中药材快检方法研究郑州药分会杜庆鹏课件

1、中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 1 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 2 由于中药的安全性已经严重阻碍中药的临由于中药的安全性已经严重阻碍中药的临 床应用和发展。目前，我国已逐步制订完床应用和发展。目前，我国已逐步制订完 善了中药材和中成药中重金属元素和农药善了中药材和中成药中重金属元素和农药 残留量的检测标准方法和限量标准。但在残留量的检测标准方法和限量标准。但在 配合重大安全预警事件反应缺失、现场检配合重大安全预警事件反应缺失、现场检 测方面研究的涵盖面不够，需进一步深入测方面研究的涵盖面不够，需进一步深入 系统地研究中药有害残留物快速检测方法。系统地研究中药有害残留物快速检测方

2、法。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 3 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 4 汞是毒性最强的元素之一，是中药材中重要汞是毒性最强的元素之一，是中药材中重要 的金属污染物之一，汞被人体吸收后主要损害的金属污染物之一，汞被人体吸收后主要损害 肾脏，造成肾功能衰竭。中药材中汞严重超标肾脏，造成肾功能衰竭。中药材中汞严重超标 的问题时有报道的问题时有报道。 鉴于中药的安全性已经严重阻碍中药的临床鉴于中药的安全性已经严重阻碍中药的临床 应用和发展，以及中药材具有与食品和环境样应用和发展，以及中药材具有与食品和环境样 品不同的特性，因此进一步深入系统地研究中品不同的特性，因此进一步深入系统地研

3、究中 药有害残留物快速检测方法已经刻不容缓且十药有害残留物快速检测方法已经刻不容缓且十 分必要。分必要。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 5 在在酸酸性条件下，显色剂性条件下，显色剂二苯碳酰二肼二苯碳酰二肼（DPC）与与Hg2+ 发生络合反应，生成紫红色络合物（发生络合反应，生成紫红色络合物（520nm），检测试），检测试 纸由白色变为紫红色，颜色的深浅与纸由白色变为紫红色，颜色的深浅与Hg2+的含量成正比。的含量成正比。 仪器与试剂仪器与试剂 二苯碳酰二肼；乳化剂二苯碳酰二肼；乳化剂OPOP；缓冲溶；缓冲溶 液：液：pH9.0 pH9.0 的硼砂的硼砂-NaOH-NaOH缓冲体系；缓冲

4、体系； 分析用定量滤纸分析用定量滤纸 图图1 自制反应装置自制反应装置 A-为为100ml标准锥形瓶；标准锥形瓶；B-带弯口中空的标带弯口中空的标 准磨口塞，上连弯口的乳胶导气管准磨口塞，上连弯口的乳胶导气管C；D-为玻为玻 璃口；璃口；E-带刻度玻璃管或者塑料管。带刻度玻璃管或者塑料管。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 6 试纸制作试纸制作 取取10ml 0.5%二苯碳酰二肼乙醇溶液，加入二苯碳酰二肼乙醇溶液，加入2 ml 12%乳化乳化 剂剂OP；将定量分析用滤纸剪成；将定量分析用滤纸剪成0.6 cm宽的试纸条，用上述宽的试纸条，用上述 溶液充分浸泡后自然晾干，备用。使用时，剪成溶液

5、充分浸泡后自然晾干，备用。使用时，剪成0.60.8cm 试纸片。试纸片。 试纸使用方法试纸使用方法 取取3.0ml待测样品，加入待测样品，加入1.0ml缓冲溶液；从试纸瓶中快速缓冲溶液；从试纸瓶中快速 取出一条汞检测试纸浸入上述样品溶液中，取出一条汞检测试纸浸入上述样品溶液中，20秒后取出；检秒后取出；检 视，与对照颜色比较，即可对样品中汞含量进行定性或定量视，与对照颜色比较，即可对样品中汞含量进行定性或定量 检测。检测。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 7 标准色阶标准色阶 分别取系列分别取系列浓度浓度标准溶液标准溶液3ml置置10ml刻度试管中，加刻度试管中，加 1ml pH=9.0

