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文档简介
1、一、常用溶液的配制(一)溶液配制注意事项1药品要有较好的质量 试剂分为优级纯(保证试剂, Guaranteed reagent, GR)、分析试剂( Antalytical reagent ,AR)化学纯( Chemical pure,CP) 和实验试剂( Laboratory reagent, LR)等等。工业用的化学试剂,杂质较多, 只在个别情况下应用,如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。2药品称量要精确。3配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水, 比电阻值在 50 万欧姆以上, pH 在 5.57.0 之间才可应用, 在组织培养等特殊用途时应注意此项要求, 配制一般 化验用溶液只要求
2、用双蒸馏水或去离子水。配好后的溶液,应立即除菌处理(如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质) ,以 防杂菌生长。(二) 0.067 (1/15 )Mol/L 磷酸缓冲液11/15Mol/L 磷酸二氢钾溶液的配制:称取磷酸二氢钾(KH 2PO4,AR)9.08g,用蒸馏水溶解后,倾入 1 000ml 容量瓶内,再稀释至刻度( 1 000ml)。2 /15Mol/L 磷酸二氢钠溶液的配制: 称取无水磷酸氢二钠 (Na2HPO4,A.R. ) 9.47g(或者 Na2HPO42H2O 11.87g)用蒸馏水溶解后,放入 1 000ml 容量瓶内, 再加蒸馏水稀释至刻度( 1 000ml )。3按附表的比例,配
3、制成不同 pH 值的缓冲溶液。附表 1 磷酸盐缓冲液配制法(单位:毫升)1/15Mol/L1/15Mol/LKH2PO4pH1/15Mol/LNa2HPO41/15Mol/LKH 2PO4pHNa2HPO45.88.092.07.166.623.45.99.990.17.272.028.06.012.287.87.376.823.26.115.384.77.380.819.26.218.681.47.584.115.96.322.477.67.687.013.06.426.773.37.789.410.66.531.868.27.891.58.56.637.562.57.993.26.86.7
4、43.556.58.894.75.36.849.650.48.195.84.26.955.444.68.297.03.07.061.138.98.498.02.0(三) 0.15Mol/L PB液附表 2 0.15Mol/LPB液配制法pH0.15Mol/L Na 2HPO4( ml)0.15Mol/L NaH 2PO4(ml)6.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.0Na2HPO42H2O 分子量 =175.050.15Mol/L溶液含 26.7g/L 。Na2HPO412H2O
5、分子量 =358.220.15Mol/L溶液含 53.7g/L 。NaH 2PO4H2O分子量 =138.000.15Mol/L溶液含 20.7g/L 。NaH 2PO4 2H2O 分子量=156.030.15Mol/L溶液含 23.4g/L 。四) 0.2Mol/L PB 缓冲液附表 3 0.2mol/L PB 缓冲液配制法pH0.2 Mol/L Na 2HPO4( ml)0.2Mol/L NaH 2PO4(ml )5.88.092.06.012.387.76.218.581.56.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.
6、481.019.07.687.013.07.891.58.58.094.75.30.2Mol/L Na 2HPO42 H2O溶液 35.61g/LNa2HPO412 H2O 溶液含 71.64g/L0.2Mol/LNaH 2PO4 H2O 溶液含 27.60g/LNaH 2PO42 H2O 溶液含 31.21g/L欲配 0.1Mol/L PB 缓冲液则在 0.2Mol/L PB 缓冲液的基础上加 H2O稀释 1 倍即 可。欲配制 PBS 液时,则在溶液中加 0.85的 NaCl 溶液即可。(五)无钙镁离子磷酸缓冲盐水( PBS)( 0.15Mol/L PH 7.2 )NaCl8.0gKCl0.
7、2gNa2HPO 41.15g(如为 Na2HPO4 12H2O,则为 2.89g)KH 2PO40.2g将上述试剂依次溶于 1 000ml 去离子水中,完全溶解后,115 高压灭菌10min15min ,存在 4冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤 细胞培养物。(六)硼酸盐缓冲液( Borate saline buffer ) 1硼酸( 3BO3)0.2Mol/L 硼酸:硼酸 12.37g 加水至 1 000ml 。2硼砂( Na2B4O7)0.05Mol/L 硼砂:硼砂 19.07g 加水至 1 000ml 。附表 4 不同 pH的 0.2Mol/L 硼酸缓冲液配制法pH0.
