呼吸道感染病原菌分布及耐药性分析

1、 呼吸道感染病原菌分布及耐药性分析 目 录 中文摘要.I 英文摘要 .II 前言.1 正文.2 1 材料与方法.2 1.1 研究对象.2 1. 2 研究方法.2 1.2.1 采集临床样本.2 1.2.2 分离鉴定与药敏试验.2 1.2.3 实验数据处理.3 2 结果.3 2.1 呼吸道感染病原菌分类情况.3 2.2 呼吸道感染病原菌分布情况.3 3 药敏情况.4 3.1 呼吸道感染常见细菌体外药敏分析.4 3.2 常见革兰阴性菌体外药敏分析结果.4 3.3 革兰阳性菌药敏结果.5 4 讨论.5 5 结论.7 参考文献.8 致谢.11 综述.12 II 摘 要 目的：了解呼吸道感染患者的病原菌分

2、布及其耐药性,为流行病学防治和临 床用药提供指导。方法：收集南华大学附属第一医学院检验科 2017 年 3 月 1 日-2017 年 3 月 31 日来自住院部呼吸道感染患者 500 份痰液标本,进行细菌接 种与分离培养, 用 CRYS-TAL 微生物全自动鉴定仪作菌种的鉴定及药敏检查, 随机选取 100 份阳性标本检测结果进行分析。结果：100 株病原菌中, G- 菌感 染,为 70%(70/100)、G+ 菌占 16%(16/100)、真菌占 14%(14/100)；G-菌检出率 依次为铜绿假单胞菌（24/100）、鲍曼不动杆菌(16/100)、肺炎克雷伯氏菌 (11/100)、嗜麦芽窄食

3、单胞菌(10/100)、大肠埃希氏菌(9/100)，G+菌检出率依次 为金黄色葡萄球菌(10/100)、肺炎链球菌（6/100）；药敏试验证实 G-菌中大肠 埃希菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌对美洛培南敏感（100%），铜绿假单胞 菌主要对复方新诺明敏感（91.6%），嗜麦芽窄食单胞菌主要对米诺环素敏感 （90%），而对美洛培南完全耐药（100%）；G+菌对万古霉素、利奈唑胺均敏感 （100%），而金黄色葡萄球菌还对米诺环素敏感（100%）。结论：呼吸道感染 以 G- 菌为主，其次为 G+菌与真菌，不同的呼吸道感染病原菌均存在不同程度 传统药物的耐药，但未出现明显新的耐药菌流行。 关键词：痰标

4、本；呼吸道感染；细菌鉴定；药敏试验 III ABSTRACT Objective: To provide the guidance to epidemic prevention and clinical drug application of bacteria through exploring the distribution and the drug sensitivity of bacteria isolated from respiratory infection patients. Methods Collected from the First Affiliated Hospita

5、l of Nanhua University, March 1, 2017 March 31, 2011 March 31, 2010 Department of respiratory tract infection from the patient 500 cases of sputum specimens, bacterial inoculation and isolation and culture, with CRYS-TAL microbial automatic identification The identification of the bacteria and the s

6、ensitivity test were carried out. 100 positive samples were randomly selected for analysis Results：100 of the pathogens were G-bacteria infection, 70% (70/100), G + bacteria accounted for 16% (16/100), fungi accounted for 14% (14/100); G-bacteria detection rate of copper green (24/100), Acinetobacte

7、r baumannii (16/100), Klebsiella pneumoniae (11/100), Stenotrophomonas maltophilia (10/100), Escherichia coli (9/100). The detection rate of G + bacteria was Staphylococcus aureus (10/100) and Streptococcus pneumoniae (6/100). The susceptibility test showed that Escherichia coli, Acinetobacter bauma

8、nnii (100%), Pseudomonas aeruginosa is mainly sensitive to compound neomorphine (91.6%), Stenotrophomonas maltophilia is mainly sensitive to minocycline (90 (100%); G + bacteria were sensitive to vancomycin and linezolid (100%), while Staphylococcus aureus was also susceptible to minocycline (100%),

