专题二-微生物的培养与应用-知识点总结

1、专题二微生物的培养与应用 知识点2.1微生物的实验室培养1 .培养基是人们按照微生物对营梓质的而同需求,配制由供其电Mm的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。2 .培养基按物理性质分为液但侨基（应用于工业或生活生产）、回邳养基（应用于微生物的分离和鉴定）和半固件培养隼（常用于观 察微生物的运动及菌种保藏等）。按成分分为管洞养基（用成分已知 的化学物质配制而成，成分种类比例明确，用于微生物的分离鉴定） 和叵承养基（用化学成分不明的天然物质配制而成，用于实际工业 生产）。按用途分为审福养基（加入某种化学物质，以抑制不需要微 生物生长，促进所需微生物的生长）和鉴别暗理（根据微生物的特点，加入某种指

2、示剂或化学药品，来鉴别不同类别的微生物）。3 .培养基的化学成分包括：水Q无机盐、,碳源、氮源和生长因子等。.碳源包括CG、NaHC优叵法源和糖类、 石油、花生粉饼等花呵源。异养微生物只能利用有叵嗨。单质碳不能作为碳源。氮源包括此、NH、NO-、NH+等叵泰源和蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白腺等舟僚源。只有固囱呼物才能利用N2O4 .培养基还需满足|pH、特殊营养物质和氧气的再求。例：培养乳酸杆 菌需添加维生素；培养霉菌需将 pH调至酸性；培养细菌需将 pH调至 中性或微碱性；培养厌氧型微生物需提供无氧的条件。5 .无菌操作技术包括：对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进 行清洁和消毒。将

3、用于微生物培养的器皿与神用具和培养基至H 具进行灭菌。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精 匚 灯火焰附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周匚 围的物品中接触。6 .消毒与灭菌的区别是：消毒指使用较为温不叵型或化学方法仅杀 死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽抱科抱子）| ,包括反帮毒法,啡!邳法（酒精、氯气、石炭酸）和紫外线消毒法。灭菌指使用麻硒化因素杀死物体内外所有粗微生物，包括株口抱和抱子包括咂可菌、干眄西、高压惜汽灭菌；7 .灭菌方法：苗种环、接种针、试管口等同用灼烧灭菌法；玻璃| 器皿、金属用具等使用干热灭菌法,所用器械是干热灭菌箱；培养 匚 基

4、、无菌水中使用高压蒸汽灭菌法,所用器械是高压蒸汽灭菌锅； 表面灭菌和空气灭菌等他用紫外线灭菌法,所用器械是紫外灯。8 .制作牛肉膏蛋白腺固体培养基（1）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。（2）倒平板操作的步骤包括：将灭过菌的培养皿放在酒精。火焰旁的桌面上，出ED装有培养基的锥形瓶，左手画1帛塞。将锥形瓶 的瓶口延速通过火焰（恂烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基）。将培养皿打开一条用大于瓶口的卷隙,再将锥形瓶中的培养基（约而工20mL）倒入培养皿，立即盖上培养皿的皿盖。等待平板冷却凝固然 后，将平板子过来创置,使培养皿盖在下、皿底在上（目的：使培养 口 基表面的水分用好地挥发,又可以防止

5、皿盖上的水珠落入埼养基，造 一 成污染）。9 .倒平板时若不慎将培养基溅在皿盖与皿底上，则这个平板不能用来 培养微生物，原因是空代中的微生物会在皿盖与皿底上生长。一 io.纯化大肠杆菌的原理是：用M板划线诔和用释涂布平板谓种,使聚集在一起的微生物分M成单个细胞，川而能在培养基表面形成单个 的菌落（生态学上称种叵 ,以达纯化菌种的目的。ii.平板划线操作时第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环的原因是：前者避免隔而上可能存在的微生物污染培养物，后杀死上次|划线残留在环上的菌种，优菌种逐渐变少以便得到单个菌落。在划线 操作结束时，仍然需要灼烧接种环的原因是及时杀死接种环上残留的 菌种，避免细菌忖而境

6、和感染操作者。在恂烧接种环之后,要等其 冷却后再进行划线的原因是避免接种环温度太高而杀死菌种。 一 12.涂布平板操作的步骤包括：将涂布器浸在盛有酒精曲1冲中。 取少量菌液，滴加到培养基表面。将沾有少量酒精的涂布器在火席上引燃，待棺精燃尽后，冷却810s。用除布器用菌液均匀地涂布在培养基表面。13.菌种的保存：频繁使用，临时保存接种到固体群面培养基，目4c下保存。长期保存菌种用甘油管藏的方法 2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1 .尿素是重要的农业相，不能直接被植物吸收。土壤中有一类细菌 能合成麻囤 将尿素分解成氨,限植物吸收利用。尿素最初是从人的 m却发现的。2 .实验室中微生物筛选的

