实验普通生物显微镜的使用

1、实验普通生物显微镜的使用 实验一、普通生物显微镜的使用实验一、普通生物显微镜的使用 (一一) 动、植物细胞、真菌的观察及生物动、植物细胞、真菌的观察及生物 绘图法绘图法 实验普通生物显微镜的使用 一、实验目的：一、实验目的： 1.1.了解普通光学显微镜和体视显微镜的基本构了解普通光学显微镜和体视显微镜的基本构 造及功用，并正确掌握使用和维护方法。造及功用，并正确掌握使用和维护方法。 2. 观察一些真核细胞的结构，学习基本生物绘观察一些真核细胞的结构，学习基本生物绘 图方法。图方法。 3. 学习临时装片的制作方法。学习临时装片的制作方法。 实验普通生物显微镜的使用 二、实验原理：二、实验原理：

2、（一）、显微镜概述：（一）、显微镜概述： 显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不 同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。 前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光 源，后者则以电子束为光源。源，后者则以电子束为光源。 实验普通生物显微镜的使用 （二）、显微镜的发明：（二）、显微镜的发明： 1. 最早由荷兰眼镜商在最早由荷兰眼镜商在1600年前后制造的，它年前后制造的，它 的结构简单，放大倍数只有的结构简单，放大倍数只有1030倍，可以倍，可以 观察一些小昆虫，如跳蚤等，因而有

3、人称它观察一些小昆虫，如跳蚤等，因而有人称它 为为“跳蚤镜跳蚤镜”。 这种显微镜是用光线照明的，属于光学显微镜。这种显微镜是用光线照明的，属于光学显微镜。 实验普通生物显微镜的使用 2. 2. 英国物理学家罗伯特英国物理学家罗伯特虎克（虎克（Robert HookeRobert Hooke， 1635 1635 1703 1703）研制出能够放大研制出能够放大140140倍的光学显微倍的光学显微 镜，并用它来观察软木薄片，发现了细胞。镜，并用它来观察软木薄片，发现了细胞。 实验普通生物显微镜的使用 3. 3. 16731673年有个名叫列文年有个名叫列文. .虎克（虎克（Antoni van

4、LeeuwenhoekAntoni van Leeuwenhoek） 的荷兰人用自己制造的显微镜观察到了被他称为的荷兰人用自己制造的显微镜观察到了被他称为“小动小动 物物”的微生物世界。他也被称为微生物的开山祖。的微生物世界。他也被称为微生物的开山祖。 实验普通生物显微镜的使用 4. 1938年，德国工程师鲁斯卡（年，德国工程师鲁斯卡（ Ernest Ruska,Ernest Ruska, 1906-1988) 1906-1988) 制造出世界第一台透射电子显微镜制造出世界第一台透射电子显微镜 （TEM）。）。1952年，英国工程师年，英国工程师Charles Oatley 制造出第一台扫描电

5、子显微镜（制造出第一台扫描电子显微镜（SEM） 实验普通生物显微镜的使用 （三）、显微镜的分辨率（三）、显微镜的分辨率: 分辨率：也称为分辨力，它是指能把两个物点分分辨率：也称为分辨力，它是指能把两个物点分 辨清楚的最小距离。辨清楚的最小距离。 分辨率数值越高，分辨距离越大，则分辨率越低。分辨率数值越高，分辨距离越大，则分辨率越低。 反之亦然。所以，分辨率是以分辨距离来表示的。反之亦然。所以，分辨率是以分辨距离来表示的。 其计算公式为其计算公式为: : D=0.61 D=0.61入入/ /N NA NA NA A=n =n sina/2 sina/2 式中式中D D为分辨率，为分辨率，A A为

6、光波波长，为光波波长，N NA A为物镜的数值为物镜的数值 孔径孔径( (镜口率镜口率) )。 实验普通生物显微镜的使用 在物镜上，有镜口率在物镜上，有镜口率( (N.A.)N.A.)的标志，它反应该镜头的标志，它反应该镜头 分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高。分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高。 各物镜的镜口率如下表：各物镜的镜口率如下表： 物镜 镜口率(N.A.) 工作距离(mm) 10 0.25 5.40 40 0.65 0.39 100 1.30 0.11 显微镜的总放大倍数显微镜的总放大倍数=目镜放大倍数物镜放大倍数 公式为: M = K1 K2 实验普通生物显微镜的使用

7、 焦点深度焦点深度: : 显微镜调焦到看清标本某一点时，不显微镜调焦到看清标本某一点时，不 仅是这一物点，而且它的上下两侧也仅是这一物点，而且它的上下两侧也 能看清楚的厚度叫做焦点深度。能看清楚的厚度叫做焦点深度。 要看到标本的全厚度，必须调节螺旋要看到标本的全厚度，必须调节螺旋 仔细地从上到下进行观察仔细地从上到下进行观察。 实验普通生物显微镜的使用 三、材料和仪器：三、材料和仪器： 仪器：普通光学显微镜、体视镜仪器：普通光学显微镜、体视镜（附显微用品： 擦镜纸、香柏油、二甲苯、载玻片、盖玻片） 材料与器材：新鲜酵母液、滴管、镊子、培养材料与器材：新鲜酵母液、滴管、镊子、培养 皿、标本盒（内