9、 Conclusion：Respiratory tract infection to G-bacteria-based, followed by G + bacteria and fungi, different respiratory tract infection pathogens are different degrees of traditional drug resistance, but no significant new drug-resistant bacteria epidemic. Key words: Sputum specimens; Respiratory tra

10、ct infection; Bacterial identification Drug allergy testing 1 前 言 呼吸道感染是临床常见疾病，发病机制频繁，是严重威胁人类健康的疾病 之一，有研究显示成人死亡中呼吸道感染患者约占 3%-5% 1-2。呼吸道感染 病人死亡率居高不下的原因有细菌耐药性的升高，病原体不能及时明确、老龄 化、免疫力低下疾病增加等。虽然根据患者临床特点如发热、咳脓痰、白细胞 及中性粒细胞升高、肺部影像学等可辅助诊治呼吸道感染，但均不能明确查出 呼吸道感染具有的体病原体和明确呼吸道感染病原体种类、及时精准治疗从而 达到死亡率降低，降低抗生素耐药率等。 随着我

11、国人口老龄化比例分布逐渐上升、有创操作明显增加、广泛的抗生 素和免疫抑制剂应用和分布，呼吸道感染病原体的分布及耐药情况也发生了明 显的变化，且不同地区其病原体分布及耐药情况也不尽相同。确诊呼吸道感染 病原体分布及耐药情况，对于指导临床医师选择正确的用药方案及防止耐药菌 形成有重要的意义。 我国目前主要的诊断呼吸道感染病原菌手段还是痰培养，结合细菌的药敏 检测，是临床医师选用有效抗菌药物的重要依据和指标3。临床医生对呼吸道 感染性疾病患者在药物治疗前，应参考痰液标本的细菌分离培养及药敏检测结 果，制定出有效的治疗方案；同样，检验工作人员应定期对送过来的标本检验 结果进行完整的统计分析，为临床诊断

12、合理选取抗菌药物提供可靠依据4-6。 本研究通过收集南华大学附属第一医学院检验科 2017 年 3 月 1 日-2017 年 3 月 31 日来自住院部呼吸道感染患者痰液标本,对阳性标本进行细菌分离培 养鉴定及药物敏感性分析,了解呼吸道感染患者的病原菌分布及其耐药性,为医 院流行病学防治和临床用药提供指导。 2 1 材料与方法 1.1 标本来源 收集2017 年3月1日4月1日南华大学附属第一医院呼吸道感染的住院患 者痰标本,共计500份。 要求检验人员和采集人员密切的配合,确保标本的无污染和及时送检，重复 送检标本不纳入统计范围。 1.2 研究方法 1.2.1 痰液样本采集 收集患者清晨第一

13、口痰，患者在晨起刷牙、漱口（清水漱口3-4次）后， 用力咳出气管深处呼吸道分泌物置于无菌痰盒中，勿混入鼻咽分泌物、唾液、 漱口水等无关的液体，采集后在室温 2 小时内送检。 1.2.2 细菌分离鉴定 呼吸道痰液标本均在无菌操作下接种于以下培养基中；然后在放入35 CO2培养箱中进行过夜培养：血琼脂平板（主要用于链球菌及其他苛养菌的分 离、培养及溶血活性的检测）、巧克力平板（主要用于奈瑟菌属和嗜杆菌等需 氧菌的分离和培养）、麦康凯平板（主要用于革兰阴性菌的分离和培养）、沙 保罗平板（主要用于真菌的分离和培养），挑取阳性菌落用于细菌的进一步分 离培养鉴定。 标准菌：铜绿假单胞菌（ATCC27853