6、 的硼酸的硼酸-氯化钾缓冲液，混匀，用氯化钾缓冲液，混匀，用1NaOH 溶液调节溶液调节pH值至值至5.0左右左右，取试纸片置于上述溶液中浸，取试纸片置于上述溶液中浸 泡片刻，取出检视。泡片刻，取出检视。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 8 样品溶液的制备样品溶液的制备 取中药材粉碎，取约取中药材粉碎，取约2g于于50ml锥形瓶中，加锥形瓶中，加20 ml 3%HCl， 振摇振摇10min，迅速投入，迅速投入1g产气剂（硼氢化钠：无水硫酸钠产气剂（硼氢化钠：无水硫酸钠=1： 19），将气体导入（约为），将气体导入（约为pH= 3）的吸收液（配制方法：取）的吸收液（配制方法：取 0.450

7、.5 ml硝酸用水稀释至硝酸用水稀释至1000ml），反应完全后，用），反应完全后，用1 NaOH溶液调节溶液调节pH值至值至5.1左右，即可。左右，即可。（同时作试剂空白同时作试剂空白） 测定测定 在上述吸收液中，加入在上述吸收液中，加入1 ml pH=9.0 的硼酸的硼酸-氯化钾缓冲液，氯化钾缓冲液， 混匀，静置，取试纸片置于溶液中浸泡片刻，取出检视。混匀，静置，取试纸片置于溶液中浸泡片刻，取出检视。 （试纸片固定在白色底物片上，以便检视）。（试纸片固定在白色底物片上，以便检视）。 * 完成一次完成一次 检验周期仅耗时检验周期仅耗时2030分钟分钟 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 9

8、 反应酸度的选择反应酸度的选择 试验中遇到试纸本底颜色变化较大严重影响颜色判断的问试验中遇到试纸本底颜色变化较大严重影响颜色判断的问 题，经查找原因发现题，经查找原因发现酸度酸度的强弱影响试纸本底的颜色，干扰的强弱影响试纸本底的颜色，干扰 实验结果的检视。为了减少这种本底显色的干扰，对在不同实验结果的检视。为了减少这种本底显色的干扰，对在不同 的的酸度酸度条件下试纸本底的显色进行了研究，经优化选择在条件下试纸本底的显色进行了研究，经优化选择在 pH=5.0的的酸酸性条件性条件下本底显色最浅，对实验的干扰会最小。下本底显色最浅，对实验的干扰会最小。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 10 表

9、面活性剂的选择表面活性剂的选择 由于在纸层析实验中易出现扩散，影响结果。本实验采用由于在纸层析实验中易出现扩散，影响结果。本实验采用 加入一定量表面活性剂，使待测体系的稳定性增加并且能减加入一定量表面活性剂，使待测体系的稳定性增加并且能减 小颜色扩散程度，因此实验中分别比较了小颜色扩散程度，因此实验中分别比较了10%、12%、15% 的的OP乳化剂含量时试纸的显色以及色阶的情况。乳化剂含量时试纸的显色以及色阶的情况。12% 和和15% 的色阶明显好于的色阶明显好于10%，而，而12% 和和15%结果差别不大，因此试结果差别不大，因此试 验采取加入验采取加入2ml 12%的的乳化剂乳化剂OP量。

10、量。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 11 纸片显色时间及络合物的稳定性纸片显色时间及络合物的稳定性 纸片浸泡片刻后，将试纸片取出放置到白色纸片浸泡片刻后，将试纸片取出放置到白色PV底板上底板上 在在030分钟内观察颜色的变化。分钟内观察颜色的变化。 随着试纸暴露在空气中时间的延长，显色越深，色阶随着试纸暴露在空气中时间的延长，显色越深，色阶 越不明显。因此最佳的观察时间应该在试纸取出之后，越不明显。因此最佳的观察时间应该在试纸取出之后， 待残留在白板上的液体挥发完全而待残留在白板上的液体挥发完全而试纸表面仍旧保持湿试纸表面仍旧保持湿 润润的情况下检视（观察）。具体观察的时间可以根据此的

