免疫学检测技术的基本原理学习教案

1、会计学1免疫学检测免疫学检测(jin c)技术的基本原理技术的基本原理第一页，共74页。第1页/共73页第二页，共74页。第2页/共73页第三页，共74页。第3页/共73页第四页，共74页。第4页/共73页第五页，共74页。第5页/共73页第六页，共74页。第6页/共73页第七页，共74页。第7页/共73页第八页，共74页。第8页/共73页第九页，共74页。第9页/共73页第十页，共74页。第10页/共73页第十一页，共74页。第11页/共73页第十二页，共74页。半固相：单向、双向琼脂扩散、免疫电泳第12页/共73页第十三页，共74页。定性(dng xng)、精确定量、定位第13页/共73页

2、第十四页，共74页。第14页/共73页第十五页，共74页。第15页/共73页第十六页，共74页。 ELISA法将抗原法将抗原(kngyun)和抗体的免疫反应和和抗体的免疫反应和酶的催化反应相结合，具有特异性而且极为敏感，酶的催化反应相结合，具有特异性而且极为敏感， 可可以在细胞或亚细胞水平上检测抗原以在细胞或亚细胞水平上检测抗原(kngyun)或抗体或抗体所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。 ELISA ELISA法是目前广泛应用于临床检测和生物制法是目前广泛应用于临床检测和生物制药等领域的免疫学技术，具有药等领域的免疫学技术，具有(j

3、yu)(jyu)微量、特异微量、特异、高效、经济、方便和安全等特点。、高效、经济、方便和安全等特点。第16页/共73页第十七页，共74页。l因为颜色反应的深浅与相应的抗体或抗原量成正比，因为颜色反应的深浅与相应的抗体或抗原量成正比，l所以可以所以可以(ky)借助于颜色反应的深浅来定量抗体或抗借助于颜色反应的深浅来定量抗体或抗原。原。第17页/共73页第十八页，共74页。第18页/共73页第十九页，共74页。第19页/共73页第二十页，共74页。第20页/共73页第二十一页，共74页。第21页/共73页第二十二页，共74页。第22页/共73页第二十三页，共74页。blotting)第23页/共7

4、3页第二十四页，共74页。 通常通常(tngchng)(tngchng)采用不采用不连续电泳系统，通过电荷效应连续电泳系统，通过电荷效应，浓缩效应和分子筛效应，达，浓缩效应和分子筛效应，达到蛋白质高分辨率的分离效果到蛋白质高分辨率的分离效果。v SDS SDS：十二烷基硫酸钠，一种：十二烷基硫酸钠，一种(y zhn)(y zhn)阴离子表面活性剂，可使蛋白质的氢键阴离子表面活性剂，可使蛋白质的氢键和疏水健打开，与之形成蛋白质和疏水健打开，与之形成蛋白质SDSSDS复合物。由于复合物。由于SDSSDS带有负电荷，消除了不同蛋带有负电荷，消除了不同蛋白质间原有的电荷差异，使蛋白质分子在凝胶中的迁移

5、率主要取决于它的分子量。白质间原有的电荷差异，使蛋白质分子在凝胶中的迁移率主要取决于它的分子量。第24页/共73页第二十五页，共74页。第25页/共73页第二十六页，共74页。第26页/共73页第二十七页，共74页。(1) 抗凝抗凝静脉血静脉血(2) 加等加等量量(dn lin)NS(4) 密度梯度离心密度梯度离心(lxn)血浆血浆分离液分离液RBCPBMCPMN(3) 混匀后，缓混匀后，缓慢慢(hunmn)加加于分离液上于分离液上第27页/共73页第二十八页，共74页。第28页/共73页第二十九页，共74页。 PHA刺激4872小时第29页/共73页第三十页，共74页。第30页/共73页第三

6、十一页，共74页。培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性淋巴细胞增殖淋巴细胞增殖(zngzh)试验（试验（3H-TdR掺入法）掺入法）示意图示意图第31页/共73页第三十二页，共74页。第32页/共73页第三十三页，共74页。E-玫瑰花结试验玫瑰花结试验(shyn)示意示意图图第33页/共73页第三十四页，共74页。第34页/共73页第三十五页，共74页。第35页/共73页第三十六页，共74页。第36页/共73页第三十七页，共74页。第37页/共73页第三十八页，共74页。 3）FACS (流式细胞(xbo)术:FCM) 4）TUNEL法第38页/共73页第三十九页，共7

