实验诊断 第九章临床常见病原体检测

1、第九章第九章 临床病原体检测临床病原体检测 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 掌握掌握病原体耐药性检测的常用方法（药物掌握掌握病原体耐药性检测的常用方法（药物 敏感试验）。敏感试验）。 掌握乙型肝炎病毒标志物检测的临床意义。掌握乙型肝炎病毒标志物检测的临床意义。 掌握医院感染的概念。掌握医院感染的概念。 临床病原体检测标本采集方法及注意事项。临床病原体检测标本采集方法及注意事项。 熟悉医院感染的流行病学特点。熟悉医院感染的流行病学特点。 了解了解感染性疾病的病原体检测项目和临床应用。感染性疾病的病原体检测项目和临床应用。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 o 病原体耐药性检测的常用方法（药

2、物敏感试病原体耐药性检测的常用方法（药物敏感试 验）。验）。 o 乙型肝炎病毒标志物检测的临床意义。乙型肝炎病毒标志物检测的临床意义。 o 医院感染的概念。医院感染的概念。 o 病原体耐药性检测。病原体耐药性检测。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 临床病例临床病例-1 o 患者，患者，65岁，女性，既往有高血压病、糖尿岁，女性，既往有高血压病、糖尿 病。病。 o 发作性心悸发作性心悸20余天入院心内科。后出现尿急、余天入院心内科。后出现尿急、 尿痛。尿痛。 o 查体：查体：T36.5，P68次次/分，分，R18次次/分，分， Bp150/85mmHg；神志清；双肺呼吸音清，神志清；双肺呼吸

3、音清， 未闻及干湿性啰音；心率未闻及干湿性啰音；心率68次次/分，律齐，未分，律齐，未 闻及杂音；双下肢无水肿，双肾区无叩击痛。闻及杂音；双下肢无水肿，双肾区无叩击痛。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 o 尿常规：白细胞尿常规：白细胞1，白细胞：，白细胞：37.3 /HPF，细细 菌计数菌计数5134.10/ul。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 第一节、标本采集、运送及检查方法第一节、标本采集、运送及检查方法 临床微生物检查的基本程序临床微生物检查的基本程序 o 医生、护士、病人、检验师：正确采集、运医生、护士、病人、检验师：正确采集、运 送标本。送标本。 o 检验科：直接镜检、免疫

4、学和分子生物检测、检验科：直接镜检、免疫学和分子生物检测、 病原体分离培养鉴定、药敏实验病原体分离培养鉴定、药敏实验报告结报告结 果。果。 o 医生：明确诊断、合理用药。医生：明确诊断、合理用药。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 一、标本采集的基本原则一、标本采集的基本原则 o 根据病史与临床表现确定标本采集的类型与根据病史与临床表现确定标本采集的类型与 部位，尽量采集病变明显部位标本。部位，尽量采集病变明显部位标本。 o 在发病的早期或急性期采集标本，最好在抗在发病的早期或急性期采集标本，最好在抗 生素使用前（如使用过抗生素应在申请单上生素使用前（如使用过抗生素应在申请单上 注明）。注明

5、）。 o 采集标本防止污染，并置于无菌容器，加盖采集标本防止污染，并置于无菌容器，加盖 密封、立即送检。密封、立即送检。 o 标本必须贴上标签，与检验申请单同时送检。标本必须贴上标签，与检验申请单同时送检。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 血液标本的采集血液标本的采集 o 适应症：疑似菌血症、败血症或脓毒血症的适应症：疑似菌血症、败血症或脓毒血症的 病人。病人。 o 一般在抗生素使用前，于发热初期或高峰期一般在抗生素使用前，于发热初期或高峰期 采血。采血。 o 24小时内采血小时内采血23次可提高阳性率。次可提高阳性率。 o 血液与培养基的比例为血液与培养基的比例为1：10，一般成人血，一

