试验室标准操作规程作业指引SOP

1、实验室标准操作程序（SOP）版 号：第一版编 制：审 核：批 准：受控状态：发放编号：持有人：发布日期：2017年08月08日 实施日期：2017年08月08日实验室标准操作程序XH2-019-01第3页 共30页更改一览表序号更改时间更改章节号更改单号备注00. 目 录早节标题页数01细菌总数的检验402大肠困群、大肠杆困的检验503金黄色葡萄球菌的检验504沙门氏菌的检验605副溶血性弧菌的检验706霍乱弧菌的检验807单核细胞增生李斯特氏菌的检验908志贺氏困的检验1009霉菌的检验1110表面样品的检验1211水的检验13食品有限公司2017年08月08日发布第0次修改实验室标准操作程

2、序XH2-019-01第9页共30页01.出口食品细菌总数的检验方法1仪器和设备1 . 1恒温培养箱：36 ± 1 C1 . 2恒温水浴箱：45 土 1 C1 . 3高压灭菌锅1 . 4均质器1. 5 冰箱：0-4 C 和-15 -20 C1. 6 试管:18 x 150mm1 . 7 锥形瓶:500ml 250ml1. 8平皿：直径为 90mm1. 9灭菌吸管1. 10灭菌均质杯1. 11酒精棉1. 12天平：感量0.1g2 .培养基的制备2.1生理盐水：称氯化钠8.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，分装锥形瓶和试管内，每管吸9ml, 121 C高压灭菌。2.2平板计数琼脂称平板计

3、数琼脂23.5g加入1000.0ml蒸馏水中，煮沸溶解，分装锥形瓶内，121C高压灭菌。3.操作程序3.1样品稀释以无菌操作取 25g样品 T放入装有 225ml生理盐水的灭菌均质杯内,均质1分30秒，制成1: 10的样品匀液| 用灭菌吸管吸取 1ml样液| 放入9ml生理盐水中，摇匀。从试管中吸取 1ml样液_> |分别注入两个平皿内，|制成10倍的样品稀释液，| |依次类推（10-2、10-3） |平板计数琼脂（恒温 45土 1C） 分别倒12-15ml平板计数琼脂入各平皿|» |待琼脂凝固后将平皿翻转 立即将平皿内的样液和琼脂充分混合|一 将平皿旋转，注意倾注时间不宜太长

4、立即放进 36 土 1 C的恒温培养箱内| 培养48 土 2片3.2培养4计算如下表（备注：25-250个菌落为合适范围，菌落成链状明显的计为一个菌落，不明显的不计数, 平皿边缘和琼脂表面成水膜样菌落或生长过量的，即报告为蔓延菌落。）样品号菌落数平皿菌落数1： 101 : 1001 : 100012381602.3X 103 个 /g21218022362602.5 X 103个/g22728018001.6 X 102 个 /g314404多不可计245232.6 X 104个/g多不可计27820000V 10 个 /g50006多不可计255212.7 X 104个/g多不可计22540

5、7多不可计多不可计210182.3 X 104个/g24028多不可计260302.7 X 104个/g823028多不可计9多不可计多不可计多不可计多不可计5235.1 X 105 个 /g487多不可计245352.9 X 104个/g10多不可计230蔓延菌落食品有限公司2017年08月08日发布第0次修改02.出口食品大肠菌群和大肠杆菌的检验方法i.仪器和设备1 . 1恒温培养箱：36 ± 1 C1. 2恒温水浴箱：44.5 ± 1C 1 . 3高压灭菌锅1 . 4均质器1. 5 试管:18 x 150mm 18X 180mm1. 6 锥形瓶:500ml 250ml

6、 1. 7平皿：直径为 90mm1. 8灭菌均质杯1. 9灭菌吸管1. 10酒精棉1. 11天平：感量0.1g1.12 冰箱：0-4 C 和-15 -20 C1.13显微镜2 .培养基的制备2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤称35.6g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装于有倒立的小发酵管的 每管10ml，于121 C高压灭菌15min。2.2煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB称40g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装于有倒立的小发酵管的 每管10ml, 121 C高压灭菌15min。2.3EC肉汤称37g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装于有