8、有各种装片）皿、标本盒（内有各种装片） 实验普通生物显微镜的使用 四、实验步骤：四、实验步骤： （一）普通显微镜的使用及维护：（一）普通显微镜的使用及维护： I I . .光学显微镜的构造光学显微镜的构造 普通生物显微镜由普通生物显微镜由2 2部分构成：部分构成： ：光学部分：包括物镜、目镜、光源、聚光器，是显：光学部分：包括物镜、目镜、光源、聚光器，是显 微镜的主体。微镜的主体。 ：机械部分：包括镜筒、镜臂、镜座、镜台：机械部分：包括镜筒、镜臂、镜座、镜台( (载物台）、载物台）、 调节旋钮、物镜转换器等，用于固定材调节旋钮、物镜转换器等，用于固定材 料和观察方便料和观察方便 。 实验普通生

9、物显微镜的使用 IIII .显微镜的使用显微镜的使用 1.1. 观察前的准备工作观察前的准备工作 . .显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否 完整和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光完整和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光 器上端透镜进行必要的清洁工作。然后进行调节。器上端透镜进行必要的清洁工作。然后进行调节。 . .观察时要双眼同时睁开，一边观察一边进行记录观察时要双眼同时睁开，一边观察一边进行记录 或描绘。或描绘。 . .观察时所用的材料、药品和各种器具要预先备好观察时所用的材料、药品和各种器具要预先备好 实验普通生物显微镜的使用 2.

10、使用方法：使用方法： （1）低倍镜的使用：观察任何标本，均需从低倍镜）低倍镜的使用：观察任何标本，均需从低倍镜 开始。开始。 检查：检查显微镜是否完好。检查：检查显微镜是否完好。 准备：将显微镜放于前方略偏左，转动粗调旋钮准备：将显微镜放于前方略偏左，转动粗调旋钮 将载物台下降，旋转物镜转换器使低倍镜正对通将载物台下降，旋转物镜转换器使低倍镜正对通 光孔。光孔。 对光：对光： 放标本片：放标本片： 调节焦距调节焦距 计算放大倍数：计算放大倍数： 实验普通生物显微镜的使用 错误原因：如按上述操作，依然看不到图象，错误原因：如按上述操作，依然看不到图象， 可能有以下原因：可能有以下原因： A. 转

11、动调节太快，超过焦点，需重新调节。转动调节太快，超过焦点，需重新调节。 B. 物镜未对准通光孔。物镜未对准通光孔。 C. 标本没放在视野内，需移动标本片寻找观察标本没放在视野内，需移动标本片寻找观察 对象。对象。 D. 光线太强或太弱。尤其观察透明或未染色标光线太强或太弱。尤其观察透明或未染色标 本时，应将光线调稍暗些，有利观察。本时，应将光线调稍暗些，有利观察。 实验普通生物显微镜的使用 （2 2）高倍镜的使用：）高倍镜的使用： 依照上述操作步骤，先用低倍镜找到清晰物象，依照上述操作步骤，先用低倍镜找到清晰物象， 将需要观察的部分移到视野中央，将需要观察的部分移到视野中央， 眼睛从侧面注视物

12、镜，移动转换器，换高倍镜，眼睛从侧面注视物镜，移动转换器，换高倍镜， 看目镜，微调细调旋钮，至看到清晰物象。看目镜，微调细调旋钮，至看到清晰物象。 实验普通生物显微镜的使用 错误原因：如按上述操作，依然看不到图象，错误原因：如按上述操作，依然看不到图象， 可能有以下原因：可能有以下原因： A. 观察的标本不在视野内。应在低倍镜下找到观察的标本不在视野内。应在低倍镜下找到 后，移到视野中央，再换高倍镜观察。后，移到视野中央，再换高倍镜观察。 B. 标本放反了。标本放反了。 C. 焦距未调好。焦距未调好。 实验普通生物显微镜的使用 （3 3）油镜的使用：）油镜的使用： 先用低倍镜观察标本情况。先用

13、低倍镜观察标本情况。 换高倍镜，把需观察的部分移至视野中央。换高倍镜，把需观察的部分移至视野中央。 将聚光器升至最高位置，光圈开至最大。将聚光器升至最高位置，光圈开至最大。 在盖玻片所要观察的位置滴一小滴香柏油，在盖玻片所要观察的位置滴一小滴香柏油， 放于载物台。放于载物台。 把油镜移至工作位置。把油镜移至工作位置。 实验普通生物显微镜的使用 慢慢调节粗细调节旋钮，使载物台缓慢上升，同慢慢调节粗细调节旋钮，使载物台缓慢上升，同 时细心从侧面观察物镜前端与标本之间的距离。时细心从侧面观察物镜前端与标本之间的距离。 先使物镜前端与油滴接触，再慢慢上升载物台，先使物镜前端与油滴接触，再慢慢上升载物台