6、般成人血 量量510ml，婴儿，婴儿1-2ml。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 尿标本的采集尿标本的采集 o 无菌采集中段尿无菌采集中段尿 o 排尿困难者考虑导尿排尿困难者考虑导尿 采集标本。采集标本。 o 如考虑厌氧菌感染，如考虑厌氧菌感染， 采取膀胱穿刺法采集采取膀胱穿刺法采集 标本。标本。 o 24小时尿沉渣。小时尿沉渣。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 粪便标本采集粪便标本采集 o 自然排便，挑取脓、血或粘液部分于清洁容自然排便，挑取脓、血或粘液部分于清洁容 器中送检。器中送检。 o 排便困难者，采用直肠拭子采集。排便困难者，采用直肠拭子采集。 o 怀疑霍乱弧菌感染引起的腹泻

7、，立即接种或怀疑霍乱弧菌感染引起的腹泻，立即接种或 将标本置于碱性蛋白胨或卡将标本置于碱性蛋白胨或卡-布运送培养液布运送培养液 送检。送检。 o 传染性腹泻应连续送检传染性腹泻应连续送检3次。次。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 呼吸道标本采集呼吸道标本采集-痰标本的采集痰标本的采集 o 采集时间：晨痰，且采集时间：晨痰，且 在取痰前用清水反复在取痰前用清水反复 漱口。漱口。 o 方法：（方法：（1）自然咳痰）自然咳痰 法：（法：（2）气管镜下采）气管镜下采 集法；（集法；（3）气管穿刺）气管穿刺 法。法。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 胸腹水等穿刺液标本胸腹水等穿刺液标本 o 标本

8、采集应在用药前或停止用药后标本采集应在用药前或停止用药后12天天 后进行。后进行。 o 用无菌注射器抽取可疑标本，分别置于抗凝用无菌注射器抽取可疑标本，分别置于抗凝 与不抗凝无菌容器中立即送检。与不抗凝无菌容器中立即送检。 o 怀疑厌氧菌感染，采用床边接种为宜。怀疑厌氧菌感染，采用床边接种为宜。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 脓液及创伤感染分泌物标本脓液及创伤感染分泌物标本 o 开放性脓肿及脓性分泌物：用无菌棉纤采取开放性脓肿及脓性分泌物：用无菌棉纤采取 脓液或病灶深部分泌物，置于斯氏运送培养脓液或病灶深部分泌物，置于斯氏运送培养 基送检。基送检。 o 封闭性脓肿：局部消毒后，用注射器抽

9、取，封闭性脓肿：局部消毒后，用注射器抽取， 怀疑厌氧菌感染，应隔绝空气采集。怀疑厌氧菌感染，应隔绝空气采集。 o 大面积烧伤的创面分泌物：用无菌棉纤多点大面积烧伤的创面分泌物：用无菌棉纤多点 采取脓液或分泌物，置于无菌试管中送检。采取脓液或分泌物，置于无菌试管中送检。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 二、检查方法二、检查方法 o直接显微镜检查直接显微镜检查 o病原体的分离培养与鉴定病原体的分离培养与鉴定 o病原体核酸的检测病原体核酸的检测 o血清学检测血清学检测 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 阳性球菌（阳性球菌（GS） 真菌孢子真菌孢子 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 明德仁爱明

10、德仁爱 博学至善博学至善 墨汁染色找墨汁染色找 新型隐球菌新型隐球菌 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 病原体分离培养与鉴定病原体分离培养与鉴定 o 明确感染病原体。明确感染病原体。 o 为临床提供体外抗微为临床提供体外抗微 生物药物敏感试验结生物药物敏感试验结 果。果。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 病原体核酸的检测病原体核酸的检测 o 聚合酶链式反应：聚合酶链式反应： 扩增病原体微生物扩增病原体微生物 特异的特异的DNA或或 RNA片段。片段。 o 探针杂交法：通过探针杂交法：通过 已知序列的探针与已知序列的探针与 病原体的核苷酸杂病原体的核苷酸杂 交，用以了解病原交，用以了解病原