7、倒立的小发酵管的 每管吸8ml, 121 C高压灭菌15min。18x 180mm试管中，18x 180mm试管中,18x 180mm试管中,2.4伊红美蓝琼脂（EMB称37.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装于三角烧瓶，121 C高压灭菌15min。摇匀冷却至45 C倾注平皿。2.5营养琼脂称33g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，121 C高压灭菌15min。制成斜面备用。2.6生理盐水称氯化钠8.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，分装锥形瓶和 18x 150mm试管内，121 C高压灭菌15min。 2.7成品生化管2.7.1色氨酸肉汤 2.7.2 M

8、R-VP 2.7.3 Koser氏枸橼酸盐琼脂 2.7.4 革兰氏染色试剂盒 2.7.5 Kovacs氏靛基质试剂2.7.6甲基红指示剂2.7.7 V-P试剂甲液和乙液3.操作步骤3.1样品的稀释和培养实验室标准操作程序XH2-019-01第13页共30页3.2大肠菌群的测定3.3大肠杆菌的测定3.4将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化实验。3.4.13.4.3Koser氏枸橼酸盐琼 脂36 ± 1 C培养 录有无生长96h记344革兰氏染色-9取18h斜面培养物 '作革兰氏染色1大肠杆菌为革兰 氏阴性345大肠杆菌与非大肠杆菌生化鉴别如下:靛基质MRVP枸橼酸盐鉴定(型别

9、)+一一典型大肠杆菌一+一一非典型大肠杆菌3.5结果报告：大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌，发酵乳糖产酸产气，IMViC试验为+ + 或+再根据LST肉汤阳性管数查 MPN表，报告每克样品中大肠杆菌MPN值。1g样品中最近似值(MPN)表使用三管法，接种量分别为0.1g,0.01g,0.001g阳性管数MPN阳性管数MPN0.10.010.0010.10.010.001000V 32009.10013201140026202200039203260103210150116.1211200129.22122701312213340206.2220210219.3221280221222235023

10、16223420309.4230290311323136032162324403319233531003.6300231017.230139102113026410315303951107.331043111113117511215312120113193131601201132093Q4匚,dd rn21532150食品有限公司2017年08月08日发布第0次修改1222032221012324323290130163302401312033146013224332110013329333> 1100备注：1.上表采用3个稀释度（0.1g、0.01g和0.001g ）每个稀释度3管。2

11、.食品有限公司2017年08月08日发布第0次修改如检样量改用1g、0.1g和0.01g时，表内数字相应降低 10倍；如改位0.01g、0.001g和0.0001g 时，表内数字相应增加10倍，其余类推。03.出口食品金黄色葡萄球菌的检验方法仪器和设备1 . 1恒温培养箱：36 ± 1 C1 . 2恒温水浴箱：45 土 1 C1 . 3高压灭菌锅1 . 4均质器1. 5 试管:18 x 150mm 18X 180mm1. 6 锥形瓶:500ml 250ml1. 7平皿：直径为 90mm1. 8灭菌吸管1. 9灭菌均质杯1. 10酒精棉1. 11天平：感量0.1g1 . 12 冰箱：0-4 C 和-15 -20 C2 .培养基的制备2.1生理盐水称氯化钠8.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，分装锥形瓶和18x 150mm试管内，每管吸9ml, 121 C高压灭菌15min。2.2胰蛋白胨大豆肉汤称大豆肉汤30g和氯化钠95g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装18 x 180mm试管内，每管吸10ml, 121 C高压灭菌15min。2.3Baird-parker培 养基称6.3g溶于95ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装锥形瓶内，121 C高压灭菌15min。冷却至50C,加入1瓶亚碲酸钾卵黄增菌液（冻干粉加 5ml无菌生理盐水溶解）混