14、），鲍曼不动杆菌（ATCC19606）肺 炎克雷伯氏菌（ATCC?），嗜麦芽窄食单胞菌（ATCC?）、大肠埃希氏菌 （ATCC25922），G+菌检出率依次为金黄色葡萄球菌（ATCC25923）、肺炎链 球菌（ATCC?）。菌种的鉴定主要采用 BD 公司 CRYS-TAL 微生物全自 动鉴定仪。 3 1.2.3 细菌药敏分析 药敏分析药敏试验使用是法国梅里埃公司药敏卡进行药敏鉴定及分析。 革兰阴性杆菌药敏卡的抗生素主要包括；环丙沙星、阿米卡星、头孢吡肟、头孢 他啶、头孢呋辛、美洛培南、庆大霉素、米诺环素、头孢曲松、氨苄西林、复 方新诺明和氨曲南， 革兰阳性菌药敏卡包括的抗生素主要包括；青霉素、

15、万古霉素、利奈唑胺、加替 沙星、四环素、克林霉素、氧氟沙星、环丙沙星、米诺环素、庆大霉素和红霉 素。 4 2 结果 2.1 呼吸道感染病原菌分类情况 在收集的500份痰液标本中,经过接种培养和分离鉴定，共检测出100株 病原菌, 主要为革兰氏阴性菌为主。分布情况是革兰阴性菌70株,占病原菌的 70%。革兰阳性菌16株 ,占病原菌的 16%，真菌最少，为14株，占病原菌 的14%。见表1。 表 1 100 株病原菌的分类情况 病原菌 总数 百分比% 革兰阴性菌 70 70 革兰阳性菌 16 16 真 菌 14 14 合 计 100 100 2.2呼吸道感染病原菌分布情况 呼吸科痰标本中，革兰阴性

16、菌中检出较多的为铜绿假单胞菌24株(24%)、 其他依次为鲍曼不动杆菌 16株(16%)、肺炎克雷伯菌11株(11%)、嗜麦芽 窄食单胞菌10株(10%)、大肠埃希菌 9株(9%)。革兰阳性菌主要为金黄色 葡萄球菌10株（10%）、肺炎链球菌6株（6%）居多。真菌主要为白色假丝 酵母菌8株（8%），热带假丝酵母菌3株（3%），光滑球拟假丝酵母菌原菌 3 株（3%）。见表2。 5 表 2 100 株病原菌分布情况 细菌种类株数构成比（%） 革兰阴性菌 7070 鲍曼不动杆菌 1616 肺炎克雷伯菌 1111 铜绿假单胞菌 2424 大肠埃希菌 99 嗜麦芽窄食单胞菌 1010 革兰阳性菌 161

17、6 金黄色葡萄球菌 1010 肺炎链球菌 66 真菌 1414 白色假丝酵母菌 88 热带假丝酵母菌 33 光滑球拟假丝酵母菌 33 总计 100100 2.3 痰液标本中革兰阴性菌体外药敏分析 从呼吸道感染痰液标本中，检出G-菌所占比例最大，为70%，其中铜绿假 单胞菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、嗜麦芽窄食单胞菌、大肠埃希菌 5 种细菌的药敏检测结果证实：G-菌中大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯 菌对美洛培南敏感（100%），铜绿假单胞菌主要对复方新诺明敏感（91.6%）， 嗜麦芽窄食单胞菌主要对米诺环素敏感（90%），而对美洛培南完全耐药 （100%）。 绝大部分细菌都存在不同程度耐

18、药。大肠埃希菌对氨苄西林、头孢呋辛、 环丙沙星、庆大霉素和复方新诺明耐药率达 60%以上；铜绿假单胞菌对氨苄 西林、头孢呋辛、庆大霉素、环丙沙星和耐氨曲南药率均达 60%以上；鲍曼 不动杆菌对环丙沙星、头孢吡肟、头孢呋辛、头孢他啶耐药率达90%以上；嗜 麦芽窄食单胞菌对美洛培南、庆大霉素、头孢曲松、氨苄西林和头孢吡肟耐药 率达到90%以上；肺炎克雷伯对氨苄西林、复方新诺明耐药率达 90.1%、63.6%。见表 3 6 表 3 常见革兰阴性菌具体药敏结果（%） 大肠埃希菌铜绿假单胞菌鲍曼不动杆菌嗜麦芽窄 食单胞菌 肺炎克雷伯菌 抗生素 RSRSRSRSRS 环丙沙星 66.633.466.633