14、， 至物镜前端接近而没有碰触到盖玻片为止。（小至物镜前端接近而没有碰触到盖玻片为止。（小 心损伤油镜或装片）心损伤油镜或装片） 眼睛从目镜观察，缓慢调节细调旋钮至看清标本眼睛从目镜观察，缓慢调节细调旋钮至看清标本 （注意只能下降载物台）（注意只能下降载物台） 实验普通生物显微镜的使用 观察完毕，下降载物台，使油镜离开光轴，及观察完毕，下降载物台，使油镜离开光轴，及 时做好油镜的清洁工作（先用干净的擦镜纸擦时做好油镜的清洁工作（先用干净的擦镜纸擦 去大部分香柏油，再用二甲苯滴湿的擦镜纸擦去大部分香柏油，再用二甲苯滴湿的擦镜纸擦 拭两次，最后用干的擦镜纸擦拭一次）。拭两次，最后用干的擦镜纸擦拭一次

15、）。 玻片上的油可用玻片上的油可用“拉纸法拉纸法”擦去：把一小张擦擦去：把一小张擦 镜纸盖在载玻片的油滴上，其上滴一两滴二甲镜纸盖在载玻片的油滴上，其上滴一两滴二甲 苯，趁湿把纸往外拉，连续几次，即可擦净苯，趁湿把纸往外拉，连续几次，即可擦净 （注意不要使用过多的二甲苯，并及时擦干净（注意不要使用过多的二甲苯，并及时擦干净 上面的香柏油，以免使装片受损）。上面的香柏油，以免使装片受损）。 实验普通生物显微镜的使用 注意：注意：如果不出现物象或者目标不理想要重找，如果不出现物象或者目标不理想要重找， A. A. 在加油区之外重找时应按：低倍在加油区之外重找时应按：低倍高倍高倍 油镜程序。油镜程序

16、。 B. B. 在加油区内重找应按：低倍在加油区内重找应按：低倍油镜程序，油镜程序， 不得经高倍镜，以免油沾污镜头。不得经高倍镜，以免油沾污镜头。 实验普通生物显微镜的使用 3. 显微镜使用后的复原：显微镜使用后的复原： （1）下降聚光器约）下降聚光器约1cm， （2）使物镜离开光轴，使通光孔正队两个物镜中使物镜离开光轴，使通光孔正队两个物镜中 间，提升载物台至原来位置，间，提升载物台至原来位置， （3）把载物台上的标本移动器移至适当位置，）把载物台上的标本移动器移至适当位置， （4）关闭电源。）关闭电源。 实验普通生物显微镜的使用 4 4、显微镜使用的注意事项、显微镜使用的注意事项 （1 1

17、）持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不）持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不 可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方。可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方。 （2 2）轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边 缘，以免碰翻落地。缘，以免碰翻落地。 （3 3）保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦 镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分 用布擦拭。用布擦拭。 （4 4）水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和载物台水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和载物台 如果沾污应立即

18、擦净。如果沾污应立即擦净。 实验普通生物显微镜的使用 （5 5）放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能 反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜。反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜。 （6 6）要养成两眼同时睁开的习惯，以左眼观察视要养成两眼同时睁开的习惯，以左眼观察视 野右眼用以绘图。野右眼用以绘图。 （7 7）不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜， 也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。 （8 8）使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内。）使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内。 实验普通生物显微镜的使

19、用 （二）、体视镜的使用（二）、体视镜的使用 体视显微镜又称实体显微镜，它在观察物体体视显微镜又称实体显微镜，它在观察物体 时能产生正立的三维空间影像。立体感强，成像时能产生正立的三维空间影像。立体感强，成像 清晰和宽阔，又具有长工作距离，并可根据观察清晰和宽阔，又具有长工作距离，并可根据观察 物的特点选用不同的反射和透射物的特点选用不同的反射和透射 光照明，是适用范围非常广泛的光照明，是适用范围非常广泛的 常规显微镜。常规显微镜。 实验普通生物显微镜的使用 （三）、标本的观察（三）、标本的观察 “5 ”字片：低倍字片：低倍 人血涂片人血涂片：低倍：低倍 高倍高倍 油镜油镜 兔精虫涂片兔精虫涂片：低倍：低倍 高倍高倍 单层扁平上皮单层扁平上皮：低倍：低倍 高倍高倍 动、植物细胞有丝分裂切片动、植物细胞有丝分裂切片：低倍：低倍 高倍高倍 日本血吸虫雌雄合抱装片日本血吸虫雌雄合抱装片：肉眼：肉眼 低倍低倍 实验普通生物显微镜的使用 （四）、（四）、酵母酵母临时装片的制作临时装片的制作 1. 滴一滴鲜酵母液于干净的载玻片上，滴一滴鲜酵母液于干净的载玻片上， 2. 轻轻盖上盖玻片，注意不要产生气泡，轻轻盖上盖玻片，注意不要产生气泡， 3. 低倍、高倍镜下观察。低倍、高倍镜下观察。