磷酸盐缓冲液PBS配制方法

1、磷酸盐缓冲液(PBS配制方法科研实验2010-04-20 22:25:48 阅读935评论0字号：主中少订阅0.01M PBSPBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4 , pH 7.2)PBS 缓冲液(pH7.2 7.4) : NaCl 137mmol/L , KCl 2.7mmol/L , Na2HPO4 4.3mmol/L , KH2PO4 1.4mmol/L称 7.9g NaCl , 0.2g KCl , 0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4) 和 1.8g K2HPO4 , 溶于800

2、 ml蒸保水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸保水定容至1 Lc 保存于4 C冰箱中即可。需要注意的是，通常所说的浓度 0.01 M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度 ，而 非Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的。母液的配制：0.2M Na2HPO4 :称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4 :称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于 1000ml 水各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配 0.2M PB (pH=7.4 , 100ml):取 19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4 , 8

3、1ml 0.2mol/L 的Na2HPO4,即可。然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释 即可，如：0.1M PB (PH=7.4 ):取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。0.01M PB (PH=7.4):取 50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。0.02M PB (PH=7.4):取 100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。若需要NaCl的话，加入NaCl 至 0.9% (g/100ml )即可。另：其它各种另 PH值的0.2MPB (100ml)配方：pH0.2M NaH2PO4(ml)0.2M

4、Na2HPO4 (ml)5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.590.57.88.591.57.97938.05.394.70.01M磷酸盐缓冲液PBS ）配制方法称取 8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4 和 0.24g KH2PO4,溶于 800ml

5、 蒸偕水 中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸偕水定容至1L即可。在 15lbf/in2（1034 105Pa）高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4C冰箱 中。需要注意的是，通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的 磷酸根浓度，而非 Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的。 如果是用于 免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。PH7.67.47.27.0H2O1000100010001000NaCl8.58.58.58.5Na2HPO4 2.22.22.22.2NaH2PO4 0.10

6、.20.30.4根据经验来看，新鲜配置的 PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间，可是在温度的 影响下，尤其在夏天，其电离常数发生了改变，在经过昼夜的时间后，PH值会明显改变（我亲自测过偏酸）。所以做实验的同学可要注意了，PH值可能会影响实验结果，甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气，要加强实验条件控制 问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS,如果发生偏酸或偏碱，注意重新换新液。PBS缓冲液称取 NaCl 8g , KCl 0.2g , Na2HPO4 ?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g ，溶于 900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L,

7、常温保存备用。PBST缓冲液取300曰Tween-20加入PBS 100ml中，混匀后即刻使用。现用现配。如果是把所有固体加大十倍，配置为浓缩液，工作时候十倍稀释，那么，在刚配好浓缩液时,PH在6.5左右，明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调， 但是有更方便的方法。十倍稀释以后,PH自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取 少量试一试，配好之后再测一次 PH8.0的PBS配方详细1. NaCl 137mmol/L , KCl 2.7mmol/L , Na2HPO4 4.3mmol/L , KH2PO4 1.4mmol/L2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分

8、搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将pH值调节至8.0，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4. 周温周压i火菌后，室温保存。注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2 。0.05mol/L PBS（磷酸缓冲液 Phosphate Buffer Solution , PBS）的配制：甲液：0.05mol/L Na2HPO4 溶液：称取磷酸氢二钠 9.465g 7.099g,加蒸 偕水 至 1000ml ;乙液：0.05mol/L KH2P04 溶液:称取磷酸二氢钾，9.07g 6.803g,加蒸偕水至 1000m1。将甲乙液分装在 棕色瓶内，于4C冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混 合，即可得所需pH的缓冲液，见下表：pH 甲液ml 乙液ml5.29 2.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.