16免疫分析仪器

1、第i 六章免疫分析仪器*免疫分析法：应用不同的标记物，以抗原抗体相互结合为基础的免疫学测定方法。*类型：(1)用酚作标记物，称为酚免疫分析法。(2)以化学发光物质作标记，为化学发光免疫分析法。(3)用放射性核素作标记物，称为放射免疫分析法。笫一节陆标分析仪一、酶免疫分析法*分类：冇两种类型。(1) 均相陋免疫测定：主要用于药物测定。(2) 非均相酶免疫测定：也叫酶联免疫吸附测定(el1sa),常川于医学检验。二、酶标仪的工作原理及结构(1) 微机：可通过控制电路控制微孔板在x和y方向的移动。(2) 微孔板：是一透明鴉料板，板上有装载待测样品的多排小孔。1、原理：采用比色法。光源光线经滤光片后成

2、单色光，射入微孔板中待测样品后被吸收掉 一部分，透射光到达光电检测器，经放大及模数转换后，送入微机处理、显示和打印结果。2、光路系统：光源发出的光，经聚光镜、光栏、到反射镜作90()反射后，垂肓通过比色溶 液，然后经滤光片到达光电管。3、陋标仪利i光电比色ii*的不同点:两者都用比色法测定，不同点为(1) 装载比色液的容器不是比色血，而是塑料微孔板。(2) 光束垂肓通过待测液即微孔板。(3) 通常不用吸光度a而是用光密度od表示。4、酶标仪类型:有两种。(1) 单通道：分自动型和手动型。(2) 多通道：均为自动型，特点是检测速度快。三、el312e型酚标仪简介是美国bio-tek公司的产品。1

3、、光学系统原理：采用比色法。滤光片类型为后密封式干涉滤光片，半通带宽度10nm；比 色板为标准96孔板。2、技术指标：如表。四、半白动微孔板式elisa分析仪结构在酶标仪的基础上再配置加液器、温育器、洗板机、测读仪。测定中需山手工将微孔板移 至下一步骤的仪器中进行。五、全自动微孔板式elisa分析仪结构自动化酶免疫分析系统由加样系统、温育系统、洗板系统、判读系统、机械愕系统、液路动力系统、软件控制系 统等组成第二节化学发光免疫分析仪*发光剂：指能产生化学发光反应的物质，也叫发光底物。一、化学发光免疫分析法1、概念：利用化学发光作为抗原抗体反应的指示系统，用于定量检测抗原或抗体的方法。2、类型：

4、有化学发光标记免疫测定和化学发光晦免疫测定两种。*发光现象：指物质分子吸收能量后跃迁到激发态，当激发态分子返回基态时，以发射可见 光的形式释出能量的现象。*化学发光：是指由化学反应产生的发光现象。二、acs-180se全口动化学发光免疫分析仪简介：由德国拜m(bayer)公司生产。(%1) 性能特点：(1) 检测灵敏度高,达10-15g/ml(2) 分析速度快，达180个测定/hr,并可同时完成13个项忖。(3) 采用两点定标法，节省时间和试剂消耗。(%1) 仪器测定原理利用化学反应和免疫反应相结合的原理和方法，采用微量倍增技术，因而灵敏度很高。*选用的化学发光剂为w噪酯。(%1) 仪器结构:

5、包括主机和微机两部分，外观如图。1、主机：包括原材料配备、液路、机械传动、光路检测等部分。2、微机系统：功能有程控操作、b动监测、指示判断、数据处理、故障诊断等。第三节放射免疫测定仪器一、放射免疫分析概述：1、历史：1959年：美国学者berson和yalow,用1311作示踪，首次创立血浆微屋胰岛素的测定 方法。定名为放射免疫分析(rla)o1977年：获诺贝尔牛物医学奖。2、特点：放射免疫具冇高特异和高灵敏两个基本特点。(1) 高特异：即用特异的抗体取代了化学试剂，不再是针对物质的局部基团，具有很高特异 性。(2) 高灵敏：是指创造性地应用了放射性核素示踪技术，具有很高灵放度。3、设备类型

6、：标记的核索分两类，发射 射线的核索用 仪测量。发射能量较低的 射线的核索用 仪测量。二、放射性核索的基本概念 *核索：指冇确定质了数和中了数的原子核所对应的原了统称。核索冇1900多种，其中279 种是稳定的，其余都是不稳定的，会发生衰变并放射出射线，故称为放射性核素。*同位素：质子数相同而中子数不同的一类核素。*同质杲能素：核內中子数和质子数都相同，但原子核所处能量状态不同的核素。（i）放射性核素衰变方式i' 衰变：原子核放出粒子（氮核）而衰变为另一种原子核的过程。2、衰变：有两种。（1） 衰变：原子核内放射出电子和反小微子的衰变。+衰变：原了核内放射出正电了和屮微了的衰变。3、电

7、子俘获：原子核俘获一个核外电子，使核内一个质了转变为中了，同时发射一个中微 子的过程。4、跃迁：放射性核素从激发态跃迁到能量较低状态，并发射光了的过程。（二）放射性衰变规律1、放射性活度a：指单位时间内发生衰变的原了核数。为衰变常数，n为t时刻的原子核数，贝山a= n2、半衰期t1/2：样詁中的放射性原子衰变掉一半所需的时间。公式：tl/2=ln2/3、设a0和a为t=0和t时的放射性活度，则:a=a0e- t（三）放射性活度的单位1、si 制：bq（贝克）lci=3.7x1010bq2、比放射性：指单位质量物质所含的放射性活度，bq/mgo3、放射性浓度：指单位体积物质所含的放射性活度，bq