11、 体的有无体的有无。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 第二节第二节 病原体耐药性检测病原体耐药性检测 o 抗微生物药物敏感试验抗微生物药物敏感试验 (antimicrobial susceptibility test， AST)对敏感性不能预测的临床分离株进对敏感性不能预测的临床分离株进 行药敏试验，以指导临床选择治疗药物。行药敏试验，以指导临床选择治疗药物。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 体外抗菌药物敏感试验的方法体外抗菌药物敏感试验的方法 o 体外抗菌药物敏感体外抗菌药物敏感 试验常用方法有试验常用方法有: n 稀释法（稀释法（dilution test） 明德仁爱明德仁爱 博学

12、至善博学至善 体外抗菌药物敏感试验的方法体外抗菌药物敏感试验的方法 o 体外抗菌药物体外抗菌药物 敏感试验常用敏感试验常用 方法有方法有: l纸片扩散法纸片扩散法 （Kirby-Bauer test） 抗生抗生 素素 移液移液 管管1 1 浑浊浑浊 浑浊浑浊 浑浊浑浊 浑浊浑浊 浑浊浑浊 浑浊浑浊 M I C 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 药敏试验结果的解释（药敏试验结果的解释（1 1） o 敏感（敏感（Susceptible）：表示测试菌能被测定）：表示测试菌能被测定 药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所 抑制或杀灭。抑制或杀灭。 o 耐药（

13、耐药（Resistant）：表示测试菌不能被测定）：表示测试菌不能被测定 药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所 抑制或杀灭，治疗无效。抑制或杀灭，治疗无效。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 药敏试验结果的解释（药敏试验结果的解释（2 2） o 中介中介 (Intermediate) : 该范围作为敏感与耐药该范围作为敏感与耐药 之间的缓冲区，避免由之间的缓冲区，避免由 于微小技术误差影响实于微小技术误差影响实 验结果。验结果。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 o 临床怀疑有厌氧菌所致的肺部感染，最好采取哪临床怀疑有厌氧菌所致的肺部感染，最好采

14、取哪 种方法取材：种方法取材： A. A. 自然咳痰自然咳痰 B. B. 胃内采痰胃内采痰 C. C. 支气管镜下采痰支气管镜下采痰 D. D. 咽拭子取痰咽拭子取痰 E. E. 气管穿刺取痰气管穿刺取痰 E question 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 第四节第四节 病毒性肝炎标志物检查病毒性肝炎标志物检查 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 甲型肝炎病毒标志物检测甲型肝炎病毒标志物检测 o 甲型肝炎病毒（甲型肝炎病毒（Hepatitis A virusHepatitis A virus、HAVHAV） 是一种微小核糖核酸病毒，无包膜，核心为是一种微小核糖核酸病毒，无包膜，核心为 单

15、股正链单股正链RNARNA。 o HAVHAV可分为可分为4 4个基因型，但只有一个血清型，个基因型，但只有一个血清型， 只形成一个抗原抗体系统。只形成一个抗原抗体系统。 o HAVHAV为甲型病毒性肝炎的病原体，主要通过为甲型病毒性肝炎的病原体，主要通过粪粪 口口途径传播。途径传播。 o 临床表现为急性黄疸肝炎。临床表现为急性黄疸肝炎。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 【Clinical significance】 o 抗抗HAV - IgM在在HAV感染后感染后1-2周内出周内出 现，为急性甲型肝炎的诊断指标之一。现，为急性甲型肝炎的诊断指标之一。

16、o 抗抗HAV - IgG是一种保护性抗体，阳性表是一种保护性抗体，阳性表 示过去曾受过示过去曾受过HAV感染，可用于甲肝的流感染，可用于甲肝的流 行病学调查。行病学调查。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 乙型肝炎病毒标志物检测乙型肝炎病毒标志物检测 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 临床病例临床病例-2-2 患者，男，患者，男，4949岁。岁。 主诉：间断性上腹不适伴食欲不振、乏力主诉：间断性上腹不适伴食欲不振、乏力1010年年。 现病史：患者现病史：患者1010年前始出现上腹部不适，以右上腹为甚，伴食欲不振、年前始出现上腹部不适，以右上腹为甚，伴食