7、4页。第39页/共73页第四十页，共74页。第二十三章第二十三章第40页/共73页第四十一页，共74页。免疫学防治免疫学防治(fngzh)第41页/共73页第四十二页，共74页。自然免疫自然免疫主动主动被动被动人工免疫人工免疫主动主动被动被动第42页/共73页第四十三页，共74页。自然免疫自然免疫(z rn (z rn min min y)y)人工免疫人工免疫(rn (rn nn min min y)y)自动免疫自动免疫 被动免疫被动免疫显性感染显性感染隐性感染隐性感染胎儿或新生儿胎儿或新生儿从母体获得从母体获得抗抗体体主动免疫主动免疫 被动免疫被动免疫注射疫苗注射疫苗注射抗体或注射抗体或细胞

8、因子细胞因子第43页/共73页第四十四页，共74页。n主动免疫（主动免疫（Artificial active immunity） n 给机体输入抗原性物质，激活机体的免疫应答，使给机体输入抗原性物质，激活机体的免疫应答，使机体自身产生抵抗疾病机体自身产生抵抗疾病(jbng)的能力。的能力。n被动免疫（被动免疫（Artificial passive immunity） n 将对疾病将对疾病(jbng)有免疫力的供者的免疫应答产物转有免疫力的供者的免疫应答产物转移给受者，或自体免疫细胞体外处理后回输自身，以预防移给受者，或自体免疫细胞体外处理后回输自身，以预防或治疗疾病或治疗疾病(jbng)。自然

9、自然(zrn)主动主动免疫免疫人工主动免疫人工主动免疫自然被动免疫自然被动免疫人工被动免疫人工被动免疫第44页/共73页第四十五页，共74页。第45页/共73页第四十六页，共74页。第46页/共73页第四十七页，共74页。第47页/共73页第四十八页，共74页。Th B7MHC-II TCR CD4 ICAM LFA-1APCThThBCD40L CD40分泌细胞因子ThBBB浆细胞BCR抗原Bm CD28Vaccination第48页/共73页第四十九页，共74页。第49页/共73页第五十页，共74页。 是用减毒或无毒力的活病原微生物制成。是用减毒或无毒力的活病原微生物制成。 卡介苗、口服小

10、儿麻痹疫苗（糖丸）卡介苗、口服小儿麻痹疫苗（糖丸） 优点：模拟自然感染，一般优点：模拟自然感染，一般(ybn)(ybn)只需接种一次。只需接种一次。 免疫原性强、免疫效果好免疫原性强、免疫效果好 缺点：可能出现毒力回复突变缺点：可能出现毒力回复突变第50页/共73页第五十一页，共74页。牛型结核杆菌牛型结核杆菌(ji h n jn) Mycobacterium bovis 置于含胆汁的置于含胆汁的培养基，逐渐培养基，逐渐增加增加(zngji)胆汁的浓度胆汁的浓度卡介苗卡介苗 Bacillus Calmette-Guerin （BCG）在胆汁中适应性生在胆汁中适应性生长，充分减毒成为长，充分减毒

11、成为预防预防(yfng)肺结肺结核的疫苗。核的疫苗。13年年230次传代次传代法国科学家法国科学家CalmetteGuerin第51页/共73页第五十二页，共74页。 选用选用(xunyng)(xunyng)免疫原性强的病原体，经人工大量培免疫原性强的病原体，经人工大量培养后，用理化方法灭活制成。又称养后，用理化方法灭活制成。又称“死疫苗死疫苗”。 如：流感疫苗、甲肝疫苗如：流感疫苗、甲肝疫苗 优点：安全优点：安全 缺点：免疫原性较差，主要诱导特异性抗体的缺点：免疫原性较差，主要诱导特异性抗体的 产生；需加强免疫。产生；需加强免疫。第52页/共73页第五十三页，共74页。第53页/共73页第五

12、十四页，共74页。死疫苗(ymio)和活疫苗(ymio)的比较 区别点 灭活疫苗 减毒活疫苗制剂特点死、强毒株活、弱毒或无毒接种剂量及次数较多，2-3次较少，1次副作用较大较小保存及有效期易保存，较稳定易失效，4保存免疫效果较差，维持数月至2年较好，维持3-5年或更长第54页/共73页第五十五页，共74页。类毒素疫苗类毒素疫苗(ymio) 类毒素是用细菌的外毒素经类毒素是用细菌的外毒素经0.30.4%甲醛甲醛(ji qun)处处理制成。如破伤风、百日咳、白喉类毒素疫苗理制成。如破伤风、百日咳、白喉类毒素疫苗第55页/共73页第五十六页，共74页。提取或合成天然微生物某些成分提取或合成天然微生物

