磁珠分离细胞技术1220

1、磁珠分选技术磁珠分选技术2磁珠分选技术磁珠分选技术免疫学免疫学+ +细胞生物学细胞生物学+ +磁力学磁力学基于抗体对抗原的特异性识别：免疫磁珠基于抗体对抗原的特异性识别：免疫磁珠磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上，从磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连：抗体偶联磁珠、二抗磁珠、而与细胞相连：抗体偶联磁珠、二抗磁珠、生物素磁珠、生物素磁珠、Oligo dTOligo dT磁珠磁珠在高强度、梯度磁场中达到磁性分离的目在高强度、梯度磁场中达到磁性分离的目的：分离细胞、蛋白、核酸、细菌等的：分离细胞、蛋白、核酸、细菌等3v磁珠磁珠v磁力架磁力架v分离柱或分离试管分离柱或分离试管 MACS，D

2、ynal，BD，StemCell，R&D磁珠分选系统磁珠分选系统4管式分选管式分选 DynalbeadsDynalbeads分离试管分离试管磁力架磁力架56柱式分选柱式分选 7未标记的细胞未标记的细胞先行流出先行流出MACS微珠进微珠进行磁性标记行磁性标记撤去磁场，将标撤去磁场，将标记的细胞洗出记的细胞洗出磁性铁珠在分选器作用下磁性铁珠在分选器作用下形成强大的磁场，使含磁形成强大的磁场，使含磁珠的细胞悬浮在磁场中珠的细胞悬浮在磁场中8v MACS d50nm，多聚糖和氧化铁组成的超顺磁化微粒；可被细，多聚糖和氧化铁组成的超顺磁化微粒；可被细胞生物降解而无需解离磁珠；分离丰度极小的细胞胞

3、生物降解而无需解离磁珠；分离丰度极小的细胞(10-8);v Dynal d=4.5um2.8um1um，多聚材料包被的氧化铁超顺磁，多聚材料包被的氧化铁超顺磁微球；均一性好；也适用于细胞活化；微球；均一性好；也适用于细胞活化；v BD d200nm，超顺磁化微粒；包被了高质量的，超顺磁化微粒；包被了高质量的BD抗体；抗体；v StemCell 管式；柱式管式；柱式;v R&D d150nm，链酶亲和素磁珠，类胶体，链酶亲和素磁珠，类胶体.9直标直标间标间标抗链酶亲和素磁珠抗链酶亲和素磁珠抗生物素磁珠抗生物素磁珠抗免疫球蛋白磁珠抗免疫球蛋白磁珠抗荧光素磁珠抗荧光素磁珠10在没有直接标记微

4、珠可选时在没有直接标记微珠可选时使用自备抗体或配体的磁性分选中使用自备抗体或配体的磁性分选中分选或去除用多个抗体混合物标记分选或去除用多个抗体混合物标记的多种细胞的多种细胞分选稀有细胞和抗原弱表达的细胞分选稀有细胞和抗原弱表达的细胞间标扩展了分选范围间标扩展了分选范围11分选策略分选策略v阳性分选阳性分选v去除分选去除分选v多重分选多重分选12用磁珠标记用磁珠标记目标细胞目标细胞目标细胞滞留目标细胞滞留在分选柱内在分选柱内目标细胞被洗目标细胞被洗脱，收集脱，收集目的细胞磁性标记后，目的细胞磁性标记后，作为阳性的标记组分作为阳性的标记组分直接分选出来。直接分选出来。高纯度，高回收率，高纯度，高回

5、收率，操作简单，尤其是富操作简单，尤其是富集稀少细胞。集稀少细胞。13分选前分选前阴性组分阴性组分(未未滞留在分选柱滞留在分选柱上的细胞上的细胞)阳性组分阳性组分(滞滞留在分选柱上留在分选柱上的细胞的细胞)应用应用anti-CD19anti-CD19磁珠分选磁珠分选人外周血中的人外周血中的B B细胞细胞14非目的细胞磁性标记非目的细胞磁性标记后，作为阴性的组分滞后，作为阴性的组分滞留在分选柱上，未标记留在分选柱上，未标记的目的细胞被分选出来。的目的细胞被分选出来。去除不需要的细胞去除不需要的细胞缺乏针对目的细胞的特缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤细胞）异性抗体（如肿瘤细胞）不需要抗体和目的

6、细胞不需要抗体和目的细胞结合，即细胞不被刺激结合，即细胞不被刺激（如（如T T细胞、细胞、B B细胞、细胞、NKNK细细胞功能分析）胞功能分析）需进一步通过阳性选择需进一步通过阳性选择分选细胞亚群。分选细胞亚群。标记非目的细胞标记非目的细胞非目的细胞滞留在非目的细胞滞留在分选柱上，被去除分选柱上，被去除15生物素标记生物素标记CD2, CD14, CD16, CD36, CD43, CD235a; 再加入链酶亲和素标记的磁珠再加入链酶亲和素标记的磁珠应用去除法分选人应用去除法分选人外周血中的外周血中的B B细胞细胞16先去除非目的细胞，先去除非目的细胞，再进行阳性分选。再进行阳性分选。非目的细

7、胞也表达用非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的来阳性选择目的细胞的抗原；要分选非常稀有抗原；要分选非常稀有细胞，先去除非目的细细胞，先去除非目的细胞再行阳性分选，可获胞再行阳性分选，可获得高纯度的目的细胞。得高纯度的目的细胞。标记去除非标记去除非目的细胞目的细胞标记目的细胞标记目的细胞洗脱目洗脱目的细胞的细胞17应用：分选人外周血中应用：分选人外周血中的的CD4+CD25+ T细胞细胞分选前分选前去除分选后去除分选后阳性分选后的阴性组分阳性分选后的阴性组分阳性分选后的阳性组分阳性分选后的阳性组分18洗脱目标细胞洗脱目标细胞用标记用标记1标记标记目标细胞目标细胞用标记用标记2标记目标细胞标记目

8、标细胞去除磁珠标记去除磁珠标记洗脱目标细胞洗脱目标细胞进行多次连续阳性分进行多次连续阳性分选，进行新标记前先去选，进行新标记前先去除原来的磁珠标记。除原来的磁珠标记。可进行多参数分选。可进行多参数分选。19应用：分选人外周血中应用：分选人外周血中的的CD3+CD56+ T细胞细胞分选前分选前第一次阳选第一次阳选第二次阳选第二次阳选20v优点：优点：操作简单，高效快捷，无操作简单，高效快捷，无菌和细胞状态更有保证，回收率、菌和细胞状态更有保证，回收率、纯度高。纯度高。v缺点：缺点：不能在分选的同时进行分不能在分选的同时进行分析，分选过程中很难去除死细胞析，分选过程中很难去除死细胞团块的干扰，难于同时进行多种团块的干扰，难于同时进行多种标记物的分选。标记物的分选。21分选前标本处理分选前标本处理密度梯度离心密度梯度离心(Ficoll, Percoll)(Ficoll, Percoll)（根据情况）溶血（根据情况）溶血( (溶解红细胞溶解红细胞) )过滤过滤( (单个细胞单个细胞) )分选标本：不含有死细胞或者碎片