17、欲不振、 乏力，症状时轻时重，未予进一步诊治。乏力，症状时轻时重，未予进一步诊治。1 1年前患者自觉上述症状加重，年前患者自觉上述症状加重， 伴双下肢水肿、腹胀，口服利尿剂后好转，以后间断服用安体舒通、速伴双下肢水肿、腹胀，口服利尿剂后好转，以后间断服用安体舒通、速 尿治疗。尿治疗。1 1月来上述症状进行性加重，尿量较以往明显减少。月来上述症状进行性加重，尿量较以往明显减少。 体格检查：体格检查：T36.8T36.8，P98P98次次/ /分，分，R20R20次次/ /分，分，Bp80/50mmHgBp80/50mmHg；营养中等，；营养中等， 神志清楚、面色晦暗；皮肤黏膜及巩膜无黄染，胸前可

18、见神志清楚、面色晦暗；皮肤黏膜及巩膜无黄染，胸前可见3 3枚蜘蛛痣，有枚蜘蛛痣，有 肝掌；双肺未闻干湿啰音；心率肝掌；双肺未闻干湿啰音；心率9898次次/ /分，心律齐，各瓣膜区未闻及杂音；分，心律齐，各瓣膜区未闻及杂音； 腹部膨隆，腹壁静脉无明显曲张，肝肋下未及，脾下腹部膨隆，腹壁静脉无明显曲张，肝肋下未及，脾下4cm4cm，边缘钝，质中，边缘钝，质中， 肝脾区叩击痛，腹部移动性浊音（肝脾区叩击痛，腹部移动性浊音（- -），肠鸣音活跃，），肠鸣音活跃，8 8次次/ /分；脊柱四肢分；脊柱四肢 活动正常；双下肢可见凹陷性浮肿。活动正常；双下肢可见凹陷性浮肿。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善

19、 临床病例临床病例-2-2 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 乙型肝炎病毒血清标记物检测乙型肝炎病毒血清标记物检测 o HBsAg（+）表示肝中有）表示肝中有HBV 见于：见于：乙型肝炎潜伏期和急性期。乙型肝炎潜伏期和急性期。 慢性迁延性肝炎，慢性活动性肝炎，慢性迁延性肝炎，慢性活动性肝炎， 肝硬化，肝癌。肝硬化，肝癌。 慢性慢性HBsAgHBsAg携带者。携带者。 o Anti-HBs或抗或抗HBs： 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 乙型肝炎病毒血清标记物检测乙型肝炎病毒血清标记物检测 o HBeAg： 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 乙型肝炎病毒血清标记物乙型肝炎病毒血清标记物

20、明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 o Anti-HBc IgM o Anti-HBc IgG o HBeAg o Anti-HBe o HBV-DNA 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 【Clinical significance】 HBsAg 抗抗-HBs HBeAg 抗抗-HBe 抗抗-HBc 临床意义临床意义 急性或慢性感染急性或慢性感染(大三阳大三阳) +-+-+ + 乙肝后期或慢性感染乙肝后期或慢性感染(小三阳小三阳) - - + +- - 潜伏期或急性乙肝早期潜伏期或急性乙肝早期 -+ 痊愈或恢复期痊愈或恢复期,有免疫力有免疫力 - - + + + - - 痊愈痊愈,有免疫力有

21、免疫力 - - - - - - - - - - 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 丙型肝炎病毒标志物丙型肝炎病毒标志物 抗抗-HCV： 抗抗-HCV IgM ： 抗抗-HCV IgG ： 阳性表明体内有阳性表明体内有HCV感染。感染。 o HCV-RNA ：阳性提示阳性提示 HCV复制活跃，传染复制活跃，传染 性强性强 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 丁型肝炎病毒标志物（丁型肝炎病毒标志物（HDVHDV） 丁型肝炎病毒丁型肝炎病毒 o 是一种是一种缺陷病毒缺陷病毒，必需有，必需有HBV或其他嗜肝或其他嗜肝 DNA病毒（如病毒（如WHV）的辅助，输血和注）的辅助，输血和注 射传播、母婴传播