11、情况下检视（观察）。具体观察的时间可以根据此 标准具体情况具体掌握。标准具体情况具体掌握。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 12 滤纸的选择滤纸的选择 固定显色剂（固定显色剂（0.5%）和）和OP（12%）的量，分别）的量，分别 采用定量中速、慢速滤纸制作试纸片。采用定量中速、慢速滤纸制作试纸片。 从显色情况来看，中速滤纸的显色效果不太均从显色情况来看，中速滤纸的显色效果不太均 匀，而且颜色扩散现象严重，而慢速滤纸显色均匀，而且颜色扩散现象严重，而慢速滤纸显色均 匀，并且使不同浓度（匀，并且使不同浓度（0.1、1、10g/ml）的色阶）的色阶 更加明显，故选用更加明显，故选用慢速滤纸慢速

12、滤纸作为显色剂的载体作为显色剂的载体。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 13 样品提取酸液的酸度选择样品提取酸液的酸度选择 分别采取分别采取1%、3%、5%的盐酸进行提取试验，的盐酸进行提取试验， 发现发现3%的盐酸空白本底干扰较小，而且与起泡的盐酸空白本底干扰较小，而且与起泡 剂的反应速度适中，因此选择剂的反应速度适中，因此选择3%的盐酸的盐酸作为提作为提 取样品溶液取样品溶液 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 14 回收试验回收试验 取中药材黄芪粗粉约取中药材黄芪粗粉约2.0g置于置于50ml锥形瓶，加锥形瓶，加 20 ml 3%HCl，分别添加汞，分别添加汞1、10g/ml对照

13、品对照品 溶液，振摇溶液，振摇10min，按，按上述方法上述方法操作操作 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 15 产气剂的回收效率产气剂的回收效率 对对3ml含汞（含汞（5g/ml）的标准液，按标准方法产气得）的标准液，按标准方法产气得 3毫升吸收液毫升吸收液（回收液）（回收液），与标准的吸收液，与标准的吸收液3ml（含汞（含汞 浓度浓度5g/ml、对照溶液、对照溶液）相比较。从图看略有差异。）相比较。从图看略有差异。说说 明该操作方法下，溶液转换较为完全。明该操作方法下，溶液转换较为完全。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 16 样品样品考察考察 根据中药的茎、根、叶、花、果等分类，

14、选取了根据中药的茎、根、叶、花、果等分类，选取了 有代表性的几十种中药材综合考察本方法的可行性有代表性的几十种中药材综合考察本方法的可行性。 取中药材银杏叶、甘草、黄芪、金银花、红花、取中药材银杏叶、甘草、黄芪、金银花、红花、 菊花、杜仲、火麻仁、皂角刺、白芍、前胡、车前菊花、杜仲、火麻仁、皂角刺、白芍、前胡、车前 草、等几十种中药材草、等几十种中药材，结果均未达到，结果均未达到3g/ml （ppm）。）。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 17 结果与讨论结果与讨论 * 目前目前已经市场化的汞快速测定的方法，比如北京一家公司所已经市场化的汞快速测定的方法，比如北京一家公司所 生产的铜片法

15、快速测定汞含量。我们将铜片法与我们的实验方生产的铜片法快速测定汞含量。我们将铜片法与我们的实验方 法进行了比较实验，发现，铜片法只有当汞的含量大于法进行了比较实验，发现，铜片法只有当汞的含量大于 20g/ml时铜片表面才会出现银灰色，而且现象不明显，不太时铜片表面才会出现银灰色，而且现象不明显，不太 好判断，此方法灵敏度较低，而且实验费时，费力，不方便现好判断，此方法灵敏度较低，而且实验费时，费力，不方便现 场操作，而我们的方法灵敏度较高（场操作，而我们的方法灵敏度较高（3g/ml），并且实验时间），并且实验时间 短，易操作，不需要加热，适用于现场操作，为中药材中重金短，易操作，不需要加热，适

16、用于现场操作，为中药材中重金 属汞的现场质量控制提供了比较好的方法依据。属汞的现场质量控制提供了比较好的方法依据。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 18 方法验证方法验证 浓度为浓度为1g/ml的的汞汞标准溶液加产气剂，按标准方法产气得标准溶液加产气剂，按标准方法产气得 吸收液，用原子荧光法吸收液，用原子荧光法进行进行测定测定，结果吸收液结果吸收液汞含量为汞含量为 1.01g/ml，同时进行试纸法测定，结果表明该溶液汞含量为，同时进行试纸法测定，结果表明该溶液汞含量为 1g/ml左右。左右。产气后的溶液残留产气后的溶液残留汞含量汞含量为为0.012g/ml，试纸法，试纸法 测定结果为空白

