九组：微生物的实验室培养 yong

1、 而而 自身不能合成）自身不能合成） 培养基的用途培养基的用途 液体培养基：增菌液体培养基：增菌 固体培养基：纯化，增菌固体培养基：纯化，增菌 半固体培养基：动力检测，保种半固体培养基：动力检测，保种 划分标准划分标准培养基种类培养基种类特点特点用途用途 物理性质物理性质 化学成分化学成分 天然培养基天然培养基 合成培养基合成培养基 用途用途 鉴别培养基鉴别培养基 培养基的种类培养基的种类 不加凝固剂不加凝固剂 加凝固剂，如加凝固剂，如琼脂琼脂 工业生产工业生产 观察微生物的运动、观察微生物的运动、 分类鉴定分类鉴定 微生物分离、鉴定、微生物分离、鉴定、 活菌计数、保藏菌活菌计数、保藏菌 种种

2、 含化学成分不明确的天然物含化学成分不明确的天然物 质质 工业生产工业生产 培养基成分明确培养基成分明确分类、鉴定分类、鉴定 在培养基中加入某种化学物在培养基中加入某种化学物 质质, ,以抑制不需要的微生物以抑制不需要的微生物 的生长的生长, ,促进所需要的微生促进所需要的微生 物的生长物的生长 培养、分离出特培养、分离出特 定微生物定微生物 在培养基中加入某种指示剂在培养基中加入某种指示剂 或化学药品或化学药品, ,用以鉴别不同用以鉴别不同 种类的微生物种类的微生物 鉴别不同种类微鉴别不同种类微 生物生物 选择培养基选择培养基 液体培养基液体培养基 半固体培养基半固体培养基 固体培养基固体培

3、养基 培养基培养基应用应用 加入青霉素加入青霉素分离酵母菌、霉菌等真分离酵母菌、霉菌等真 菌菌 加入高浓度食盐加入高浓度食盐分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌 不加氮源不加氮源分离固氮菌分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳不加含碳有机物的无碳 培养基培养基 分离自养型微生物分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素加入青霉素等抗生素分离导入了目的基因的分离导入了目的基因的 受体细胞受体细胞 加加入入氨基喋呤、次黄嘌氨基喋呤、次黄嘌 呤和胸腺嘧啶呤和胸腺嘧啶核苷核苷 分离杂交瘤细胞分离杂交瘤细胞 练习练习 1.不能作为异养微生物碳源的是（不能作为异养微生物碳源的是（ ） A牛肉膏牛肉膏B含碳有机物含碳有

4、机物 C石油石油D含碳无机物含碳无机物 2.自养型微生物与异养型微生物的培养基的自养型微生物与异养型微生物的培养基的 主要差别是（主要差别是（ ） A碳源碳源B氮源氮源 C无机盐无机盐D生长因子生长因子 3.下列关于生长因子的说法中，不正确的一项是下列关于生长因子的说法中，不正确的一项是 （ ） A是微生物生长不可缺少的微量有机物是微生物生长不可缺少的微量有机物 B是微生物生长不可缺少的微量矿质元素是微生物生长不可缺少的微量矿质元素 C主要包括维生素、氨基酸和碱基等主要包括维生素、氨基酸和碱基等 D一般是酶和核酸的组成成分一般是酶和核酸的组成成分 4 4. .通过选择培养基可以从混杂的微生物群

5、体中分离出所需的通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的 微生物。在碳源为纤维素的培养基上，大部分微生物无法生长；微生物。在碳源为纤维素的培养基上，大部分微生物无法生长； 在培养基中加入青霉素，可以抑制细菌和放线菌。利用上述方法在培养基中加入青霉素，可以抑制细菌和放线菌。利用上述方法 能从混杂的微生物群体中分别分离出（）能从混杂的微生物群体中分别分离出（） 大肠杆菌霉菌放线菌纤维素分解菌大肠杆菌霉菌放线菌纤维素分解菌 A.A.B.B.C.C.D.D. 解析：解析：选选A A。本题考查了微生物分离知识。纤维素分解菌可。本题考查了微生物分离知识。纤维素分解菌可 以利用纤维素，大部分微生物

