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文档简介

1、高效液相色谱基础高效液相色谱基础2015.03.31一、原理和结构一、原理和结构二、分离基础二、分离基础一、原理和结构 原理：原理： 当流动相携带样品流经色谱柱时，其与固定相发生相互作用。由于样品中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，各组分在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由色谱柱中流出。与适当的柱后检测方法结合，实现样品中各组分的分离与检测。 结构结构HPLC常规系统HPLC低压梯度系统（外梯度）HPLC高压梯度系统（内梯度）溶剂瓶高压输液泵六通进样阀液相色谱柱检测器色谱工作站高压输液泵六通进样

2、阀液相色谱柱检测器色谱工作站溶剂瓶真空脱气机比例电磁阀混合器混合器六通进样阀液相色谱柱检测器色谱工作站高压输液泵高压输液泵溶剂瓶溶剂瓶二、分离基础1、分离度： R1.5称为完全分离 2.分离度和分离条件的关系通过改变实验条件，可以系统地改变色谱图中任何两谱峰的分离。 、改变溶剂强度、改变溶剂强度：因素一：流动相的组成（影响a和k） .溶剂的类型：溶剂的类型：改变有机溶剂的类型，对反相和正相色谱来说，均是改变峰间距的有效手段。 改变流动性的PH，使用离子对或胺添加剂改变缓冲液或缓冲液的浓度（主要针对离子化合物），也可作为改变其选择性的方法。 加入络合剂因素二：色谱柱（影响选择性a，柱效N） 优先考虑改变流动相，再考虑更换色谱柱。 色谱柱填料的性质对峰间距有重大影响，不同厂家生产的、不同规格、和不同填充剂的色谱柱都有较大差异。因素三：温度（影响k和a） 柱温增加1，保留值k通常能减小12%，K的改变也能引起a的改变。因素四：进样量（

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