本科毕业答辩

1、LOGO 指导教师指导教师：辛毅（教授）辛毅（教授） 论论文文题题目目:大肠杆菌外膜蛋白的提取与分析鉴定大肠杆菌外膜蛋白的提取与分析鉴定 n班班级级：12生物制生物制药药班班 n学学生：高世生：高世东东 n学号学号：A120501005 研究概述（背景）研究概述（背景） 研究意义：研究意义： u 举例：举例： 研究方法与过程研究方法与过程 u 材料与仪器：材料与仪器： u 超声波细胞粉碎仪超声波细胞粉碎仪 u 高速冷冻离心机高速冷冻离心机 u 电泳仪电泳仪 u 胶成像分析系统胶成像分析系统 u 脱色摇床脱色摇床 u 酶标仪酶标仪 u 试剂：试剂： u HEPES缓冲液缓冲液 u 十二烷基肌氨酸

2、钠（十二烷基肌氨酸钠（SLS） 2实验过程实验过程 试验流程：试验流程： 结果结果 实验结果：实验结果： 96孔板加标准蛋白（孔板加标准蛋白（BSA）与考马斯亮蓝，做蛋白质标准曲）与考马斯亮蓝，做蛋白质标准曲 线，如下图。线，如下图。 吸光度 蛋白浓度（ug/ml） 蛋白质标准曲线 系统演示系统演示 外膜蛋白外膜蛋白SDS-PAGE图像图像 大肠杆菌大肠杆菌OMPOMP蛋白蛋白SDS-PAGESDS-PAGE电泳图电泳图 u Fig: c和和d泳道没有加泳道没有加CaCl2,没有用丙酮沉淀没有用丙酮沉淀 u a和和d泳道上样量泳道上样量,用了蛋白抑制剂用了蛋白抑制剂CaCl2和使用丙酮沉淀和使

3、用丙酮沉淀 结论与总结结论与总结 本实验照本实验照Carlone的方法的方法（利用超声波破碎仪粉碎细菌细胞（利用超声波破碎仪粉碎细菌细胞 ，然后经过高速离心沉淀细胞粗膜，然后经过高速离心沉淀细胞粗膜(包含细胞质膜与细胞外包含细胞质膜与细胞外 膜膜)，再根据去污剂，再根据去污剂SLS在特定条件下能选择性溶解细胞质在特定条件下能选择性溶解细胞质 膜的性质，使粗膜中细胞质膜与外膜相分离，进而离心沉膜的性质，使粗膜中细胞质膜与外膜相分离，进而离心沉 淀得到大肠杆菌的淀得到大肠杆菌的OMP。）。）成功制备了成功制备了Ecoli的细胞外的细胞外 膜蛋白。膜蛋白。 本实验在此基础上做了本实验在此基础上做了改

4、进与优化，增加了钙离子使用，并且改进与优化，增加了钙离子使用，并且 使用冷丙酮与使用冷丙酮与SLS联合沉淀外膜蛋白联合沉淀外膜蛋白。得到的外膜蛋白经。得到的外膜蛋白经 过过Bradford方法检测，提取的外膜蛋白含量增高，说明方法检测，提取的外膜蛋白含量增高，说明 Ca2+抑制了外膜蛋白在提取过程的分解，同时丙酮增加抑制了外膜蛋白在提取过程的分解，同时丙酮增加 了蛋白的沉淀效率，使得用本实验方法能够有效提取外膜了蛋白的沉淀效率，使得用本实验方法能够有效提取外膜 蛋白，蛋白，并且增加产率并且增加产率。 致谢致谢 u大学本科的学习生活即将结束。在此，我大学本科的学习生活即将结束。在此，我 要感谢所有曾经教导过我的老师和关心过要感谢所有曾经教导过我的老师和关心过 我的同学，他们在我的同学，他们在我的学习与生活我的学习与生活中给予中给予 了我很大的了我很大的鼓励鼓励。本文能够顺利完成，要。本文能够顺利完成，要 特别感谢我的导师特别感谢我的导师辛毅教授辛毅教授，同时也同时也感谢感谢 生物技术生物技术系的系的其他其他老师的老师的支持与支持与