17、色测定结果为空白色。 结果说明：结果说明： （1）产气剂反应较完全，）产气剂反应较完全， （2）试纸法测定结果与仪器分析法检验结果基本一致。）试纸法测定结果与仪器分析法检验结果基本一致。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 19 * 显色剂使用过程中要显色剂使用过程中要避光避光。 * 制作好的试纸要避光保存，制作好的试纸要避光保存，现用现取现用现取，不可置于空气中过长，不可置于空气中过长 时间。时间。 * 由于由于试纸试纸片片颜色变化为颜色变化为樱红色樱红色到到紫红色，两种颜色干扰较大，紫红色，两种颜色干扰较大， 基于肉眼观察的基础，我们认为当基于肉眼观察的基础，我们认为当最低检出浓度为最低

18、检出浓度为3g/ml时时 人眼观察比较明显，误判的几率会大大减少，而且比较时最人眼观察比较明显，误判的几率会大大减少，而且比较时最 好同时做一好同时做一随行对照随行对照，并且最好使用同一批次的纸片。，并且最好使用同一批次的纸片。 * 有条件的情况下可以将产气剂压成片子，直接使用，既有条件的情况下可以将产气剂压成片子，直接使用，既携带携带 方便方便又减少了称量过程，又减少了称量过程，同时还保证同时还保证产气反应相对持久产气反应相对持久。 * 处理样品时采用投入产气剂的方式，操作简单，样品的颜色处理样品时采用投入产气剂的方式，操作简单，样品的颜色 等因素不会干扰实验现象，并且不会引入其他的干扰离子

19、。等因素不会干扰实验现象，并且不会引入其他的干扰离子。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 20 * 镉主要用于金属电镀，还可用于制造体积小镉主要用于金属电镀，还可用于制造体积小 和电容量大的电池。和电容量大的电池。在目前自然界中污染已经在目前自然界中污染已经 较为严重。较为严重。机体中摄入一定的镉可造成急、慢机体中摄入一定的镉可造成急、慢 性中毒，并且具有较强的致癌危险性。性中毒，并且具有较强的致癌危险性。由于其由于其 毒性的原因，现在已经越来越被大众所关注。毒性的原因，现在已经越来越被大众所关注。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 21 方法原理方法原理 在碱性条件下，镉试剂与在碱性

20、条件下，镉试剂与Cd2+反应生成橘红色络反应生成橘红色络 合物（合物（330nm），颜色的深浅与），颜色的深浅与Cd2+的含量成正比，的含量成正比， 通过颜色的深浅就可以确定镉的浓度。通过颜色的深浅就可以确定镉的浓度。 仪器和试剂仪器和试剂 镉试剂镉试剂 氢氧化钾氢氧化钾 乙醇；乙醇； 定量滤纸；定量滤纸；0.1%镉试剂的氢氧化钾乙醇溶液镉试剂的氢氧化钾乙醇溶液 （取取 0.1克镉试剂，加克镉试剂，加0.125mol/L氢氧化钾乙醇溶液，溶氢氧化钾乙醇溶液，溶 解，并稀释至解，并稀释至100mL） 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 22 试纸制作方法试纸制作方法 配置配置0.1%0.1%镉

21、试剂的氢氧化钾乙醇溶液，将定量分析用镉试剂的氢氧化钾乙醇溶液，将定量分析用 滤纸剪成滤纸剪成0.6cm0.6cm宽的试纸条，充分浸泡后自然晾干，备宽的试纸条，充分浸泡后自然晾干，备 用。使用时，剪成用。使用时，剪成0.60.60.8cm0.8cm试纸片。试纸片。 试纸使用方法试纸使用方法 取取10 ml待测样品，置待测样品，置15ml刻度试管中，用氢氧化钾刻度试管中，用氢氧化钾 （10mol/l）调节（约）调节（约67滴）滴）pH值值约约为为7.0，从试纸瓶中，从试纸瓶中 快速取出一条镉检测试纸浸入上述样品溶液中，快速取出一条镉检测试纸浸入上述样品溶液中，5秒后秒后 取出取出，检视检视。 与标

