血球计数板专题复习

1、血球计数板的构造和使用血球计数板的构造和使用 方格网上刻有方格网上刻有9个个 大方格，其中只有大方格，其中只有 中间的一个大方格中间的一个大方格 为为计数室计数室，供微生，供微生 物计数用物计数用。 大方格的长和宽各为大方格的长和宽各为1mm，深度为，深度为0.1mm， 即即1mm1mm0.1mm，其容积为，其容积为0.1mm3； 血球计数板是一种专门用于计算血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物数较大单细胞微生物数 量量的仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻的仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻 片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，片中有四条下凹的槽，构成

2、三个平台。中间的平台较宽， 其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方方 格网格网。 血球计数板的结构 大方格 中 方 格 小 方 格 计数 1625型： 一般取四角的一般取四角的 四个中方格（四个中方格（100 个小方格）计数个小方格）计数 2516型： 一般计数四个角一般计数四个角 和中央的五个中方和中央的五个中方 格（格（80个小方格）个小方格） 的细胞数。的细胞数。 计数室两种规格 11625型的计数板 将计数室放大，可见它含 16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方 格（100个小方格）计数 。 细胞个数1mL100个小方格

3、细胞总数/ 100 40010000稀释倍数 22516型的计数板 中央大方格以双线等分成25 个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细 胞计数用（见图三）。一般计数四个角和中央的 五个中方格（80个小方格）的细胞数。 细胞个数1mL80个小方格细胞总数/ 80 40010000稀释倍数 血球计数板的使用方法步骤血球计数板的使用方法步骤 1 1镜检计数室。在加样前，先对计数板的计数室进行镜检计数室。在加样前，先对计数板的计数室进行 镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数；镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数； 2 2加样品。将清洁干燥的血球计数板的加样品。将清洁干燥的血球计数

4、板的计数室上加盖计数室上加盖 专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于滴于 盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数充满计数 室室，防止产生气泡，多余培养液可用滤纸吸去；，防止产生气泡，多余培养液可用滤纸吸去； 3 3计数。稍待片刻（约计数。稍待片刻（约5min5min），待酵母菌细胞全部沉），待酵母菌细胞全部沉 降到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在降到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在 低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高

5、倍镜观察、 计数并记录计数并记录。 注意事项注意事项 1.1.从试管中吸出培养液进行计数之前，建议将试管从试管中吸出培养液进行计数之前，建议将试管 震荡几次，目的是什么？震荡几次，目的是什么？ 目的：使培养液中酵母菌分布均匀，以保证目的：使培养液中酵母菌分布均匀，以保证 估算准确，减少误差估算准确，减少误差 2 2 如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当 对培养液进行稀释。具体方法是：对培养液进行稀释。具体方法是： 摇匀试管，取摇匀试管，取1mL1mL酵母菌培养液，加入成酵母菌培养液，加入成 倍的无菌水稀释，稀释倍的无菌水稀释，稀释n n倍后，再用

6、血球计数倍后，再用血球计数 板计数，所得数值乘以稀释倍数。以每小方板计数，所得数值乘以稀释倍数。以每小方 格内含有格内含有4 45 5个酵母细胞为宜。个酵母细胞为宜。 3 3活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大 小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体 小于母细胞一半时为小于母细胞一半时为1 1个酵母细胞。个酵母细胞。 4 4对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同 侧相邻两边上的菌体数，一般可采取侧相邻两边上的菌体数，一般可采取“数上线数上线 不数下线，数左线不数右线不数下线，数左线不

7、数右线”的原则处理，另的原则处理，另 两边不计数。两边不计数。 5 5计数一个样品要从计数一个样品要从两个计数室中计得的平两个计数室中计得的平 均数值均数值来计算，对每个样品可计数三次，再取来计算，对每个样品可计数三次，再取 其平均值。其平均值。 6 6血球计数板的清洁血球计数板的清洁 血球计数板使用后，用血球计数板使用后，用自来水冲洗自来水冲洗，切勿用硬，切勿用硬 物洗刷，洗后物洗刷，洗后自行晾干自行晾干或用吹风机或用吹风机吹干吹干，或用，或用 95%95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水 使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌使其干燥。通过镜检观察

8、每小格内是否残留菌 体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗 直到干净为止。直到干净为止。 例例1、通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计、通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计 数，若计数室为数，若计数室为1mm1mm0.1mm方格，由方格，由 400个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过 多，难以计数，应先多，难以计数，应先 后再计数。若多次重后再计数。若多次重 复计数后，算得每个小方格中平均有复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，个酵母菌， 则则10mL该培养液中酵母菌总数有该培养液中酵母菌总数有 个。个

9、。 （参考答案：稀释；（参考答案：稀释；2108） 540010000102108 。 例例2.2.检测员将检测员将1 mL1 mL水样稀释水样稀释1010倍后，用抽样检测的倍后，用抽样检测的 方法检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，方法检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上， 用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤 纸吸去多余液体。已知每个计数室由纸吸去多余液体。已知每个计数室由25251616400400个个 小格组成，容纳液体的总体积为小格组成，容纳液体的总体积为0 01 mm1 mm3 3。 现观察到图中该计数室所示现观

10、察到图中该计数室所示a a、b b、c c、d d、e 5e 5个个 中格中格8080个小格内共有蓝藻个小格内共有蓝藻n n个，则上述水样中约有个，则上述水样中约有 蓝藻蓝藻 个个mLmL。 5n5n10105 5 解析：从例题来看，是按照血球计数板的原理解析：从例题来看，是按照血球计数板的原理 进行设计试题的，还添加了相应的图示，题意进行设计试题的，还添加了相应的图示，题意 一目了然。按照前面所述的公式，不难得出正一目了然。按照前面所述的公式，不难得出正 确答案：确答案： 酵母细胞个数酵母细胞个数1mL 80个小方格细胞总数个小方格细胞总数/ 80 40010000稀释稀释 倍数倍数 n/8

11、040010000105n105 。 例例3、（、（2008江苏高考江苏高考31） （4）在整个实验过程中，直接从静置的培养瓶）在整个实验过程中，直接从静置的培养瓶 中取培养原液计数的做法是错误的，正确的方中取培养原液计数的做法是错误的，正确的方 法是法是 和和 。 （5）实验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球）实验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球 计数板的做法是错误的，正确的方法是计数板的做法是错误的，正确的方法是 。 （参考答案（参考答案（4）摇匀培养液后再取样）摇匀培养液后再取样 样液稀样液稀 释后再计数（释后再计数（5）浸泡和冲洗）浸泡和冲洗） 血球计数板是一种专门用于计算血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物数较大单细胞微生物数 量量的仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻的仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻 片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽， 其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方方 格网格网。 血球计数板的结构 计数 1625型： 一般取四角的一般取四角的 四个中方格（四个中方格（100 个小方格）计数个小方格）计数 2516型