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1、实验五琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制【实验目的】1、掌握竞争性抑制概念及作用机理。2、了解在无氧情况下观察脱氢酶作用的简单方法。【实验原理】存在于心肌、骨骼肌、肝脏等组织中琥珀酸脱氨酸，能使琥珀酸脱氢而成延胡索酸，脱 下氢可使甲烯蓝退色，还原为甲稀白。反应如下：CQOH(CHACOOHHCCOOHIIHOOCH琥珀阿理疆Ge八MB甲林草酸、丙二酸等在结构上与琥珀酸相似，可与琥珀酸竞争与琥珀酸脱氢酸的活性中心结合。若酶已与丙二酸等结合，则不能再与琥珀酸结合而使之脱氢，产生抑制作用，且抑制程度取决于琥珀酸与抑制剂在反应体系中浓度的相对比例，所以这种抑制是竞争性抑制。本实验通过观察在由不同浓度的琥

2、珀酸与丙二酸组成的反应体系中使等量甲稀蓝退色反应时间， 从而验证丙二酸对琥珀酸的竞争性抑制作用。【实验用品】1、试剂(1) 0.10mol/L 磷酸盐缓冲液(pH7.4) :0.1mol/L NaHPO19ml 加 0.1mol/LNa 2HPG81ml。(2) 0.093mol/L琥珀酸钠溶液：取琥珀酸钠 1.5g溶于100ml蒸储水中。(3) 0.10mol/L丙二酸钠溶液：取丙二酸钠1.5g溶于100ml蒸储水中。(4) 0.02%甲稀蓝溶液。(5) 液体石蜡。2、器具(1) 0.10mol/L 磷酸盐缓冲液(pH7.4 )： 0.1mol/L NaH 2PQ19ml 加 0.1mol/

3、LNa 2HPO81ml。(2) 0.93mol/L琥珀酸钠溶液：取琥珀酸钠1.5g溶于100ml蒸储水中。(3) 0.10mol/L丙二酸钠溶液：取丙二酸钠1.5g溶于100ml蒸储水中。(4) 0.02%甲烯蓝溶液。(5) 液体石蜡。2、器具(1)恒温水浴箱(2)研钵或组织匀浆机【实验操作】新鲜免肝立即剪碎，放于组织匀浆机中研碎，加入 pH7.4的0.10mol/L磷酸盐缓冲液， 制备成200g/L的肝匀浆液备用。取五支试管分别编号，按下表配制反应体系：试剂0.093mol/L0.10mol/L0.10mol/L(pH7.4)薜勺整法0.02%管于'、琥珀酸钠丙二酸钠磷酸缓冲液叶习系侬甲烯蓝11ml2ml1ml321.5ml0.5ml1ml1ml3滴31ml1ml2ml3滴42ml1ml1ml3滴51ml1ml1ml1ml3滴将各管溶液混匀后加一薄层液体石蜡后静置:（此时/*摇动!），观察各管中的颜色变化，并记录各管颜色完全变化的时间。【思考题】1、抑制的分类及其特点？2、本实验中液体石蜡起什

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