22、准色阶比较，即可对样品中镉含量进行定性或半与标准色阶比较，即可对样品中镉含量进行定性或半 定量检测。定量检测。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 23 标准系列色阶的制备标准系列色阶的制备 取镉标准储备液（取镉标准储备液（100g/ml）适量，分别加）适量，分别加3%HNO3稀释并配制稀释并配制 成成0.0、0.1、0.5、1.0、3.0、5.0、10.0g/ml Cd2+标准系列溶液，标准系列溶液， 检验。检验。 黄色橘红色 测定测定步骤步骤 * 取中药材粉碎（粗粉）或者剪成小碎片，取约取中药材粉碎（粗粉）或者剪成小碎片，取约2g精密称定于精密称定于50mL锥锥 形瓶中，加形瓶中，加20

23、 mL 3%HCl，振摇，振摇5 min，静置。，静置。（同时作试剂空白）（同时作试剂空白） * 取上清液取上清液10mL和试剂空白液和试剂空白液按上述方法进行测定，之后与按上述方法进行测定，之后与标准色阶标准色阶 或者随行对照溶液颜色比较。或者随行对照溶液颜色比较。 * 完成一次检验周期耗时仅为完成一次检验周期耗时仅为1520分钟分钟 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 24 滤纸的选择滤纸的选择 同法分别用中速、慢速滤纸制作试纸，与同法分别用中速、慢速滤纸制作试纸，与0g/ml 0g/ml 、 0.1g/ml0.1g/ml、0.5g/ml0.5g/ml、1.0g/ml1.0g/ml、3.

24、0g/ml3.0g/ml、5.0g/ml5.0g/ml、 10.0g/ml Cd10.0g/ml Cd2+ 2+标准溶液与镉试剂反应 标准溶液与镉试剂反应。 从显色情况来看，慢速滤纸的显色效果较好，而且使不同从显色情况来看，慢速滤纸的显色效果较好，而且使不同 浓度的色阶更加明显，故选用浓度的色阶更加明显，故选用慢速滤纸慢速滤纸作为显色剂的载体。作为显色剂的载体。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 25 纸片浸入反应时间的选择纸片浸入反应时间的选择 同时将六片试纸片浸于同时将六片试纸片浸于5.0g/ml Cd5.0g/ml Cd2+ 2+溶液中，分 溶液中，分 别在别在5s5s、10s10s

25、、20s20s，30s30s，40s40s，50s50s后取出观察颜后取出观察颜 色深浅色深浅 由试验可知，镉与由试验可知，镉与镉试剂的反应是迅速的，因此镉试剂的反应是迅速的，因此 只要纸片在溶液中浸透以保证显色均匀即可，我们只要纸片在溶液中浸透以保证显色均匀即可，我们 选择了选择了5s的反应时间的反应时间。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 26 纸片取出最佳检视时间的选择纸片取出最佳检视时间的选择 将纸片从溶液中取出后置于白色底将纸片从溶液中取出后置于白色底 板上，记录放置不同时间后颜色的变板上，记录放置不同时间后颜色的变 化及色阶情况，实验所用镉标准溶液化及色阶情况，实验所用镉标准溶

26、液 浓度分别为浓度分别为1.0g/ml1.0g/ml、3.0g/ml3.0g/ml、 5.0g/ml5.0g/ml、10.0g/ml10.0g/ml。 最佳观察时间应该在最佳观察时间应该在210min时观时观 察，为节省实验时间我们选择了放置察，为节省实验时间我们选择了放置 2min时观察颜色。时观察颜色。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 27 加标回收实验考察加标回收实验考察 称取芦根样品称取芦根样品1.5g，平行三份，剪成小碎片，置，平行三份，剪成小碎片，置50 或或100ml锥形瓶中，各加锥形瓶中，各加3%的盐酸溶液的盐酸溶液15ml，实验，实验 分别加入分别加入0.15、0.45

