项目五TLC技术课件

1、项目五TLC技术薄薄 层层 色色 谱谱 法法TLCTLCThin Layer Chromatography 项目五TLC技术 科学家在研究植物叶子的科学家在研究植物叶子的色素成分时，将植色素成分时，将植 物叶子的萃物叶子的萃取物倒入填有取物倒入填有碳酸钙碳酸钙的直立玻的直立玻璃管内，然后加入璃管内，然后加入石油醚石油醚使其使其自由流下，结果色素中各组分自由流下，结果色素中各组分互相分离形成各种互相分离形成各种不同颜色的不同颜色的谱带谱带。按光谱的命名方式，这。按光谱的命名方式，这种方法因此得名为色谱法。种方法因此得名为色谱法。一、色谱一、色谱项目五TLC技术在色谱法中，静止不动的一相（固体或液

2、体）称为固在色谱法中，静止不动的一相（固体或液体）称为固定相（定相（stationary phase） ；运动的一相（一般是气；运动的一相（一般是气体或液体）称为流动相（体或液体）称为流动相（mobile phase）. 项目五TLC技术二、薄层色谱构成二、薄层色谱构成1、固定相、固定相 硅胶硅胶为使用最广泛的薄层材料为使用最广泛的薄层材料 氧化铝氧化铝有碱性、中性、酸性有碱性、中性、酸性 硅藻土硅藻土为化学中性吸附剂为化学中性吸附剂 纤维素纤维素天然多糖类天然多糖类 聚酰胺聚酰胺为特殊类型有机薄层材料，对能形成氢键的物质为特殊类型有机薄层材料，对能形成氢键的物质有特别的选择性有特别的选择性。

3、项目五TLC技术2 2、载板玻璃板、载板玻璃板 放在饱和碳酸钠溶液中浸泡数小时，除去玻璃表面放在饱和碳酸钠溶液中浸泡数小时，除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干净，干燥，置干燥器中备的油污。然后充分漂洗干净，干燥，置干燥器中备用。要求光滑、平整、洗净后不附水珠。用。要求光滑、平整、洗净后不附水珠。项目五TLC技术3 3、黏结剂、黏结剂l无机黏结剂石膏（硫酸钙），添加石膏的无机黏结剂石膏（硫酸钙），添加石膏的吸附剂以字母吸附剂以字母“G”G”表示。没有黏结剂的吸附表示。没有黏结剂的吸附剂以字母剂以字母“H”H”表示。表示。l有机黏结剂有机黏结剂羧甲基纤维素钠（羧甲基纤维素钠（CMCCMC）、）、淀

4、粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特点淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特点是薄层强度高、使用方便，但不能用浓硫酸是薄层强度高、使用方便，但不能用浓硫酸作显色剂。作显色剂。项目五TLC技术4 4、荧光黏结剂、荧光黏结剂 在吸附剂中添加某种荧光指示剂，常用的荧光指示在吸附剂中添加某种荧光指示剂，常用的荧光指示剂剂 在在254nm254nm紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光素、硫化镉、紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光素、硫化镉、阴极绿等。阴极绿等。 在在366nm366nm有荧光的指示剂如彩蓝等。有荧光的指示剂如彩蓝等。 含有荧光指示剂的商品吸附剂以含有荧光指示剂的商品吸附剂以“F”F”表示，并以下表示，并以

5、下标注明其激发光波长。例标注明其激发光波长。例 硅胶硅胶HFHF254254 项目五TLC技术 薄层板活化（可直接用商品薄层板活化（可直接用商品TLCTLC，不需活化），不需活化） 涂布后的薄层先在室温下晒干，在使用前置适当涂布后的薄层先在室温下晒干，在使用前置适当温度烘烤一定时间进行活化，然后置干燥器中备温度烘烤一定时间进行活化，然后置干燥器中备用。不同薄层活化条件略有不同，如：用。不同薄层活化条件略有不同，如： 硅胶硅胶 110 1h110 1h 氧化铝氧化铝 110 30min110 30min三三 、TLCTLC操作步骤操作步骤项目五TLC技术制样制样选择溶剂，并加热溶解少量样品（约选

6、择溶剂，并加热溶解少量样品（约0.01g即可）即可）要求选择溶解样品的溶剂有高度挥发性和尽可能要求选择溶解样品的溶剂有高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展。非极性，否则易使斑点扩展。项目五TLC技术 点样点样 用酒精灯拉细的毛细管蘸取少量样品溶液点在硅胶板上，用酒精灯拉细的毛细管蘸取少量样品溶液点在硅胶板上， 样品点应尽可能小。样品点应尽可能小。 点样量应适中，过浓会引起斑点拖尾，分离度变差，以点样量应适中，过浓会引起斑点拖尾，分离度变差，以最小检测量的几倍几十倍为宜。最小检测量的几倍几十倍为宜。 采用多次点样法，第二次点加样应待前一次点样的溶剂采用多次点样法，第二次点加样应待前一次点样

7、的溶剂挥发后再进行。挥发后再进行。 同一快硅胶板上同时点多个样时，每个样需点在同一高同一快硅胶板上同时点多个样时，每个样需点在同一高度度 手工点样工具：定容玻璃毛细管（手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 5ul1 5ul）。）。项目五TLC技术 展开展开 多数采用直线形上行展开，薄层板水平角度以多数采用直线形上行展开，薄层板水平角度以7575 为最佳。展开距离一般为为最佳。展开距离一般为10-15cm10-15cm。直立式层析缸示意图直立式层析缸示意图 1-层析缸；层析缸； 2-薄层板薄层板 3-展开剂饱和蒸气；展开剂饱和蒸气；4-展开剂展开剂 项目五TLC技术 检测检测 物理方法物理方法紫外光