7、原理是：人为提供有利于目的而株生长叫条 件（包括营养、温度、 PH等），同时抑制或阻止司他微生物生长。3 .在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其 他种类微生物生长的培养基，称作选诉封基。例如，培养基中不加 入商机物中以选择培养自养微生物;培养基中不加入氮元可以选 择培养能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选将培养金黄色葡萄球 菌等。4 .测定微生物数量的常用方法有稀棒涂布平板法不逅板布直接计数。5 .稀释涂布平板法常用来统计样品中活恒!目。原理是：当样品的 稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落，来源于样品闹液中 的一个活菌。|统计平板上的菌落数，就能推测由样品中大约含有

8、多少 活菌。为了保证结果准确，一般选择国个菌落数在|30300|的平板进行计数，并取而匀值。6 .统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，同因是当两个或多个细胞一连在一起帆 平板上看到的只是一个菌落，因此，统计结果一般用菌 落数而不是活菌数来表示。7 .设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影 响，提高实验结果的可信度。对照实验是指除了被测谎的条件以他, 其他条件都相同的实验,其作用是比照试验组，排除任何其他可能原 因的干扰，证明确实是所啊试的条件引前相应的结果。8 .实验设计包括叫验方案，忖需仪器、材料、用具和药品，具体的实 施步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。9 .土壤取样：

9、铲去表层土，在距地表约 3cm的土壤层从富含有巨大 潮湿、pH= 7的土壤中取样。10 .胖品的稀释程度料直接影响平板上生长的菌落数目。在实际操作中，通常选用一定稀释范围（细匚|选用104、105、106; |放线菌般选用103、104、105;叵山般选用102、103、104）的样品液进行培养， 以保证获得菌落数在 3。3001之间、适于计数的平板。11 .不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌30-37 C 1-2 天；放线菌 25-28 C 5-7 天；霉菌 25-28 C 3-4 天。12 .每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为 结果，这样可以防

10、止因括养时间不足而导致遗漏菌落的数目。一般东 说，在一定的培养条件下（相同的培养基、唯独及培养时间），同种微生物表现由稳定的菌监特征（形状、大小、隆起程度和颜色基本一致）13 .每克样品中的菌落数=（C/V） X砂 （C:某一稀释度下平板上生 长的平均菌落数；V:涂布平板时所用的稀释液的体积（ ml）; M:代表 稀释倍数）14 .在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养惬种细菌后，如果phmj指示剂变红，可初步鉴定该种细菌能分解尿素为氨。口2.3 分解纤维素的微生物的分离1 .纤维素是一种由司萄糖首层相连而成的高分子化合物,是地球上含 量最丰富的多糖类物质。 画是自然界中纤维素含量最

11、高的天然产物， 木材、作物秸秆可也富含纤维素。2 .纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即酶、cx酶和葡萄糖由氤1前两种酶使纤维素分解成纤维糖，第m种酶将 纤维二糖分解成前萄糖，忸微生物的生长提供营养。3 .当在含有纤维素的培养基中加入刚喘红时，能与培养基中的纤维 素形成红色复合引当纤维素被纤维素酶分解后,刚果纣一纤维素的 复合物就无法形成，培养基中会由现以纣维素分解菌网心的透明圈， 根据是否产生透明圈就可以来筛选纤细素分解菌，这种方法叫做刚果|红染色法。4 .刚果红染色法未选纤维素分解菌丽理:刚果红（染料）可以与像 纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不和水解的纤维二糖 和

12、葡萄糖发生这种反应。5 .实验流程：土壤取样 -选择培养（此步是否需要，应根据样品中目 的菌株数量的多少来确定）-画而释-将样品涂布到唏别纤维素分丽加培养基上 -挑选产生透明圈而菌落-可编辑修改-6 .为确定得到的是纤维素分解菌，需要进行发醉产纤维素酶|的实验。纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生 的葡丽进行定量的测定。7 .由于生物与环境的相电依存关冻,在富含纤维卷质U中，纤维素|分解菌中含量相对提高,因此从这种土样中获得目的微生物的几率要 同普通环境。8 .将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将纸埋于深约 10cm左右腐殖土壤中。9 .刚果红染色法种类：一种是先培柝生物，再力口入刚果却进行颜也 反应；另一种是在倒金板时可加入刚果红。前者的缺点是操作繁琐， 加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂工也点是这样显示由的颜色 反应基本上是邠隹素分解菌的作用。方法二的优点是操作简便，不存 在菌落混杂问题，缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类 口 物质，可以使能够产生淀粗酶的祢生物出现假阳性反应。但因为培养 基中纤维素占主要地位，纤维素酶产