6、却不能；培养基中加入青霉素可以利用纤维素，大部分微生物却不能；培养基中加入青霉素可 以抑制细菌和放线菌，但霉菌能够生长。以抑制细菌和放线菌，但霉菌能够生长。 编号编号成分成分含量含量 粉状硫粉状硫10g10g （NHNH4 4） 2 2SO SO4 4 0.4g0.4g K K2 2HPOHPO4 44.0g4.0g MgSOMgSO4 49.25g9.25g FeSOFeSO4 40.5g0.5g CaClCaCl2 20.5g0.5g HH2 2OO100ml100ml 5 5右表是某微生物培养右表是某微生物培养 基成分，请据此回答：基成分，请据此回答： （1 1）右表培养基可培养）右表培

7、养基可培养 的微生物类型的微生物类型 是是 。 （2 2）若不慎将过量）若不慎将过量 NaClNaCl加入培养基中。如不加入培养基中。如不 想浪费此培养基，可再加想浪费此培养基，可再加 入入 ，用于，用于 培养培养 ， 自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 （3 3）若除去成分，加入）若除去成分，加入 （CH2OCH2O），该培养基可用于培），该培养基可用于培 养养 。 （4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有_ 类。类。 （5 5）不论何种培养基，在各种成）不论何种培养基，在各种成 分都溶化后分装前，要进行的分都溶化后分装前，要进行的 是是 。 （

8、6 6）右表中各成分重量确定的原）右表中各成分重量确定的原 则是则是 _。 （7 7）若右表培养基用于菌种鉴定，）若右表培养基用于菌种鉴定， 应该增加的成分应该增加的成分 。 固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂） 编号编号成分成分含量含量 粉状硫粉状硫10g10g （NHNH4 4） 2 2SO SO4 4 0.4g0.4g K K2 2HPOHPO4 44.0g4.0g MgSOMgSO4 49.25g9.25g FeSOFeSO4 40.5g0.5g CaClCaCl2 20.5g0.5g HH2 2OO

9、 100m100m l l 1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的在培养微生物的 操作中，所有防止杂菌污染的方法。操作中，所有防止杂菌污染的方法。 无论是随后将要学到的无论是随后将要学到的倒平板倒平板、平平 板划线板划线操作，还是操作，还是稀释平板涂布法稀释平板涂布法， 其操作中的每一步都需要做到其操作中的每一步都需要做到“无无 菌菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、，即防止杂菌污染。只有熟练、 规范地进行无菌操作，才可能成功规范地进行无菌操作，才可能成功 地培养微生物。地培养微生物。 （）（）消毒定义：消毒定义： 利用化学或物理方法，杀死大部份利用化学或物理

10、方法，杀死大部份 致病微生物的过程。区分为致病微生物的过程。区分为高程度消毒高程度消毒 （High-level DisinfectionHigh-level Disinfection）、）、中程度中程度 消毒消毒（Intermediate-level Intermediate-level DisinfectionDisinfection）、）、低程度消毒低程度消毒（Low-Low- level Disinfectionlevel Disinfection）三种方式。）三种方式。 2.2.消毒与灭菌的概念消毒与灭菌的概念 （2 2）灭菌的定义：）灭菌的定义： 以化学剂或物理方法消灭以化学剂或物理

11、方法消灭所有所有微微 生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、 霉菌及病毒，而达到霉菌及病毒，而达到完全无菌完全无菌之过程。之过程。 灭菌与消毒技术是微生物有关工灭菌与消毒技术是微生物有关工 作中最普通也是最重要的技术。作中最普通也是最重要的技术。 分类分类定义定义方法方法 灭菌法灭菌法 杀灭一切微生物杀灭一切微生物 物理法：热力、辐射、微物理法：热力、辐射、微 波、等离子体波、等离子体 化学法：醛类、烷化剂化学法：醛类、烷化剂 高效消高效消 毒法毒法 杀灭一切致病微杀灭一切致病微 生物生物 紫外线、含氯剂、臭氧、紫外线、含氯剂、臭氧、 复配剂等复配剂等 中效消中效

12、消 毒法毒法 杀灭除芽孢外的杀灭除芽孢外的 致病微生物致病微生物 超声波、碘类、醇类、酚超声波、碘类、醇类、酚 类类 低效消低效消 毒法毒法 杀灭细菌繁殖体、杀灭细菌繁殖体、 亲脂病毒亲脂病毒 单链季胺盐、双胍类、中单链季胺盐、双胍类、中 草药、金属离子草药、金属离子 思考：思考： 1. 获得纯净培养物的关键获得纯净培养物的关键？ 2. 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其 他外来微生物污染外，还有什么目的？他外来微生物污染外，还有什么目的？ （P15旁栏思考）旁栏思考） 3. 消毒和灭菌有何不同？消毒和灭菌有何不同？ 4. 常用的消毒和灭菌方法有哪些？