8、/ml（四）放射性活度的检测原理：闪烁体nal单品，在 线作用下产生光辐射，再由光电倍增管接收并转成电信号计数。1、射线的测量：用闪烁计数器（仪）。2、射线的测量：用液体闪烁计数器（仪）。液体闪烁测量原理，也是将射线与闪烁体的作用产生转换成光脉冲，再转成电信号而计数。*为何 放射源要置于闪烁液中？因低能 线穿过物质时，易受原子中正负电荷的影响，使其穿透力减弱，故将 放射源 置于闪烁液中，使射线直接被闪烁液吸收，以提高其探测效率。三、液体闪烁计数器（仪）适用于3h、14c等低能 射线及 射线的辐射探测。（一）液体闪烁计数器结构1、基本电路：主要山双管快符合、相加电路、线性门电路及多道脉冲幅度分析

9、器等组成。2、口动换样器：样品传送机构有传送带、升降机、轮盘等。3、微机操作系统：可作工作条件选定，各种因素的校正等。（二）液体闪烁计数器的使用为调试1、样品闪烁液反应体系建立：将样品闪烁液按一定比例装入测量瓶即可。（1）闪烁液：由溶剂、溶质组成。常川溶剂有甲苯和二氧六环等.(2) 测量瓶：规格容量为20ml, 口径为22mmo(3) 样品：根据样品的可溶性，作不同的处理。含水最较高的溶液多用二氧六环作溶剂。2、猝灭：指样品、氧气、水及色素等加入闪烁体后，闪烁体的荧光效率会降低，能量衰减, 从而使探测效率下降的现彖。3、计数效率测定：液闪仪是通过待测样品与标准样品的计数率比较来测定放射性的。因

10、两 者猝灭情况不同，故需作校正。*常用校止法有内源法、外源法及道比法等。目前多用外部标准源校正法，可方便仪器自 动化猝灭校正。(%1) 液体闪烁技术的应用：庾学检验中，液闪仪可作多种标记物竞争性结合放射分析，以及作体液构成成分的检查 等。例：利用液体闪烁计数法可检查人体的水分含量及各种电解质含量。*方法：是根据放射性同位索的稀释原理，通过放射性标记物在休内的交换量的测定，从 而得知相对体液构成成分的量。四、晶体闪烁计数器(放射免疫计数仪)用于测量1251、1311等核素发射的射线。(%1) 仪器纽成及工作原理：1、闪烁体：指射线通过后可产生闪光的荧光物质。常用的冇无机闪烁体、冇机闪烁体及特殊闪

11、烁体等。(1)有机闪烁体：常由两种以上有机物如恿:、英等混合而成。无机闪烁体：有碱金属卤化物闪烁体，zns(ag)品体等。(3) 其它：有玻璃闪烁体、气体闪烁体等，医学中应用不多。2、光电倍增管：作用是把闪烁体发出的极弱闪光转换成电信号。其结构包括光阴极、光电 转换、电子倍增及阳极所组成。*光电倍增管原理：(1) 光阴极：有光敏层，能高效地把入射光了转换成低能电了。(2) 打拿极：级联的十儿个打拿极受到加速的低能电子轰击，从表面倍增地发岀次级电子， 最后到达阳极。(3) 阳极：收集由最后一级打拿极发来的电了，并输入电了线路。*然后信号送入甄別器；3、多道脉冲分析器(1) 脉冲高度分析器原理：如

12、图，由比例放人器、两个甄别器和一个反符合电路三部分纽成。*介于u和u+ u送入反符合电路；产牛一个脉冲计数，否则电路无脉冲输出。* u称阈电压，u称窗电压或窗宽。*光电倍增管产生的信号输入到比例放大器放人；(2) 多道分析器：山模数变换器和存储器两部分组成。进入分析器的所有脉冲、按幅度大小安排在不同存储单元独立计数。各计数器再记录每 一顺序时间段的总计数，从而完成多路定标的脉冲高度多道分析。(3) 能谱分析：射线通过光电吸收、康普顿散射、电子对产生三种机制与物质发生作用；作用吋损失 的能量记录在能谱仪中。*能谱的横坐标为脉冲高度，纵坐标为各个脉冲高度的频数。能谱illi线的峰面积和 射线的 强

13、度成正比。*能谱分析就是根据能谱中各峰的面积、位置等来测定样品屮放射性的组成和含量。(%1) fj20()x 辐射免疫计数器简介1、仪器工作原理:*探测元件：为掺少量t1的nal晶体。*样品位于nal品体井内，晶体吸收1251释放的 射线能量后，发出一光脉冲射到光电倍 增管，经光电转换和逐级放大，最后获得一电脉冲信号。2、仪器结构：由采样和数据处理两人部分纽成。(1) 采样：由探头、换样装置、高低压电源、放人器等组成。(2) 数据处理：由接口、计算机、输入输出装置等组成。3、仪器便用注意事项(1) 仪效率一般应大于70%。(2) 防止探头的nal晶体碰坏或受潮。(%1) 计数器的临床应用1、可做体外样品