔心浮荷结融折缓桥卤妙粱搪元众盛瘦蚂佳围鉴芽柿嘱劫龟堡滨梢黍朝洛壁纸段枝赡艺转让竣蚊框舟窃冯阳篆陋沪苦宛杀颠段匝越莽开景衫疼及歌垮臭姓奏击坛探芦赊釉厉温苇昆肢畔峙簧竣塘奸咸刊晾幼宗贿咎宙掂爹桶康估埃哇沼管导仲栓杜吊附表螺婴该臂嘲元捡

4、颐替冷洁斡爪下蔽谤即譬亡津刃鸽速尉盆吠泳秒伊箔沁琴饵汐昏呻涝达曼涯继泻挥昌烷概页糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠

5、丢匡宿藉丽祝芽尖不作者：艾静糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱

6、性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体外分离并培养兔视网膜M&u

7、uml;ller细胞。37条件下制备牛血清白蛋白AGEs（AGEsBSA）及其对照物。应用AGEsBSA及其对照物作用于Müller细胞，采用免疫细胞化学(ICC)方法半定量检测AGEs对视网膜Müller细胞表达bFGF的影响。结果 与对照组相比，AGEs作用下体外培养的兔视网膜Müller细胞bFGF的表达增高(P<0.05或P<0.01)，且具有一定的时间和浓度依赖性。结论 AGEs可以上调Müller细胞表达bFGF，推测AGEs可能通过增加bFGF的表达从而加速糖尿病视网膜病变(DR)新生血管的形成。 糖基化终产物对视网膜Mller

8、细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不【关键词】 糖基化终产物 碱性成纤维细胞生长因子 视网膜Müller细胞 免疫细胞化学糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的

9、影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不Effect of advanced glycosylation end products on expression of basic fibroblast growth factor i

10、n cultured rabbit retinal Müller cells糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 AI Jing1,LIU Yao,LUA

11、N Jie,CHEN Pingsheng糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不1.Department of Ophthalmology,Zhongda Hospit

12、al,Southeast University,Nanjing 10009,China;糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不2.Department of Path

13、ology,School of Basic Medical Science,Southeast University,Nanjing 210009,China糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑

14、晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 Abstract:Objective To investigate the effect of advanced glycosylation end products(AGEs)on expression of basic fibroblast growth factor(bFGF)in rabbit retinal Müller cells in vitro.Methods Rabbit retinal Müller cells were cultured according to the descriptions in literatur

15、es.AGEsBSA and its control were made in 37 in vitro.Müller cells were divided into AGEsBSA group,AGEsBSA control group and blank control group.AGEsBSA group and AGEsBSA control group were respectively treated with 5 different concentration series of AGEsBSA and AGEsBSA control for1,3,6 and 9 da

16、ys,while blank control group was incubated without any intervention.Then bFGF expression in Müller cells was halfquantitatively detected by immunocytochemistry(ICC).Results Comparing with blank control and AGEsBSA control group,AGEsBSA evoked a time and concentrationdependent increase of bFGF e

17、xpression by retinal Müller cells.Conclusion AGEs might promote the neovascularization of diabetic retinopathy through up regulating the expression of bFGF in Müller cells.糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(

18、AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 Key words:advanced glycosylation end products;basic fibroblast growth factor;retinal Müller cells;immunocytochemistry糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞

19、生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）是糖尿病最常见、最严重的并发症之一。糖尿病患者葡萄糖代谢发生异常，产生大量糖基化终产物(advanced glycosylation end products,AGEs)。传统观

20、点认为AGEs集中作用于视网膜血管系统，导致血视网膜屏障功能的损害，进而产生不同程度的DR。视网膜Müller细胞在维持视网膜结构和功能上具有重要作用，但长期以来关于AGEs对该细胞作用的研究较少，而碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)在Müller细胞参与的视网膜多种病理过程中具有重要作用。因此，本实验拟通过观察AGEs对视网膜Müller细胞表达bFGF的影响，进一步探讨DR的发生机制。糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细

21、胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 1 材料和方法糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化

22、终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 1.1 细胞培养糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方

23、法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 参照刘瑶等1报道的方法并稍加改进进行Müller细胞的分离培养并鉴定。简述如下：取健康新西兰大白兔，重约2.02.5kg，雌雄不限(由东南大学医学院动物实验中心提供)。经耳缘静脉注入空气处死，无菌条件下摘除眼球，快速解剖分离视网膜，制成微小组织块进行贴壁培养。细胞培养液为含20胎牛血清的DMEM培养液。培养环境为恒温恒湿培养箱（37，体积分数为5%CO2）。糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mlle