13、常用的消毒和灭菌方法有哪些？ 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵 （详情请见下一页）（详情请见下一页） 定义定义常用方法常用方法 微生物培养和组微生物培养和组 培中的应用培中的应用 消消 毒毒 使用较为温和使用较为温和 的物理或化学的物理或化学 方法杀死物体方法杀死物体 表面或内部的表面或内部的 部分微生物部分微生物 煮沸煮沸玻璃仪器玻璃仪器 紫外线紫外线实验室、操作台、实验室、操作台、 衣物等衣物等 酒精溶液酒精溶液手、外植体等手、外植体等 次氯酸钠溶液次氯酸钠溶液 等等 外植体外植体 灭灭 菌菌 使用

14、强烈的理使用强烈的理 化因素杀死物化因素杀死物 体内外所有的体内外所有的 微生物，包括微生物，包括 芽孢和孢子芽孢和孢子 高压蒸汽高压蒸汽培养基、玻璃仪器、培养基、玻璃仪器、 棉塞、牛皮纸等棉塞、牛皮纸等 灼烧灼烧接种环、涂布器接种环、涂布器 干热干热玻璃仪器玻璃仪器 比比 较较 项项 理化因素的理化因素的 作用强度作用强度 消灭微生物消灭微生物 的数量的数量 芽孢和孢子芽孢和孢子 能否被消灭能否被消灭 消消 毒毒 灭灭 菌菌 消毒与灭菌的比较消毒与灭菌的比较 较为温和较为温和 强烈强烈 部分生活状部分生活状 态的微生物态的微生物 全部微生物全部微生物 不能不能 能能 表面灭菌和空气表面灭菌和

15、空气 灭菌等使用灭菌等使用 紫紫 外线外线 灭菌法，灭菌法， 所用器械是所用器械是 紫紫 外灯外灯 。照射。照射 30min30min，可先喷，可先喷 洒石炭酸或煤酚洒石炭酸或煤酚 皂皂溶液加强消毒溶液加强消毒 效果。效果。 （2）灭菌）灭菌 a 灼烧灭菌灼烧灭菌 b 干热灭菌干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 a.灼烧灭菌灼烧灭菌 微生物的微生物的接种工接种工 具具 (接种环、接种针接种环、接种针) 或其他金属用具直接或其他金属用具直接 在在火焰的充分燃烧层火焰的充分燃烧层 灼烧。灼烧。 注意适用范围注意适用范围 b.干热灭菌干热灭菌 160170 ；12h 能耐高温的需要保持干能耐高温

16、的需要保持干 燥的物品燥的物品( 玻璃器皿玻璃器皿) c.高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 100kPa 121 15-30min 通常用于培养基的灭菌通常用于培养基的灭菌 最常用最常用的灭菌方法是的灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌，它可以，它可以 杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休 眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被 破坏。破坏。 有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌高温干热灭菌。为了。为了 防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻 璃烧瓶

17、都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花 塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只 可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过 。 而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器 具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。 即学即练即学即练 n1. 下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的 是() nA防止杂菌污染 nB消灭杂菌 nC培养基和发酵设备都必须灭菌 nD灭菌必须在接种前 2关于灭菌和消毒的不正确的理

18、解是() A灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B消毒和灭菌实质上是相同的 C接种环用烧灼的方法灭菌 D常用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品 法 关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是（关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是（ ） A.A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B.B.牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸 C.C.待培养基冷却至待培养基冷却至5050左右时，进行倒平板左右时，进行倒平板 D.D.待平板冷却凝固约待平板冷却凝固约5min5m

19、in10min10min后，将平板倒过来放置后，将平板倒过来放置 解析：选A。本题考查了牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备过 程。其顺序为：计算称量溶化灭菌倒平板，故A项错误。 2010年上学期湖南长郡卫星远程学校制作 05 例例2. 下面对灭菌的理解不正确的是下面对灭菌的理解不正确的是 () A. 防止杂菌污染防止杂菌污染 B. 消灭杂菌消灭杂菌 C. 培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D. 灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前 B 练习 1.获得纯净培养物的关键是 A 将用于微生物培养的器皿，接种用具和 培养基等器具进行灭菌 B 接种纯种细菌 C 适宜环境条件下培养 D 防止外来