8、05Mol/L 硼砂 (ml)0.2Mol/L 硼酸 ( ml )pH0.05Mol/L 硼 砂(ml)0.2Mol/L 硼 酸(ml)7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.08.03.07.09.08.02.0七)巴比妥缓冲液1 pH8.2 离子强度 0.05Mol/L 巴比妥缓冲液 巴比妥钠47.6g蒸馏水3 000ml1.17N HCl55.0ml(1.17 N HCl=193ml 浓 HCl 加 1 807ml 蒸馏水) 将 4.76g 巴比妥钠溶于 3 000ml 蒸馏水。 加 1.17 N HCl 55ml 。 用
9、 HCl 调节 pH 到 8.2 ,并加蒸馏水至 4 265ml 。2 pH8.4 0.06Mol/L 巴比妥缓冲液 巴比妥1.84g巴比妥钠10.30g加蒸馏水至1 000.00ml3 pH8.6 0.06Mol/L 巴比妥缓冲液 巴比妥1.66g巴比妥钠12.76g加蒸馏水1 000.00ml(八) 0.2Mol/L 醋酸盐缓冲液 见表附表 5附表 5 0.2Mol/L 醋酸盐缓冲液配制法pH0.2Mol/LTris(ml)0.1Mol/LHCl (ml)pH0.2Mol/LTris(ml )0.1Mol/L HCl ( ml )233723379.108.952558.067.90252
10、7.58.928.76257.57.967.822530.08.758.602510.57.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.57.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.5九)三羟甲基甲烷盐酸缓冲液( Tris HCl 缓冲液)不同 pH, 0.05Mol/L25ml0.2Mol/L 三羟甲基氨基甲烷加 ml0.1NHCl ,加水稀释至 100ml( 见下表) 附表 6 Tris HCl 缓冲液配制法pH0.2Mol/L0.1N
11、HClpH0.2Mol/L0.1NHCl2337Tris(ml)(ml)2337Tris(ml)(ml)9.108.962558.057.902527.58.928.78257.57.967.822530.08.748.602510.07.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.07.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.58.238.102522.57.207.052545.08.148.002525.025三羟甲基氨基甲烷( Tr
12、is )分子量 =121.140.2Mol/L 三羟甲基氨基甲烷: Tris24.23g ,加水至 1 000ml 。0.1NHCl :取 HCl8.6ml ,加水至 1 000ml 。 (十) 0.5Mol/L pH9.5 碳酸盐缓冲液NaHCO 33.70gNa 2CO30.60g溶于 600.00ml 蒸馏水中即得。 不用时塞紧瓶塞,以免吸收空气中二氧化碳使 PH 下降。最好小量配制。 (十一)甘油磷酸缓冲液1配制 pH8.0 磷酸缓冲液0.1Mol/L Na 2HPO494.50ml0.1N NaH 2PO45.50ml混合即可29份甘油与 1份 pH8.0磷酸缓冲液混合,即为甘油磷酸
13、缓冲液。 用途:用于免疫荧光试验。(十二) Hanks 液1贮存液NaCl80.00gKCl4.00gNa2HPO412 H2O1.52gKH 2PO40.60g葡萄糖4.00g0.4酚红液50.00ml双馏水加至100.00ml115高压灭菌 15min ,冰冻保存。2工作液贮存液双馏水115高压灭菌 溶液呈橙红色) 。1份9份15min 。临用时用灭菌的 5.6NaHCO 3液调 pH 值至 7.2左右(十三)萘(钠)氏试剂(Nessler s reagent )配方 1:氯化汞6.0g碘化钾12.4g20NaOH30ml加蒸馏水至100ml配方 2:碘化汞11.5g碘化钾8g蒸馏水50m
14、l(完全溶解后)过滤,加20 NaOH 50ml 。用途:检测溶液中氨离子。(十四)阿氏( Alsever s )液葡萄糖2.05g柠檬酸钠0.80g氯化钠0.42g蒸馏水100ml溶解后, 以 10%柠檬酸调节 pH 至 6.1,过滤,分装,(十五)青、链霉素混合液(简称S P液或双抗液)青霉素( 40 万 U)5支10磅 10min 灭菌, 4保存。链霉素( 200 万 g)1支分别溶于 100ml 灭菌无离子水中或共同溶于 200ml 灭菌无离子水中,混合 后分装小瓶,置 -10-20冰箱保存备用( 1 万单位 g/ml )。临用时, 按 1% 的量加入营养液或其他溶液中, 最后浓度是青