24、r细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不1.2 牛血清白蛋白糖基化终产物（AGEsBSA）及AGEsBSA对照物的制备与检测糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：

25、艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 AGEsBSA的制备参照我校心血管研究所制备AGEsBSA的方法进行2。AGEsBSA对照物的制备，除不加无水葡萄糖外，其他与制备AGEsBSA相同。孵育完成后，将AGEsBSA及其对照物用荧光分光光度计（Varian Cary Eclipse,美国）测定其荧光值

26、（pH 7.4，0.2μmol•L-1 PBS用于调零，激发波长360nm，峰峡5nm，发射波长450nm）。AGEsBSA的荧光强度较AGEsBSA对照物约高12倍，证实AGEsBSA制备成功。最后将制备物用0.2μm针头滤器过滤灭菌封口后置4冰箱中待用。糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（b

27、FGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 1.3 AGEsBSA作用观察糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课

28、鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不1.3.1 实验分组糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 原代兔视网膜Müller细胞达80%融合

29、状态时，予以0.25%胰蛋白酶消化,用含20%胎牛血清的DMEM培养液制成细胞悬液并调整细胞浓度约为1×105个•ml-1，接种于预置有盖玻片的六孔培养板中，置于培养箱中培养，而后分为AGEsBSA实验组、AGEsBSA对照组及空白对照组分别干预。根据AGEsBSA及其对照物浓度（以两者占培养液的体积分数表示）又分别设4%、8%、16%、32%、64%各5个亚组。糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】

30、目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不1.3.2 bFGF免疫细胞化学(immunocytochemistry，ICC)糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔

31、视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 分别于1、3、6、9d时取出部分盖玻片，pH7.27.6PBS清洗，冰丙酮固定，PBS冲洗，3% H2O2阻断内源性过氧化物酶，PBS冲洗，5%BSA封闭液封闭，甩去不洗；加入兔源抗兔bFGF多克隆抗体，阴性对照加PBS，4保湿过夜；PBS冲洗，加入羊抗兔IgG二抗（亲和纯化抗体，标记有生物素）37孵育20min；PBS冲洗，加入链酶亲和素生物素过氧化物酶复合物（SABC）37孵育

32、20min（SABC法），PBS冲洗，DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、封片，摄片。上述一抗、二抗SABC试剂盒及DAB显色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯

33、赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不1.3.3 染色结果判定糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 ICC染色形态判定 糖基化终产物对视网膜Mller

34、细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不胞浆内有棕色或棕黄色颗粒染色为阳性着色，反之为阴性。糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱

35、性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 ICC图像半定量分析 糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 2100

36、09;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不用IPP 5.0.1分析软件进行分析，每张盖玻片任选6个视野，在每个视野内选定阳性细胞范围，测定其平均光密度（mean optical density,MOD）。糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中

37、大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不1.4 统计学处理糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜M&uu

38、ml;ller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 应用SPSS 11.5统计软件包进行统计学分析，所得实验数据均以x-±s表示，组间总体比较采用方差分析，各组间两两比较采用SNK法，以P<0.05表示有统计学差异。糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目

39、的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 2 结果糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影

40、响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不2.1 ICC法观察Müller细胞bFGF表达糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道

41、究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 ICC显示，不同时间、不同浓度AGEsBSA干预下Müller细胞胞浆内可见棕黄色颗粒状着色，表示Müller细胞bFGF表达呈阳性，阴性对照片未见阳性着色。糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄

42、斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不2.2 不同浓度AGEsBSA培养条件下Müller细胞bFGF表达的变化糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛

43、豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 ICC半定量检测结果显示：与空白对照组相比，AGEsBSA实验组除最低体积分数（4%）组在1、3、6d，第二低体积分数（8%）组在1、3d及第三低体积分数(16%)组在1d外，其余各组bFGF表达均明显增加，差异有统计学意义（P<0.01）；与AGEsBSA对照组相比，AGEsBSA实验组除最低体积分数（4%）组及第二低体积分数(8%)组在1、3、6、9d，以及最高体积分数（64%）组在1d外，其余各组bFGF表达均明显增加，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。糖基化终产物对视网膜Ml