20、杂菌的入侵 练习 1.获得纯净培养物的关键是 A 将用于微生物培养的器皿，接种用具和 培养基等器具进行灭菌 B 接种纯种细菌 C 适宜环境条件下培养 D 防止外来杂菌的入侵 练习 2.下列操作与无菌技术无关的是 A 接种前用肥皂洗双手,再用酒精擦拭双手 B 接种前用火焰烧灼接种针 C 培养在50左右时搁置斜面 D 在酒精灯的火焰旁完成 练习 2.下列操作与无菌技术无关的是 A 接种前用肥皂洗双手,再用酒精擦拭双手 B 接种前用火焰烧灼接种针 C 培养在50左右时搁置斜面 D 在酒精灯的火焰旁完成 练习 3.外科手术器械和罐头食品的处理，要以能 够杀死什么为标准 A 球菌 B 杆菌 C 螺旋菌

21、D 芽孢 练习 3.外科手术器械和罐头食品的处理，要以能 够杀死什么为标准 A 球菌 B 杆菌 C 螺旋菌 D 芽孢 例例1 1某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了 实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。 请回答与此实验相关的问题。请回答与此实验相关的问题。 （1 1）培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了）培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了 和和 。除此之外，培养基还必。除此之外，培养基还必 须含有的基本成分是须含有的基本成分是 和和 。 （2

22、 2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是 。 （3 3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖 水样品的平板置于水样品的平板置于 中培养，培养的温度设定中培养，培养的温度设定 在在3737。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接 种种 作为对照进行实验。作为对照进行实验。 （4 4）培养）培养2020小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌 落，这说明湖水样品中有落，这说明湖水样品中有 种细菌。一般说来，

23、种细菌。一般说来， 菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越 。 （5 5）如果提高培养基中）如果提高培养基中NaClNaCl的浓度，可以用于筛选耐的浓度，可以用于筛选耐 细菌，这种培养基被称为细菌，这种培养基被称为 。 练习 2.某学校打算开辟一块食用菌栽培基地,以 丰富学生的劳动技术课内容,首先对食用菌 实验室进行清扫和消毒处理,准备食用菌栽 培所需的各种原料和用具,然后从菌种站购 来各种食用菌菌种.请回答以下问题: 练习 对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试 管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养 基所需的原料： _ 其中提供氮源的主要是_； 提供能源

24、的主要物质是_； 琼脂的作用是_，它不提供营养。 练习 对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试 管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养 基所需的原料： _ 其中提供氮源的主要是_； 提供能源的主要物质是_； 琼脂的作用是_，它不提供营养。 牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂 练习 对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试 管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养 基所需的原料： _ 其中提供氮源的主要是_； 提供能源的主要物质是_； 琼脂的作用是_，它不提供营养。 牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂 蛋白胨 练习 对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试 管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养 基所需的原料：

25、 _ 其中提供氮源的主要是_； 提供能源的主要物质是_； 琼脂的作用是_，它不提供营养。 牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂 蛋白胨 牛肉膏 练习 微生物在生长过程中对各种成分所需量 不同,故制备培养基时各成分要有合适的 _,在烧杯加入琼脂后要不停地_, 防止_. 练习 微生物在生长过程中对各种成分所需量 不同,故制备培养基时各成分要有合适的 _,在烧杯加入琼脂后要不停地_, 防止_. 比例 练习 微生物在生长过程中对各种成分所需量 不同,故制备培养基时各成分要有合适的 _,在烧杯加入琼脂后要不停地_, 防止_. 比例搅拌 练习 微生物在生长过程中对各种成分所需量 不同,故制备培养基时各成分要有合适的 _,在烧杯加入琼脂后要不停地_, 防止_. 比例搅拌 琼脂糊底引起烧杯破裂 练习 将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加 棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入 _中灭菌，压力为_， 温度为_，时间_， 灭菌完毕拔掉电源， 待锅内压力_，将试管取出。 练习 将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加 棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入 _中灭菌，压力为_， 温度为_，时间_， 灭菌完毕拔掉电源， 待锅内压力_，将试管取出。 高压灭菌锅 练习 将配制好的培养基转移到锥