13、某些成分(chng fn)的亚单位（如外壳的特殊的亚单位（如外壳的特殊蛋白结构）制成的疫苗。如：乙肝疫苗、蛋白结构）制成的疫苗。如：乙肝疫苗、HPV（宫颈癌）疫苗；细菌（宫颈癌）疫苗；细菌荚膜多糖疫苗等。荚膜多糖疫苗等。 优点：副作用小、更为安全、稳定优点：副作用小、更为安全、稳定(wndng)缺点：免疫原性低，需与佐剂合用。缺点：免疫原性低，需与佐剂合用。乙肝病毒（乙肝病毒（HBsAg）HPV病毒（病毒（L1蛋白）蛋白）第56页/共73页第五十七页，共74页。第57页/共73页第五十八页，共74页。我国推行的儿童我国推行的儿童(r tng)基础免疫程序基础免疫程序 年年 龄龄 疫疫 苗苗 年

14、年 龄龄 疫疫 苗苗出生时卡介苗、乙肝疫苗8个月麻疹疫苗2个月三价脊髓灰质炎疫苗11.5-2岁百白破43个月三价脊髓灰质炎疫苗2，百白破14岁三价脊髓灰质炎疫苗44个月三价脊髓灰质炎疫苗3，百白破27岁卡介苗、麻疹疫苗、白破二联疫苗5个月百白破312岁卡介苗（农村）第58页/共73页第五十九页，共74页。新疫苗新疫苗(ymio)的审核：的审核： 3期临床试验期临床试验 I I期：以新疫苗的的安全性为主期：以新疫苗的的安全性为主 ；期：以新疫苗的有效性为主；期：以新疫苗的有效性为主；期：证明期：证明(zhngmng)(zhngmng)新疫苗预防传染病的免疫保护性新疫苗预防传染病的免疫保护性为主。

15、为主。 疫苗疫苗(ymio)的临床试验的临床试验第59页/共73页第六十页，共74页。第60页/共73页第六十一页，共74页。第61页/共73页第六十二页，共74页。第62页/共73页第六十三页，共74页。第63页/共73页第六十四页，共74页。H2003PsoriasisRaptivaGenentech/XomaC1997Non-Hodgkins LymphomaRituxanBiogenIdec/Genentech/RocheM2003Non-Hodgkins Lymphoma BexxarCorixa/GlaxoSmithKlineC2004Colorectal CancerErbitu

16、x BMS/ImClone SystemsH2003Asthma XolairNovartis/Genentech/TanoxPD2002Rheumatoid ArthritisHumiraAbbott/CATH2001Chronic Lymphocytic LeukemiaCampathSchering /ILEX OncologyH2000Acute Myleoid LeukemiaMylotargWyethC1998Acute Transplant RejectionSimulectNovartisC1998Crohns, Rheumatoid ArthritisRemicadeJ &a

17、mp; JHH19982004Breast CancerColorectal CancerHerceptinAvastin Genentech/RocheH1998Viral Respiratory DiseaseSynagisMedImmune/AbbottH1997Acute Transplant RejectionZenapaxPDLIM2002Non-Hodgkins LymphomaZevalinBiogenIdecC1994Acute Cardiac ConditionsReoProJ&J/Eli Lilly M1986Organ Transplant RejectionO

18、rthoclone-OKTOrtho BiotechAntibody Type (2)Date of FDA ApprovalIndicationsName of Product(1)Company Name美国美国FDA批准生产批准生产(shngchn)用于临床治疗的单克隆用于临床治疗的单克隆抗体抗体第64页/共73页第六十五页，共74页。第65页/共73页第六十六页，共74页。第66页/共73页第六十七页，共74页。TumorMcAb-toxinMcAb-medicineMcAb-isotope 将化疗药物、毒素、放射性同位素等细胞毒性物质偶联将化疗药物、毒素、放射性同位素等细胞毒性物质偶联到肿瘤单抗上，从而制备到肿瘤单抗上，从而制备(zhbi)抗肿瘤单抗偶联物，也称抗肿瘤单抗偶联物，也称免疫偶联物免疫偶联物 放射免疫偶联物放射免疫偶联物 90Y（钇），（钇），131I 化学偶联物化学偶联物 免疫毒素免疫毒素 植物毒素植物毒素 细菌细菌(xjn)毒素毒素第67页/共73页第六十八页，共74页。基因工程