卵巢黄素化颗粒细胞与胚胎质量和妊娠结局关系的探讨

1、卵巢黄素化颗粒细胞与胚胎质量和妊娠结局关系的探讨 【摘要】目的：探讨在辅助生殖技术中卵巢黄素化颗粒细胞与胚胎质量和妊娠结局的关系。方法：回顾性分析2012年1月至2013年5月因输卵管性因素不育到十堰市人民医院生殖医学中心行ivf-et的患者，选取全部卵巢黄素化颗粒细胞的110例患者作为黄素化颗粒细胞组，随机选择同期颗粒细胞形态无异常的335例患者作为颗粒细胞形态正常组，比较两组间受精、早期胚胎发育、囊胚形成及妊娠结局的差异。结果：颗粒细胞形态正常组与黄素化颗粒细胞组之间的受精率、优质胚胎率、可利用胚胎率及囊胚形成率差异均有统计学意义（p0.05）。结论：卵巢黄素化颗粒细胞可能影响其受精、胚胎

2、发育及囊胚的形成。 【关键词】辅助生殖技术；胚胎；颗粒细胞 relationship between ovarian luteinization granulosa cell， embryo quality and ivf-et pregnancy outcomezhang xin， deng kai， luo qinbing， xu hongyi， zhang changjun. center for reproduction medicine， peoples hospital affiliated to hubei university of medicine， shiyan 44200

3、0， china 【abstract】objectives： to investigate the relationship between ovarian luteinization granulosa cells， embryo quality and regnancy outcome in assisted reproductive technology. method： research objects were selected through retrospective analysis from the ivf-et patients visiting center for re

4、productive medicine of peoples hospital affiliated to hubei university of medicine from january 2012 to may 2013 due to oviduct factors. 110 patients with ovarian luteinization granulosa cells were regarded as group of luteinization granulosa cells， while 335 patients with no abnormal particle morph

5、ology were randomly selected as the normal group. the fertilization， early embryonic development， blastocyst formation and pregnancy outcome of the groups were compared. results： the differences of fertilization rate， high quality embryo rate， available embryo rate and blastocyst formation rate betw

6、een the 2 groups were statistically significant （p0.05）. conclusion： ovarian luteinization granulosa cells may affect the fertilization， embryo development and blastocyst formation. 【key words】art； embryo； granulosa cells 【中图分类号】r711.75【文献标志码】a 随着辅助生殖技术的快速发展，控制性超排方案和监测的不断完善，卵裂期胚胎移植或囊胚移植后的妊娠率显著提高，但仍然

7、有40%的患者移植术后未妊娠，其原因和机制尚需进一步研究。如何提高体外受精-胚胎移植（ivf-et）中的胚胎着床率和妊娠率，一直是胚胎学家和临床医师的追求。 在控制超排卵（coh）中，注射人绒毛膜促性腺激素（hcg）后，血清孕酮（p）水平过早的升高，同时在黄体生成素（lh）的作用下伴随颗粒细胞（granulosa cell，gc）过早向黄体细胞分化的过程，称为过早黄素化（premature luteinization，pl）。 颗粒细胞（gc）是卵泡内主要的细胞成分，颗粒细胞上的受体在促性腺激素的作用下可以促进卵母细胞的成熟，同时还能保持卵母细胞核和胞质分裂过程的正常进行。然而卵母细胞的正常受

8、精、原核的形成、进行卵裂、形成囊胚直到胎儿成熟，这些过程的顺利完成与卵母细胞的成熟度有直接的联系。颗粒细胞与卵母细胞之间又通过缝隙连接相互影响、相互作用。 以前研究主要集中在卵母细胞形态学差异与其卵母细胞受精、胚胎发育和妊娠结局关系上，目前国内外对过早黄素化颗粒细胞对ivf-et妊娠率的影响仍存在争议，因此该研究通过回顾性分析法来探讨过早黄素化颗粒细胞对卵母细胞成熟、受精、胚胎发育和妊娠结局是否存在的影响，为研究其作用机制奠定基础，从而有效的提供其着床率和妊娠率。 1材料与方法 1.1研究对象 系统回顾分析2012年1月至2013年1月在我生殖中心接受常规体外受精-胚胎移植（ivf-et）治疗

