沉降菌检测培训(上传)

1、员工内部培训教材沉降菌检测培训沉降菌检测培训2016年年07月月14日日XXXXXX有限公司有限公司沉沉降降菌菌检检测测培培训训执行标准：执行标准： GB/T16294-2010医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法沉降菌定义：沉降菌定义： 通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净室环境内的活生物数，以此来评定洁净室内（区）的洁净度。需进行沉降菌检测的环境有：需进行沉降菌检测的环境有： 十万级洁净室、一万级生化检测室、百级超净工作台和百级生物安全柜。沉沉降降菌菌检检测测培培训训使用仪器：使用仪器：

2、 1、净化工作台 2、电热培养箱 3、霉菌培养箱 沉沉降降菌菌检检测测培培训训使用仪器：使用仪器： 4、立式压力蒸汽灭菌器 5、电子天平 6、电热恒温鼓风干燥箱 沉沉降降菌菌检检测测培培训训使用器具：使用器具： 1、量筒 2、三角烧瓶 3、培养皿（9015） 4、酒精灯 5、不锈钢培养皿筒 6、牛皮纸 7、称量纸 使用试剂：使用试剂： 1、大豆酪蛋白琼脂培养基 或：胰酪大豆胨琼脂培养基 或 2、沙氏葡萄糖琼脂培养基 3、纯化水沉沉降降菌菌检检测测培培训训检测前准备：（在化验室内操作）检测前准备：（在化验室内操作） 1、将培养皿洗净、沥干，放入不锈钢培养皿筒，在电热恒温鼓风干燥箱内干烤。温度：1

3、60，时间：2小时。 2、根据需测量的区域确定培养皿的数量。 3、根据培养基用法及培养皿的数量确定培养基的数量（ml），用电子天平进行秤量配制，装入三角烧瓶内，再加入一定比例的纯化水，用硅胶塞塞住瓶口，用手腕晃动至培养基完全熔化，用牛皮纸包扎好。 配制过程（以配制“胰酪大豆胨琼脂培养基”为例） 根据培养皿放置分布图确定培养皿数量，再加3个对照试验培养皿。如：共需30个培养皿，每个培养皿注入15-20 ml培养基（按每个注入20 ml配制），则需培养基： 30个20ml/个600ml。 根据产品标签上用法说明：取本品40.0g，加1L纯化水，微温溶解。 秤量： 600=24.0g， 注入纯化水：

4、600ml。 注：其他培养基的配制按产品上的标签用法类似配制。沉沉降降菌菌检检测测培培训训10000 .40检测前准备：检测前准备： 4、把包扎好的三角烧瓶放入立式压力蒸汽灭菌器中灭菌，温度：121，时间：15分钟。 5、把培养皿、配制好的培养基按物品进出洁净室控制程序进入无菌检验室。 6、操作人员按人员进出洁净室控制程序进入操作室。无菌室操作：无菌室操作： 1、开启净化工作台电源，在净化工作台内进行操作。 2、点燃酒精灯，打开三角烧瓶封口的牛皮纸，把三角烧瓶的瓶口在酒精灯的外火焰处转动消毒，时间：30秒。 3、拔出三角烧瓶的硅胶塞，无菌操作把培养基注入培养皿内，注入量为15-20ml，（注入

5、时，应一手拿三角烧瓶，一手拿培养皿，用拿培养皿手的中指、无名指和小指抵住培养皿底，同时用大姆指和食指移开培养皿盖，注入培养基，整个过程尽量靠近燃烧的酒精灯，严禁在移开的培养皿上部有任何物品经过，防止产生假阳性。）加盖放在净化工作台内，直至所有的培养皿注入完毕，待至凝固（此时底下盖上）。 4、凝固后反扣叠放不锈钢培养筒内，盖好培养筒盖，出无菌室至室外待用。（反扣：培养皿底上盖下，防止冷凝水滴至培养基上，影响培养基效果。） 沉沉降降菌菌检检测测培培训训检测：检测： 1、最少采样点数量的确定： 2、最少培养皿数： 沉沉降降菌菌检检测测培培训训检测：检测：3、采样点布置类型：根据采样点布置类型，制定出

6、本公司各被测采样点的分布图，按制定的采样分布图进行采样。沉沉降降菌菌检检测测培培训训检测：检测：4、开启被测环境净化空气调节系统，30分钟后，可以开始测试静态沉降菌测试。5、配制好的培养皿按物品进出洁净室控制程序进入被测环境。6、操作人员按人员进出洁净室控制程序进入被测环境。7、培养皿的放置原则： a、采样点尽量离地面0.81.5米。 b、每个采样点一般至少采样一次。 c、尽量避开尘粒较集中的回风口。 d、采样时，就从里往外放置，放置人员应站在采样的下风侧，放置时，尽量少走动。 8、按事先制定的采样布点图放置，放置时应考虑第7点的放置原则，逐个放置，逐个打开培养皿上盖，使培养基暴露在环境空气中

7、。打开时，用一手的大拇指和食指轻轻移开上盖，人体任何部位应尽量远离培养皿上部，防止产生假阳性。9、检测净化工作台（百级）或生物安全柜时，按最少培养皿数要求，把14个培养皿均匀放在工作台上，然后从里往外逐个打开，使其培养基暴露有空气中。 沉沉降降菌菌检检测测培培训训检测：检测：10、培养基在空气中暴露30分钟后，从外往里逐个盖好上盖并反扣培养皿，放入不锈钢培养皿筒内。11、收集完毕，按物品进出洁净室控制程序、人员进出洁净室控制程序出被测洁净区域。12、以胰酪大豆胨琼脂培养基进行培养时，培养皿应放置电热培养箱内进行培养，培养温度：3035 ，培养时间：至少48小时（2天）。 若用大豆酪蛋白琼脂培养

8、基进行培养时，培养皿也应放置电热培养箱内进行培养，培养温度：3035 ，培养时间：至少48小时（2天）。 若用沙氏葡萄糖琼脂培养基进行培养时，培养皿应放置霉菌培养箱内进行培养，培养温度：2025 ，培养时间：至少120小时（5天）。注：为防止假阳性，另需准备三个培养皿，注入培养基，但不进 行空气暴露，随同上述培养皿一起培养。13、培养时间到后，用肉眼观察培养皿中的菌落数，数菌落数时要注意菌落重叠生成。 =14、做好各被测区域的沉降菌菌落的数据记录。沉沉降降菌菌检检测测培培训训MnMnMM21判定：判定：依据下表判定： 对照组无菌生长的情况下，培养皿中的菌落数满足下表，判定：合格。不满足下表，判定：不合格。 如对照组有菌落生成，此检测过程失败，需重新检测。 洁净室（区）沉降菌技术要求洁净室（区）沉降菌技术要求检测频率：检测频率： 每周一次。每周一次。沉沉降降菌菌检检测测培培训训注意事项：注意事项：1、被测环境要求： 被测区域的温、湿度和静压差、换气次数等