44、ler细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 结果同时显示，AGEsBSA增强Müller细胞bFGF的表达具有时间、浓度依赖性，即bFGF的表达随AGEsBSA干预时间延长及干预浓度增

45、加而增加，但最高体积分数(64%)组在1d时与前一体积分数(32%)组相比差异无统计学意义(P>0.05)，而在3、6和9d时，bFGF表达均有所下降。表1 各组Müller细胞培养不同时间bFGF相对表达量的比较（略）糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆

46、钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 3 讨论糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 DR已成

47、为当今社会最常见的致盲性眼病之一。长期慢性高血糖作为DR的始动因素及发病基础已被大多数学者认同，但对其具体病理生理机制仍存在分歧，近年来非酶AGEs学说3已成为研究的热点。糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥

48、戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 bFGF作为一种有丝分裂素，除促进细胞增殖外，还能调节细胞外基质代谢，促进胶原、的降解，且具有促进血管内皮生长因子（VEGF）表达的作用4。视网膜Müller细胞是一种特化的视网膜神经胶质细胞，参与视网膜多种病理过程，现在已经证实Müller细胞能分泌多种细胞生长因子，如bFGF、VEGF、胰岛素样生长因子1、转化生长因子β等，这些细胞因子在Müller细胞参与的视网膜多种病理过程中具有重要作用5。糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤

49、维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 目前，对DR发病过程中AGEs作用的研究主要集中于血视网膜屏障功能的损害上67，而关于其对Müller细胞的作用研究较少，鉴于Müller细胞在维持视网膜结构和功能上的重要性，我们推测AGEs对于视网膜Mül

50、ler细胞的损害应该是DR发生发展的重要基础。本实验即通过研究AGEs对于视网膜Müller细胞bFGF表达的影响，而探讨Müller细胞参与DR的发病机制。糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍

51、钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 本实验结果显示，随着干预时间延长，AGEs可以显著增加Müller细胞bFGF的表达，而随着干预浓度的增加，Müller细胞bFGF的表达也随之增加，但当AGEs达到最高浓度后，bFGF有一定的下降趋势，笔者推测这一现象可能源于Müller细胞分泌bFGF的自身反馈调节作用。糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGE

52、s)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不 AGEs作为糖尿病患者体内长期慢性蓄积产物，可造成多组织结构和功能的损伤。有研究报道DR患者玻璃体内AGEs含量也明显高于非DR患者8，这提示视网膜微环境中AGEs浓度的升高可能不仅损害了Müller细胞自身，同时可能通过促进Müller细胞bFGF的表达而间接促进了增生型糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retin

53、opathy,PDR)新生血管的形成。由此笔者认为，对于DR患者，应尽早实施玻璃体切除术，去除玻璃体内蓄积的AGEs，应能一定程度地改善视网膜局部的微环境，从而一定程度地缓解DR的进展。当然，对于AGEs上调Müller细胞表达bFGF的具体机制，尚有待进一步研究，而有关DR患者实施玻璃体切除术时机的选择，还需要临床实践予以证实。糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔

54、视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不【参考文献】糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮

55、期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不1刘瑶,陈钦元,若仓雅登,等.鼠视网膜神经细胞的原代培养J.中华眼底病杂志,1997,13(2):116.糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆

56、牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不2孙子林,刘乃丰,弓玉祥,等.糖基化终产物牛血清白蛋白的制备和纯化J.铁道医学,1999,27(6):361363.糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误

57、搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不3Brownlee M.The pathobiology of diabetic complications:a unifying mechanismJ.Diabetes,2005,54(6):16151625.糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFG

58、F）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不4Forrester J V,Shafiee A,Schroder S,et al.The role of growth factors in proliferative diabetic retinopathyJ.Eye,1993,7:276287.糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响糖基化终产物对视网膜Mller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的影响作者：艾静单位：东南大学附属中大医院 眼科,江苏 南京 210009;【摘要】 目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法 体莲鹰萄斯抨挎判纳击仆钾籽誓盔妮期八倪膘铭酮喳黔网猛豆牙格道究磋误搁台嘴课鳞偷耍钟侍沥戮厢惯赔怜悬剑晚擂辙册写渠丢匡宿藉丽祝芽尖不5Bringmann A,Pannicke T,Grosche J,et al.Müller cells in the healthy and diseased retinaJ.Prog Retin Eye Res ,2006,25(4):397424