9、的患者，所有患者均采用标准长方案，选取卵丘颗粒细胞凝集的110例患者作为黄素化颗粒细胞组，随机选取同期卵丘颗粒细胞形态正常的335例患者作为对照组，两组均经过宫腔镜、子宫输卵管造影术（hsg）、b超、生殖内分泌检查，精液分析，双方染色体检查，证实输卵管因素是不孕的主要原因。 1.2控制性超促排卵方案标准 长方案月经黄体中期开始使用醋酸曲普瑞林（商品名： decapep tyl，德国辉凌制药公司） ，每日0.05mg皮下注射，月经第3天查血激素，如血清雌二醇（ e2 ） 0.05）。见表1。表1两组患者的基本情况组别年龄（岁）不孕年限（年） 子宫内膜厚度（mm）bm i颗粒细胞形态正常组29.2

10、14.012.950.2212.915.1521.61 2.40黄素化颗粒细胞组30.335.053.010.2210.445.9621.06 2.40 2.2注射hcg日卵泡刺激素（fsh）、雌二醇（e2）及孕酮（p）水平的比较与对照组比较黄素化颗粒细胞卵泡液中fsh、p差异有统计学意义，而e2没有明显的统计学意义。见表2。 2.3黄素化颗粒细胞对卵母细胞的成熟、受精、囊胚形成和妊娠结局的影响黄素化颗粒细胞对受精及早期胚胎发育的影响，该研究中黄素化颗粒细胞获卵972个，其中m卵母细胞为691个，卵母细胞成熟率为71.09%，两组无明显差异（p0.05）。黄素化颗粒细胞组受精率明显低于正常对照

11、组，差异有统计学意义（p 3讨论 目前国内外有不少文献报道，关于过早黄素化对ivf-et妊娠率的影响，由于样本量和研究方法不同结果也不尽一致。有研究认为过早颗粒细胞黄素化可影响卵子和胚胎质量，诱导卵母细胞过早恢复减数分裂，使子宫内膜过早向分泌期转换，影响子宫容受性，从而影响妊娠率。但是也有研究认为其对临床结局没有影响5。 颗粒细胞是卵泡结构中一类十分重要的细胞，颗粒细胞的功能状态会影响卵母细胞的质量和随后胚胎的发育潜能6，卵丘颗粒细胞可以通过自分泌或旁分泌分泌一些生长因子，从而促进卵母细胞的生长并发育成熟。本研究表明黄素化的颗粒细胞，卵母细胞的成熟度不受影响，但影响其后期的受精率和优胚率，可能

12、是由于黄素化的颗粒细胞对卵母细胞的发育潜能有影响。 卵丘颗粒细胞在art技术过程中通常是经过脱颗粒方法被丢弃和忽略的细胞成分，但是卵丘颗粒细胞的形态及功能可能与卵母细胞生长发育及成熟度情况有一定的相关性，有研究证实不同成熟度的卵母细胞上的颗粒细胞fsh受体数目和分布也不同，一个成熟的卵母细胞包括核成熟及胞质成熟，二者往往是不同步的，一旦卵母细胞的颗粒细胞层被剥脱，卵母细胞就很难在体外培养成熟，因此，研究人类颗粒细胞，可能寻找出预测卵母细胞质量及胚胎发育潜能的标记，将会给今后胚胎选择方法提供新的思路7。 研究表明，吕慧敏等8实验证明fsh可促进黄素化颗粒细胞增殖，从而使颗粒细胞分泌孕酮（p），导

