复制家兔DIC实验

1、复制家兔 DIC 实验1 手术操作（1）取 2 只家兔并称重，分成甲兔和乙兔。（2）甲兔和乙兔均从耳缘静脉注入 3%戊巴比妥钠 1ml/kg 麻醉，仰卧固定在家兔手术台上。剪去颈部被毛，沿颈正中做切 口，分离皮肤与肌肉。（3）甲兔从耳缘静脉注射 4%兔脑粉生理盐水溶液 2ml/kg ， 15min 内注完。重复上述放血步骤，分离血浆备用。（4）30min 后，重复上述放血步骤，分离血浆备用。乙兔 从耳缘静脉注射生理盐水 2ml/kg ，分别在相应时间点按上述方 法取血，分离血浆备用。（5）DIC指标的检测。 凝血酶原时间的测定： 取血浆 0.1ml ，放入装有 4%兔脑粉0.1ml的小试管内，

2、置于37C水浴。随后加入 0.025mol/L的氯 化钙 0.1ml ，用秒表计时，轻轻地摇动。直至溶液停止流动或出 现不溶颗粒，记录时间为凝血酶原时间。重复3 次，取平均值。 凝血酶时间的测定： 取被检血浆 0.2ml 放入小试管中， 置 于37C水浴。加入适当浓度的凝血酶悬液 0.2ml，开动秒表，轻 轻地摇动。 直至溶液停止流动或出现不溶颗粒， 记录时间为凝血 酶时间。重复 3 次，取平均值。 3P实验：取被检血浆0.2ml，放入小试管中，加入 1%荒酸鱼精蛋白溶液0.1ml。轻轻摇匀，室温下放置 30min。随后将试管轻轻摇动，有白色纤维或凝块出现的为阳性。浑浊均匀，无 白色纤维的为阴

3、性。 血小板计数：取血小板稀释液 0.38ml，放入小试管中。 用血红蛋白吸管吸取血液 20 l ，立即加入试管中，充分混匀。 用滴管取一小滴滴入计数室内，静置15mi n。用高倍镜计数，数5 个中方格中血小板数目， 乘以 1000，即为每立方毫米血小板数。经过多方讨论， 考虑到兔脑粉中含有的组织因子， 能够快速 凝血，通常生理实验中， 2-3ml 血液中滴加一滴兔脑粉浸液 2s 就能凝固，因此，将 4%的兔脑粉浸液改为 2%，确定具体的实验 方法为：2 手术操作（1 ）取 2 只家兔并称重，分成甲兔和乙兔。（2）甲兔和乙兔均从耳缘静脉注入 20%乌拉坦 5ml/kg 麻醉， 仰卧固定在家兔手

4、术台上。剪去颈部被毛，沿颈正中做切口，分 离皮肤与肌肉。暴露一侧颈总动脉，穿线，做颈总动脉插管。从 颈总动脉的三通管处放血 5 ml，迅速加入含0.45ml 3.8%枸橼酸 钠溶液抗凝的试管中。 2000rpm?？min 离心，取上层血浆备用。（3）甲兔从耳缘静脉注射 2%兔脑粉生理盐水溶液 2ml/kg 稀释至 30ml， 15min 内注完。重复上述放血步骤， 分离血浆备用。（4）30min 后，重复上述放血步骤，分离血浆备用。乙兔 从耳缘静脉注射生理盐水 2ml/kg ，分别在相应时间点按上述方法取血，分离血浆备用。(5) DIC指标的检测。本实验中的难点就在于给药部分， 所以在手术中注

5、射兔脑粉 浸液时， 速度的控制和给药量的控制都是十分关键的， 如果控制 不好，家兔就会在手术中死亡导致实验失败。第一次实验，按照正常的手术顺序进行手术，手术完成后， 抽取对应体重的兔脑粉浸液，从耳缘静脉进行注射，缓慢推注， 注射 1ml 之后，家兔出现剧烈反应， 20s 之后死亡。综合第一次实验结果， 直接从耳缘静脉注射， 药物浓度过高， 都是导致家兔死亡的原因。因此，要改变给药浓度，将对应体重 的兔脑粉浸液用生理盐水稀释至 30ml ，耳缘静脉注射。第二次实验，按照正常的手术顺序进行手术，手术完成后， 将稀释后的兔脑粉加入简易的输液器中， 控制滴速， 十分钟之后 提高滴速，提速后 30s 后

6、，家兔剧烈挣扎至死亡。综合第二次预 试结果， 滴速过快导致同时一时间血管中药物浓度过高， 发生凝 血反应，致使家兔死亡。通过前两次的实验，发现 15min 之内注 射完高浓度药物不可行， 极其容易发生凝血致使家兔死亡。 因此 决定延长注射时间，稀释药物浓度。第三次实验，手术完成后，从耳缘静脉进行生理盐水输液， 将对应体重的 2%兔脑粉浸液从输液器的滴壶处在 45min 内逐渐 加入，分别取家兔给药前，给药15min,给药30min,给药45min, 给药 60min 时的家兔血液，进行离心，取上层血清，检测方法是 用凝血酶时间和3P实验进行检测，发现家兔从 45min开始出现 弥散性凝血的表现。3 结论综合三次实验， 本实验难点就是如何保证家兔在给药期间的 存活情况。兔脑粉的快速凝血作用是我们之前就考虑到的， 但是， 家兔的死亡速度是我们始料不及的， 因此我们首先从药物浓度开 始调节，通过查询文献将 2%的兔脑粉浸液使用生理盐水稀释至 30ml，在15min注射完毕。通过输液器滴速 20滴/ml的计算， 要保证在 15min 将 30ml 的药物耳缘静脉给药， 就要在前 5min 控 制速度在 1ml/min ，中间 5min 控制速度在 2ml/min ，最后 5min 控制速度在 3ml/min ，开始实验后，在最后的 5min