19、.493.76.3406027.272.8 阿米卡星 22.277.825757525-18.181.9 头孢吡肟 55.544.5505093.76.3901027.272.8 头孢他啶 44.455.633.366.793.76.3604036.363.7 头孢呋辛 77.722.391.68.493.76.3901054.645.4 美洛培南 010016.683.4010010000100 庆大霉素 66.633.470.829.287.512.5100045.454.6 米诺环素 44.455.620.879.218.781.3109018.181.9 头孢曲松 55.544.558

20、.341.712.587.5100054.645.4 氨苄西林 100091.68.487.512.5901090.19.1 复方新诺 66.633.48.491.65050307063.636.4 氨曲南 55.544.562.537.55050802054.645.4 注: R 耐药率 S 敏感率 “-”未检测（临床治疗不考虑此类药物） 3.3 痰液标本中革兰阳性菌药敏体外分析 体外药敏结果显示，G+菌对万古霉素、利奈唑胺均敏感（100%），而金黄 色葡萄球菌还对米诺环素敏感（100%）。 同样，所有革兰阳性菌都存在不同程度耐药。革兰阳性菌中金黄色葡萄球 菌对青霉素、红霉素耐药率分别达到了

21、 90%、70%；肺炎链球菌对红霉素、四 环素、耐药率达到了 90%，对四环素、青霉素耐药率也达到了 83.3%。见表 4 7 表 4 常见革兰阳性菌具体药敏结果（%） 抗生素金黄色葡萄球菌肺炎链球菌 RSRS 青霉素 901083.316.7 万古霉素 01000100 利奈唑胺 01000100 加替沙星 208016.683.4 四环素 406083.316.7 克林霉素 40601000 氧氟沙星 307016.683.4 环丙沙星 2080- 米诺环素 0100- 庆大霉素 2080- 红霉素 70301000 注: R 耐药率 S 敏感率 “-”未检测（临床治疗不考虑此类药物） 8

22、 4 讨论 本院从呼吸道痰标本中分离出的致病菌主要以革兰阴性杆菌为主 , 其中占 病原菌的 70%，其次为革兰阳性球菌和真菌，分别占16%和14%。革兰阴性 菌中检出较多的为铜绿假单胞菌24株(占病原菌的 24%)、鲍曼不动杆菌 16 株(占病原菌的16%)、肺炎克雷伯菌11株(占病原菌的11%)、嗜麦芽窄食单 胞菌10株(占病原菌的 10%)、大肠埃希菌 9株(占病原菌的9%)为主要病原 菌与文献4报道的顺序及检出率接近。以上研究与全国医院感染监控网及广州 地区呼吸道感染常见病原菌的分布报道的73.5%革兰阴性菌分布的相接近7-8 革兰阴性杆菌中铜绿假单胞菌对氨苄西林、头孢呋辛、庆大霉素、环

23、丙沙星 和耐氨曲南药率均达 60%以上，对复方新诺明、美洛培南、米诺环素和阿米 卡星敏感度较高与国内研究类似9；鲍曼不动杆菌对环丙沙星、头孢吡肟、头 孢呋辛、头孢他啶耐药率达90%以上；对美洛培南和孢曲松敏感率到达了 100%和 87.5%，以上研究与鲍曼不动杆耐药性调查及卫生部全国细菌耐药监测网发布的 2012 年东北地区细菌药敏检测类似10。有研究提示可以通过环境清洁、消毒 等方式可以减少鲍曼不动杆菌在环境中的植物，减少鲍曼不动杆菌的院内传播， 对预防和控制鲍曼不动杆菌的感染及减少耐药产生是很有意义的11。肺炎克雷 伯对氨苄西林、复方新诺明耐药率达100%、63.6%，对美洛培南、阿米卡星