15、霉素 100U/ml ,链霉素 100ug/ml 。(十六)洗液(清洁液) 配方 1:重铬酸钾蒸馏水浓硫酸将重铬酸钾加入蒸馏水中,150g300ml3 000ml 使之自然溶解或水浴溶解,亦可在大坩埚中加热溶解,然后慢慢加入浓硫酸,边加边搅拌,见发热过剧则稍停,冷却后再继续加。此 为强洗液。盛清洁液的容器要坚固, 上加厚玻璃盖, 操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、 戴 上眼镜和厚胶皮手套,以保安全。洗液一旦变绿, 表示铬酸已经还原, 失去了氧化能力,不宜再用。如将这样洗 液加热,再加适量重铬酸钾,又可重新使用。配方 2:浓硫酸50%蒸馏水50%重铬酸钾5%此为中等强度洗液。配方 3:重铬酸钾100
16、g蒸馏水1 000ml加热溶解,冷却后缓慢加入工业硫酸100ml此液为弱洗液, 为棕红色。 使用此液时, 必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净, 经自来水冲洗,沥干然后才能浸入,否则该洗液很快失效。、犊牛血清的制备选择健康犊牛, 一般为初生至六个月龄, 最好是刚出生尚未吸乳的公犊牛, 采 血前 12h 不予喂饲,仅予水喝。采血时采用颈动脉,动脉插管,乳胶管、盛血容器 均应洗净灭菌。将采血筒中放入少量Hank s 液,将胶管连接至玻璃管(弯)放入瓶口,然后瓶口包以硫酸纸、白布和普通纸,系紧。插管也用硫酸纸包扎系好。采血前将犊牛固定, 最好放在手术台或固定架上固定好头部和四肢, 局部剪毛 消毒,切开,
17、剥离颈动脉,止血钳夹好,消毒,切开动脉管壁,插入插管,另一助手轻摇采血筒中的 Hank s 液以湿润瓶壁,这样有利于凝血,也有利于血凝块与瓶 壁的分离。这时术者即可放血。每个采血筒内采适量不宜超过总容量的1 3,装的过多则出血清少。采血时还须注意动脉插管口不宜太细,放血速度也不宜过快, 过快过慢均可引起溶血。盛血的采血筒应置室温(天热时)或温箱中,温室(天冷时)中,静置 4h 以 上,待血液凝固后放入 4冰箱或冷库中过夜。然后在无菌间,小心(不要摇晃) 倒出或用虹吸法吸出上清液,如混有红血球,则将这部分血清以 2 000r/min 离心 10min 15min 注意无菌操作,收集上清(略有溶血
18、的血清也可应用)。一头犊牛可采血 1 500ml 3500ml ,约能分离出一半血清。血清分离后,置 56水浴中灭活 30min 以破坏补体和某些传染的病毒(也可 以不灭活)。灭活后可进行分装,分装后需作菌检。菌检结果如有污染,可用赛世 滤器过滤。有的材料报道,有的血清不灭活要比灭活的血清效果好。除近期要用的血清可置 4保存外,其余放低温冰箱中保存。 最好采用 35 头犊牛血清先分别灭活,菌检后再混合、分装、保存。混合血 清可以避免个别犊牛具有抑制细胞生长的物质或缺少某些生长因子的缺陷。三、常用化合物的分子量及当量附表 7常用化合物的分子量及当量化合物分子式分子量当量盐酸HCl36.4636.
19、46氢氧化钠NaOH40.0040.00氢氧化钾KOH56.1156.11草酸H2C2O490.0445.02氯化钠NaCl58.4458.44氯化钾KCl74.5674.56硫酸H2SO498.0849.04醋酸CH 3COOH60.0560.05磷酸H3PO498.0032.67磷酸二氢钠NaH 2PO 4119.98磷酸氢二钠Na2HPO 4141.96磷酸二氢钾KH 2PO4136.09磷酸氢二钾K 2HPO4174.18二乙胺四乙酸二钠C10H 14N 2O 8Na2372.24186.12(EDTA Na2)硝酸HNO 363.0163.01碘I2253.81126.90碘化钾KI
20、166.01166.01硼酸H3BO361.8320.61碳酸氢钠NaHCO 384.0184.01碳酸钠Na 2CO 3105.9953.00硼砂Na2B 4O7381.43四、克分子浓度用 1L(1 000ml )溶液中所含溶质的克分子数表示溶液的浓度叫做克分子浓度。 通常用字母 M 表示。物质的量用做单位来表示,在数值上与物质的分子量相同, 这个量叫做克分子。例如氯化钠的分子量为58.44,则 1 个克分子氯化钠的重量是58.44g。将 58.44g 氯化钠溶解于水,配制成 1L 溶液,就是 1Mol/L 氯化钠溶液。 NaH2PO4H2O 的分子量 为 138.0,则 其 1 个克分子
21、的重量 是 138.0 克。 将 69.0gNaH2PO4H2O 溶解于水,配制成 1L 溶液,就是 0.5Mol/L 磷酸二氢钠溶液。五、离心机与离心力习惯上把每分钟 4, 000转的离心机称为低速离心机,每分钟20,000 转的离心机称为高速离心机, 这类离心机有冷冻装置。 每分钟 20,000 以上的离心机称为超速离心机, 为了减少空气的摩擦阻力, 它的转头是在真空中运转的。 由于许多样 品(如病毒等)都是极小的颗粒或溶质,它们在重力场中沉降速度极慢,同时还存 在扩散作用,只有超速离心所产生的强大的离心力场,才有可能它们彼此分离开。过去的资料中, 所用离心条件多用转数表达, 现在国际资料中已经改用相对离 心力( Relative Centrifugal Force , RCF)表示,因为离心力不仅为转速的函数,也 是离心半径的函数。转速相同时
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