27、ml的（的（100g/ml）的镉对照品溶）的镉对照品溶 液，振摇液，振摇510min，取上清液，取上清液10ml，用氢氧化钾调，用氢氧化钾调 节节pH值为值为7.0左右。左右。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 28 样品测定样品测定 根据中药的茎、根、叶、花、果等分类，选取了有代表性根据中药的茎、根、叶、花、果等分类，选取了有代表性 的几十种中药材综合考察本方法的可行性的几十种中药材综合考察本方法的可行性。 如黄芪、甘草、柴胡、芦根、乌药、白芍、白芷、麦冬、如黄芪、甘草、柴胡、芦根、乌药、白芍、白芷、麦冬、 桑寄生、土木香、川木香、杜仲、肉桂、陈皮、红花、金银桑寄生、土木香、川木香、杜仲

28、、肉桂、陈皮、红花、金银 花、菊花、野菊花、银杏叶等花、菊花、野菊花、银杏叶等50余种余种。按。按上述上述方法制备供试方法制备供试 液，检测。液，检测。 所有参与实验的中药材检测结果都未含有镉元素，显色都所有参与实验的中药材检测结果都未含有镉元素，显色都 与空白接近，与空白接近， 只有八角、茴香的显色比空白深，但是浅于对只有八角、茴香的显色比空白深，但是浅于对 照的颜色照的颜色（1g/ml）。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 29 1. 镉镉试纸颜色变化由试纸颜色变化由空白空白的的黄色，黄色，转为转为橘红色，橘红色，浓度太低时，浓度太低时， 肉眼不太好分辨，考虑到本实验目的是快速筛选，因

29、此我们肉眼不太好分辨，考虑到本实验目的是快速筛选，因此我们 认为本法的认为本法的最低检出浓度为最低检出浓度为0.5g/ml时时即即可满足实验要求。可满足实验要求。 2. 本试纸片本试纸片贮藏进行了贮藏进行了-34、室温、室温、50，16个月的考察。个月的考察。 结果表明，该试纸在结果表明，该试纸在六个月内六个月内均可保证有效。均可保证有效。 3. 通过对几十种中药材中通过对几十种中药材中Cd2+含量测定的研究，认为本方法含量测定的研究，认为本方法 是可行的。个别药材如金银花，红花等样品，是可行的。个别药材如金银花，红花等样品，建议建议药材药材不要不要 粉碎粉碎过过细细或者提取时间过长，提取之后

30、马上测定，或者提取时间过长，提取之后马上测定，防止色素防止色素 影响影响结果的检视。结果的检视。 4. 本研究研制出的镉试纸本研究研制出的镉试纸主属性主属性较强，方法操作简便快速、较强，方法操作简便快速、 灵敏、携带方便，是一种比较理想的检测试纸，可以用于定灵敏、携带方便，是一种比较理想的检测试纸，可以用于定 性和半定量分析。性和半定量分析。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 30 随着近年来人民生活水品的日益提高，人们对农药残留随着近年来人民生活水品的日益提高，人们对农药残留 的关注程度是与日俱增。的关注程度是与日俱增。 虽然在这方面国家已经颁布了众多的政策法规来规范农虽然在这方面国家已

31、经颁布了众多的政策法规来规范农 药的使用，出台了各类农药残留检测标准来进行监管，药的使用，出台了各类农药残留检测标准来进行监管， 同时检验仪器的推陈出新不断提高农残检测技术的灵敏同时检验仪器的推陈出新不断提高农残检测技术的灵敏 度。但是在现场监控方面还有着许多的不足。度。但是在现场监控方面还有着许多的不足。 我们之所以选择有机磷类和氨基甲酸酯类农药作为检验我们之所以选择有机磷类和氨基甲酸酯类农药作为检验 的方向。是因为上述两种农药现今的方向。是因为上述两种农药现今适用范围广适用范围广；毒性大；毒性大； 且属于急性中毒性反应且属于急性中毒性反应。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 31 方法

32、原理：胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸方法原理：胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸 与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有 抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判 断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。 试剂及试药试剂及试药 固化有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的纸片（速测卡）固化有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的纸片（速测卡）；磷酸磷酸 氢二钠；无水磷酸二氢钾；乙酸乙酯；氢二钠；无水磷酸