8、下显示荧光或荧光淬灭紫外光下显示荧光或荧光淬灭项目五TLC技术 检测检测 化学方法化学方法加化学试剂显色，要求显色稳定、持加化学试剂显色，要求显色稳定、持久、专属、灵敏、线性良好。久、专属、灵敏、线性良好。 斑点定位方法斑点定位方法 碘蒸气法碘蒸气法灵敏、简便，为通用显色法。将碘灵敏、简便，为通用显色法。将碘结晶放在密封的展开缸中，碘的升华，使缸内充结晶放在密封的展开缸中，碘的升华，使缸内充满紫色的碘蒸气。将展开后的板挥干溶剂置碘缸满紫色的碘蒸气。将展开后的板挥干溶剂置碘缸中至薄层色谱上出现棕色斑点。中至薄层色谱上出现棕色斑点。项目五TLC技术 保留参数（保留参数（RfRf值）计算值）计算 概

9、念：用来表征斑点位置的基本参数是保留因概念：用来表征斑点位置的基本参数是保留因子，通常称作子，通常称作比移值，比移值，用用RfRf表示。表示。 计算方法：计算方法：R Rf f=Ls/L=Ls/L原原点点S参参比比样样品品LsL（前沿）（前沿）Lr原原点点参参比比样品样品前前沿沿项目五TLC技术四、流动相与展开体系选择四、流动相与展开体系选择 液液- -固吸附固吸附 在该色谱中，溶质的保留和分离选择性在该色谱中，溶质的保留和分离选择性决定于三个因素：决定于三个因素：流动相流动相溶质溶质吸附吸附剂剂竞争竞争项目五TLC技术1 1、溶剂强度参数及溶剂选择、溶剂强度参数及溶剂选择 溶剂的强度参数溶剂

10、的强度参数 定义：溶剂强度参数用定义：溶剂强度参数用表示。流动相强度越高，表示。流动相强度越高，表示它与吸附剂相互作用力强。溶质的表示它与吸附剂相互作用力强。溶质的RfRf值就越值就越大。为得到满意的分离，选用的流动相使溶质的大。为得到满意的分离，选用的流动相使溶质的RfRf值在值在0.3 0.70.3 0.7之间为宜。之间为宜。 溶剂强度也可用其在水中的溶解度参数溶剂强度也可用其在水中的溶解度参数 来表示。来表示。项目五TLC技术 一些常用溶剂的溶剂强度与溶解度参数一些常用溶剂的溶剂强度与溶解度参数 溶剂溶剂 溶剂溶剂 正己烷正己烷 0.01 7.3 石油醚石油醚 0.02 8.2 苯苯 0

11、.32 9.2 乙醚乙醚 0.38 7.4 二氯甲烷二氯甲烷 0.42 9.6 正丙醇正丙醇 0.82 10.2 正丁醇正丁醇 0.70 / 四氢呋喃四氢呋喃 0.57 9.1 乙酸乙酯乙酸乙酯 0.58 8.6 氯仿氯仿 0.40 9.1 甲乙酮甲乙酮 0.51 / 二氧六环二氧六环 0.56 9.8 吡啶吡啶 0.71 10.4 丙酮丙酮 0.50 9.4 乙醇乙醇 0.88 / 乙酸乙酸 1.00 12.4 二甲亚砜二甲亚砜 0.75 12.8 甲醇甲醇 0.95 12.9 乙二醇乙二醇 1.11 14.7 甲酰胺甲酰胺 / 17.9 项目五TLC技术2 2、溶剂选择原则、溶剂选择原则

12、增加溶剂强度，则增加溶剂强度，则RfRf值增大，但可能降低分离能力值增大，但可能降低分离能力 流动相中较强组分的体积比小于流动相中较强组分的体积比小于5%5%或大于或大于50 % 50 % ，选择性最，选择性最大。大。 用乙醚或甲醇代替流动相中的一种较强组分，由于形成氢键用乙醚或甲醇代替流动相中的一种较强组分，由于形成氢键可改善选择性。可改善选择性。 若出现斑点拖尾，可向流动相中加少量水，或降低薄层活性，若出现斑点拖尾，可向流动相中加少量水，或降低薄层活性，有利于改善分离。有利于改善分离。项目五TLC技术药物鉴别采用标准对照法药物鉴别采用标准对照法含量测定主要用于中药有效成分的分析含量测定主要

13、用于中药有效成分的分析杂质检查杂质检查杂质对照品法杂质对照品法高低浓度法高低浓度法药物标准品对照法药物标准品对照法五、应用五、应用项目五TLC技术v杂质检查方法杂质检查方法 杂质对照品法（杂质对照品法（A A） 供试品自身对照法（高低浓度法）（供试品自身对照法（高低浓度法）（B B） 对照物质法（对照物质法（C C） 样样 对对 样样 对对 样样 对对A B C项目五TLC技术项目五TLC技术任务任务1、检验某样品的纯度、检验某样品的纯度样品样品1：溶解少量样品：溶解少量样品1进行薄层检测并计算进行薄层检测并计算Rf值值溶剂：乙醇溶剂：乙醇 展开剂：石油醚：乙酸乙酯展开剂：石油醚：乙酸乙酯=4：6 （体积比）（体积比） 任务任务2 2、混合物的分离、混合物的分离样品样品2 2