实验9过氧化氢酶活性测定课件

1、实验9过氧化氢酶活性测定1 实验9过氧化氢酶活性测定2 一一 实验目的实验目的 掌握和学习测定过氧化氢酶活性的原理掌握和学习测定过氧化氢酶活性的原理 和方法；和方法； 2 2 了解过氧化氢酶的作用。了解过氧化氢酶的作用。 实验9过氧化氢酶活性测定3 二二 实验原理实验原理 过氧化氢酶（过氧化氢酶（catalasecatalase）属于血红蛋）属于血红蛋 白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解 为水和分子氧，在此过程中起传递电子为水和分子氧，在此过程中起传递电子 的作用，过氧化氢既是氧化剂又是还原的作用，过氧化氢既是氧化剂又是还原 剂。可根据剂。可根据H H2 2O

2、 O2 2的消耗量或的消耗量或O O2 2的生成量测的生成量测 定该酶活力大小。定该酶活力大小。 实验9过氧化氢酶活性测定4 在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化 氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸 性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H H2 2O O2 2 的量。的量。 反应式反应式 5H2O2+2KMnO4+4H2SO4 5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4 实验9过氧化氢酶活性测定5 三三 实验器材实验器材 n10%H10

3、%H2 2SOSO4 4； n0.2 mol/L pH7.80.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；磷酸缓冲液； n0.1mol/L KMnO0.1mol/L KMnO4 4标准液：称取标准液：称取KMnOKMnO4 4（ARAR）3.1605g3.1605g，用新煮，用新煮 沸冷却蒸馏水配制成沸冷却蒸馏水配制成1000mL1000mL，再用，再用0.1mol/L 0.1mol/L 草酸溶液标定；草酸溶液标定； n0.1mol/L H2O20.1mol/L H2O2：取：取30%H2O2 30%H2O2 （17.6mol/L17.6mol/L）溶液）溶液5.68mL5.68mL，稀，稀 释至

4、释至1000mL1000mL，用标准，用标准0.02mol/L KMnO40.02mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）溶液（在酸性条件下） 标定。标定。 1 1试剂试剂 实验9过氧化氢酶活性测定6 2 2材料材料: :小麦叶片小麦叶片 3 3主要设备：离心机，恒温箱，酸主要设备：离心机，恒温箱，酸 式滴定管式滴定管 实验9过氧化氢酶活性测定7 四四 方法步骤方法步骤 1、 酶液提取酶液提取 取小麦叶片取小麦叶片2.5g2.5g加入加入pH7.8pH7.8的磷酸缓冲溶液的磷酸缓冲溶液 少量，研磨成匀浆，转移至少量，研磨成匀浆，转移至25ml25ml容量瓶中，容量瓶中， 用该缓冲液冲洗研钵，

5、并将冲洗液转至容用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容 量瓶中，用同一缓冲液定容，量瓶中，用同一缓冲液定容，40004000转离心转离心 15min15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。 实验9过氧化氢酶活性测定8 2 2 、滴定：取、滴定：取50mL50mL三角瓶三角瓶3 3个（个（2 2个测定，另个测定，另1 1 个为对照），测定瓶中加入酶液个为对照），测定瓶中加入酶液2.5mL2.5mL，对，对 照加煮死酶液照加煮死酶液2.5mL2.5mL，再加入，再加入0.1mol/L H0.1mol/L H2 2O O2 2 2.5mL 2.5mL ，同时计时，于，

6、同时计时，于3030恒温水浴中保温恒温水浴中保温 10min10min，立即加入，立即加入10%H10%H2 2SOSO4 42.5mL2.5mL。 3 3、用、用0.1mol/L KMnO0.1mol/L KMnO4 4标准溶液滴定，至出现标准溶液滴定，至出现 粉红色（在粉红色（在30s30s内不消失）为终点。内不消失）为终点。 实验9过氧化氢酶活性测定9 酶活性：每酶活性：每g鲜重样品鲜重样品1min内分解内分解H2O2的的mg数表示数表示 tVW 1.7VB)(A ）mg/g.minOH过氧化氢酶活性（ S T 22 式中：式中：A A对照对照KMnOKMnO4 4滴定滴定mLmL数；数； B B酶反应后酶反应后KMnOKMnO4 4滴定滴定mLmL数；数； V VT T提取酶液总量（提取酶液总量（mLmL）；）； V VS S反应时所用酶液量（反应时所用酶液量（mLmL）；）； W W样品鲜重（样品鲜重（g g）；）； T T反应时间（反应时间（minmin）；）； 1.71.71mL0.1mol/L KMnO1mL0.1mol/L KMnO4 4相当于相当于1.7mgH1.7mgH2 2O O2 2。