13、致颗粒细胞进一步的黄素化。fsh可能通过与其受体间的相互作用增加igf-1和类固醇水平，从而抑制颗粒细胞的凋亡9。本实验通过检测注射hcg日激素水平发现，发生过早颗粒细胞黄素化者血液中fsh及p与正常组比较有所上升，因此fsh与p具有协同作用，从而增加颗粒细胞过早黄素化，导致颗粒细胞凋亡。 研究发现，颗粒细胞中8-羟基脱氧鸟苷含量增加与ivf时卵母细胞受精率低下及胚胎质量差有关10。通过本研究发现与对照组比较，虽然黄素化组对卵母细胞的成熟率没有影响，但黄素化颗粒细胞卵母细胞受精率（67.2%）及优质胚胎率（43.2%）明显减低，差异有统计学意义（p 有研究表明，卵丘颗粒细胞中star，cox2

14、，areg，scd1和scd5等基因表达的增加与卵母细胞的核成熟有相关性。经过囊胚培养不能发育成囊胚的胚胎的卵丘细胞中这些基因的表达，与发育能达囊胚期的胚胎比较明显升高。通过与对照组比比较，黄素化颗粒细胞囊胚形成率（24.3%）减低，过早黄素化的卵母细胞的某些基因被抑制，从而使囊胚的形成率下降。但黄素化的颗粒细胞组的可利用胚胎数较正常组较少，还需要后期增加黄素化颗粒细胞妊娠患者的标本量来进一步研究。 通过商业化基因芯片比较ivf后妊娠与未妊娠妇女的表达改变与颗粒细胞，发现cdc42、3bhsd、serpine2、fdx1、cypa191妊娠明显相关11。assou等12报道了颗粒细胞bcl2l

15、11上调（参与凋亡），pck1下调（参与糖异生作用）及nfib下调（转录因子）与胚胎形态学及妊娠结局有关，认为这3个基因可以作为预测妊娠的标记物。通过本研究发现其黄素化颗粒细胞组临床妊娠率（11.1%）较正常组明显下降，有明显的统计学意义（p 通过以上分析说明颗粒细胞功能的正常对卵母细胞的发育及成熟是必须的，对其临床妊娠率也存在一定的影响。但是其通过黄素化颗粒细胞上何种特殊受体来影响的，还需要我们后期通过对动物基因受体实验进一步来探讨研究，为过早黄素化的发生预防、机制以及为临床合理促排用药提供良好的科学依据。 参考文献 1long x， peng c， lu g.isolation and i

16、dentification of genes differentially expressed in premature luteinization granulosa cell during controlled ovarian hyperstimulation.fertil steril，2009，92（5）：1767-1771. 2kahraman s，yakin k，donmez e， et al. relationship between granular cytoplasm of oocytes and pregnancy outcome following intracytopl

17、asmic sperm injection. hum reprod，2000，15 （11） ： 23-90. 3scott l. pronuclear scoring as a predictor of embryo development.reprod biomed online，2003，6 （2）：201. 4jansen r，mortimer d （eds）. towards reproductive certainty： fertilityand genetics beyond 1999. carnforth，uk： parthenon publishing，1999： 378-3

18、88. 5beckers ng， macklon ns， eijkemans mj， et al.nonsupplemented luteal phase characteristics after the administration of recombinant human chorionic gonadotropin， recombinant luteinizing hormone， or gonadotropin-releasing hormone （gnrh） agonist to induce final oocyte maturation in in vitro fertiliz

19、ation patients after ovarian stimulation with recombinant follicle-stimulating hormone and gnrh antagonist cotreatment.j clin endocrinol metab，2003，88（9）：4186-4192. 6makarevich a v， markkula m. apoptosis and cell proliferation potentialof bovine embryos stimulated with insulin-like growth factor i d

20、uring in vitro maturation and culture.biol reprod，2002， 66（2）：386-392. 7沈浣.颗粒细胞与卵母细胞发育国际生殖健康/计划生育杂志，2012，31（5）：344-347. 8吕慧敏.卵泡刺激素对体外培养人卵巢黄素化颗粒细胞增殖及分泌功能的影响.浙江大学，2012. 9yu y， li w， han z， et al. the effect of follicle-stimulating hormone on follicular development， granulose cell apoptosis and steroidogene-sis and its mediation by insulin-like growth