33、二氢钾；乙酸乙酯；pH 7.5磷酸氢二钠缓磷酸氢二钠缓 冲溶液冲溶液；PR-3测定仪测定仪 下面将分下面将分有机磷有机磷类类农药农药和氨基和氨基 甲酸酯类农药两个方面进行说明甲酸酯类农药两个方面进行说明 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 32 对照溶液的考察对照溶液的考察 以对硫磷为代表进行实验。用缓冲溶液依次稀释以对硫磷为代表进行实验。用缓冲溶液依次稀释即得即得 蓝蓝白白 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 33 供试品溶液制备供试品溶液制备 第一法第一法 取中药材样品适量，捣碎成粗粉称取取中药材样品适量，捣碎成粗粉称取1.0g放入带盖放入带盖 塞瓶中，加入塞瓶中，加入10 mL缓冲溶

34、液，振摇，静置片刻，取上清液缓冲溶液，振摇，静置片刻，取上清液 备用备用（适用于（适用于一般一般样品）样品）。 第二法第二法 取中药材样品适量，捣碎成粗粉，称取取中药材样品适量，捣碎成粗粉，称取1.0g样品放样品放 入带盖瓶中，加入入带盖瓶中，加入10 mL乙酸乙酯，超声乙酸乙酯，超声3 分钟分钟，静置，取，静置，取 上清液过活性炭小柱，取滤液上清液过活性炭小柱，取滤液2 mL于于50水浴蒸至近干，加水浴蒸至近干，加 1mL缓冲溶液溶解，备用缓冲溶液溶解，备用（适用于（适用于色素含量较高色素含量较高的样品）。的样品）。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 34 测定测定 取一片速测卡，在白色

35、药片上滴取一片速测卡，在白色药片上滴23滴供试品溶液，放滴供试品溶液，放 置置10 min进行预反应，（有条件时在进行预反应，（有条件时在372恒温装置中恒温装置中 放置放置10 min，预反应后的，预反应后的反应反应表面必须保持湿润）然后将速表面必须保持湿润）然后将速 测卡对折，用手捏测卡对折，用手捏3 min（或用恒温装置恒温（或用恒温装置恒温3 min），使红），使红 色药片与白色药片叠合发生反应。色药片与白色药片叠合发生反应。之后观察白色药片的颜色之后观察白色药片的颜色 变化。变化。 注：每批次测定应设一个缓冲溶液的空白对照卡。注：每批次测定应设一个缓冲溶液的空白对照卡。 完成一次检验

36、周期耗时仅为完成一次检验周期耗时仅为2030分钟分钟 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 35 中药材中添加农药的回收试验的考察中药材中添加农药的回收试验的考察 * 取麦冬粗粉样品取麦冬粗粉样品数份，并按某一系列浓度对样品进行对照品添加。数份，并按某一系列浓度对样品进行对照品添加。 按第一法制备按第一法制备 * 取红花粗粉取红花粗粉数份，并按某一系列浓度对样品进行对照品添加。按第数份，并按某一系列浓度对样品进行对照品添加。按第 二法制备。二法制备。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 36 对照溶液的情况考察对照溶液的情况考察 称取对照品抗蚜威称取对照品抗蚜威5mg和克百威和克百威5mg于

37、于100mL容量瓶中，用容量瓶中，用 甲醇溶解并稀释至刻度。总氨基甲酸酯类农药浓度为甲醇溶解并稀释至刻度。总氨基甲酸酯类农药浓度为 100g/mL。 蓝蓝白白 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 37 供试品溶液配制及测定，同供试品溶液配制及测定，同前文前文有机磷有机磷测定测定 中药材中添加农药的回收情况考察中药材中添加农药的回收情况考察 取麦冬粗粉样品取麦冬粗粉样品数份，并按某一系列浓度对样品进行对照品添加。数份，并按某一系列浓度对样品进行对照品添加。 按第一法制备按第一法制备 取取银杏叶银杏叶粗粉粗粉数份，并按某一系列浓度对样品进行对照品添加。数份，并按某一系列浓度对样品进行对照品添加。 按第二法制备。按第二法制备。 中药材快检方法研究郑州药分会杜 庆鹏 38 样品测定样品测定 根据中药的茎、根、叶、花、果等分类，选取了有代根据中药的茎、根、叶、花、果等分类，选取了有代 表性的几十种中药材进行实验。如黄芪、红花、金银花、表性的几十种中药材进行实验。如黄芪、红花、金银花、 银杏叶等。按方法一、二法制备供试液，测定。银杏叶等。按方法一、二