22、、密切接触传播射传播、母婴传播、密切接触传播 anti-HDV IgM: 急性感染急性感染 慢性肝炎活动慢性肝炎活动 anti-HDVIgG: 非保护性抗体非保护性抗体 HDVRNA: 病毒复制的标志病毒复制的标志 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 戊型肝炎病毒标志物（戊型肝炎病毒标志物（HEVHEV） u萼状病毒（萼状病毒（Calicivirus）科）科 u特异性特异性IgM和和IgG抗体抗体 近期感染和早期诊断近期感染和早期诊断 急性感染病人急性感染病人 亚临床感染者亚临床感染者 粪口途径粪口途径 密切接触传播密切接触传播 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 o 当血清中当血清中HBsA

23、gHBsAg、HBeAgHBeAg阳性时，说明：阳性时，说明： A. A.无传染性无传染性 B. B.病情比较稳定病情比较稳定 C. C.曾感染乙型肝炎病毒曾感染乙型肝炎病毒 D. D.具有免疫力具有免疫力 E. E.具有较大传染性具有较大传染性 E question 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 第五节第五节 性传播疾病病原体检测性传播疾病病原体检测 o 性传播性疾病（性传播性疾病（sexually transmitted disease，STD）：是）：是 指通过各种性接触而传播的侵犯皮肤、指通过各种性接触而传播的侵犯皮肤、 性器官及全身多脏器的疾病，简称性病性器官及全身多脏器的疾病

24、，简称性病 （venereal disease） 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 重要的性病及病原体重要的性病及病原体 淋病淋病 淋球菌淋球菌 梅毒梅毒 梅毒螺旋体梅毒螺旋体 艾滋病艾滋病 人类免疫缺陷病毒人类免疫缺陷病毒 非淋球菌尿道炎非淋球菌尿道炎 解脲支原体、沙眼衣原体等解脲支原体、沙眼衣原体等 生殖器疱疹生殖器疱疹 单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒 尖锐湿疣尖锐湿疣 人乳头瘤病毒人乳头瘤病毒 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 淋病病原体的检测淋病病原体的检测 o 直接显微镜检查：直接显微镜检查： 多形核白细胞内见多形核白细胞内见 o 分离培养和鉴定：分离培养和鉴定： 明德仁爱明德仁爱 博

25、学至善博学至善 梅毒病原体的检测梅毒病原体的检测 传染源：病人传染源：病人 传播途径：传播途径： 性行为性行为获得性获得性 （后天性）梅毒（后天性）梅毒 垂直传播垂直传播先天性先天性 梅毒（梅毒儿）梅毒（梅毒儿） 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 艾滋病病原体检测艾滋病病原体检测 o 直接显微镜检查与分离培养：临床较少采用。直接显微镜检查与分离培养：临床较少采用。 o HIV-RNA检测：排除假阳性可确诊。检测：排除假阳性可确诊。 o HIV抗体检测：抗体检测：ELISA等为过筛实验，等为过筛实验， Western blot为确诊实验。为确诊实验。 明德仁

26、爱明德仁爱 博学至善博学至善 第六节第六节 医院感染医院感染 医院感染医院感染(nosocomial infection)(nosocomial infection)是指患者在是指患者在 入院时既不存在，亦不处于潜伏期，而在医院内入院时既不存在，亦不处于潜伏期，而在医院内 发生的感染，包括医院内获得而在出院后发病的发生的感染，包括医院内获得而在出院后发病的 感染。随着医疗技术发展，各种侵入性操作和器感染。随着医疗技术发展，各种侵入性操作和器 官移植推广，化疗、糖皮质激素、抗生素等广泛官移植推广，化疗、糖皮质激素、抗生素等广泛 应用，医院感染是当今医学领域中的重要问题。应用，医院感染是当今医学领域中的重要问题。 明德仁爱明德仁爱 博学至善博学至善 病原体来源于住院病人、病原体来源