24、 和米诺环素敏感度较高，总体抗生素耐药率较国内部分报道低12。嗜麦芽窄食 单胞菌对美洛培南、庆大霉素、头孢曲松、氨苄西林和头孢吡肟达到90%以上， 对米诺环素和复方新诺明敏感率较高，与国内报道接近13。大肠埃希菌对氨苄 西林、头孢呋辛、环丙沙星、庆大霉素和复方新诺明耐药率达 60%以上，对 美洛培南和阿米卡星敏感率较高，与国内报道接近14。 革兰阳性菌检出的细菌体外药敏结果显示常见抗生素中，革兰阳性菌中金黄 色葡萄球菌耐药结果中，对青霉素、红霉素耐药率分别达到了 90%、70%；对 万古霉素、利奈唑胺和米诺环素耐药率都为 0%；肺炎链球菌对红霉素、克林霉 素、耐药率达到了 90%以上，对四环素

25、、青霉素耐药率达到了 83.3%。本实验 未发现对米诺环素、利奈唑胺和万古霉素耐药的菌株，与国内报道一致15。 9 真菌感染常见于由于机体免疫力低下，机会性感染如患者常见并发 症之一，抗真菌药物如氟胞嘧啶、伏立康唑、氟康唑、两性霉素、伊曲 康唑等，其中两性霉素是目前公认抗真菌感染的首选药，它能选择性地与真 菌细胞膜上的麦角甾醇结合，增加细胞膜的通透性，使菌体内物质外渗，导致 真菌死亡。由于两性霉素副作用大，临床上一般将氟康唑作抗真菌首选药15。 10 5 结论 呼吸道感染以 G- 菌为主，其次为 G+菌与真菌，不同的呼吸道感染病原菌均 存在不同程度传统药物的耐药，但未出现明显新的耐药菌流行。

26、医院要特别加强 G- 菌呼吸道感染的院感的防治措施的制定，呼吸道感染患 者的临床治疗应结合药敏试验结果合理使用抗生素,以减少新的耐药菌产生。 11 参考文献 1 Chastre J, Fagon JY. Ventilator-associated pneumoniaJ. Am Respir Crit Care Med, 2016 165, 165(7): 867-903. 2 Muscedere JG, Day A, Heyland DK. Mortality, attributable mortality,and clinical events as end points for clini

27、cal trials of ventilator-associatedpneumonia and hospital-acquired pneu- moniaJ. Clin Infect Dis, 2014,51(Suppl 1): S120-S125. 3 李湘艳,郑波,侯芳.2010 年度卫生部全国细菌耐药监测报告:痰标本来源细菌耐药 监 测J.中华医院感染学杂志 ,2011,21(24):5157-5161 4 中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组.慢性阻塞性肺疾病诊治指南S.中医 内科杂志,20014,41(9):640-646. 5 张秀勤,石德秀,廖丽.慢性支气管炎患者急性呼吸

28、道感染的病原学调查J.中华医院感 染学杂志,2014,11:445 6 史文昕,史文晶,李静峰,等.住院患者呼吸道感染病原菌临床调查与分析J.中国感染控 制杂志,2016,5 (2):161-162. 7文细毛,任南,徐秀华,等.全国医院感染监控网医院感染病原菌分布及耐药性分析J.中 华医院感染学杂志,20015, 12 (4):241 -244. 8 叶惠芬,吕苏成,苏丹虹,等.广州地区呼吸道感染常见病原菌的分布与耐药性J.中国抗 感染化疗杂志,20013,2:146-150. 9卢亚林, 何咪霖. 呼吸道感染中铜绿假单胞菌耐药性调查分析J. 中国卫生检验杂志， 2015, 25(2): 2

29、86-288. 10 张智洁, 王军, 孙继梅等. 卫生部全国细菌耐药监测网 2012 年东北地区细菌耐药监 测J. 中国临床药理 学杂志, 2012, 27(12):948-953, 975. 11 Weber DJ, Rutala WA, Miller MB, et al. Role of hospital surfaces inthe transmission of emerging health care-associated pathogens: norovirus,Clostridium difficile, andAcinetobacter speciesJ. Am J Infect Control,2014, 38(5Suppl