苏教植物细胞工程精选实用教案

1、 一、植物组织培养一、植物组织培养第1页/共33页第一页，共33页。生物体内的细胞为什么没有表现出全 能性，而是分化成不同(b tn)的组织器官？使已分化的细胞表现出全能性需要(xyo)哪 些条件？ 离体、提供营养物质、植物激素(j s)及其它适宜条件。在特定的时间和空间条件下，基因选择性的表达的结果。第2页/共33页第二页，共33页。 要把一块(y kui)组织通过培养得到一株完整植株, 应该如何操作呢?请同学们阅读教材，回答(hud)问题。第3页/共33页第三页，共33页。一、植物一、植物(zhw)组织培养组织培养 是指依据细胞全能性原理。在无菌条件(tiojin)下，分离植物的器官、组织

2、、细胞或原生质体，并在培养基上培养，在适宜的条件(tiojin)下使其长成部分或完整植株的技术。 2.植物(zhw)组织培养的概念第4页/共33页第四页，共33页。无菌接种诱导愈伤组织的形成根、芽的形成培养室移栽大田脱分化脱分化再分化再分化植物激素切取形成层（外植体消毒）第5页/共33页第五页，共33页。3.3.植物(zhw)(zhw)组织培养过程第6页/共33页第六页，共33页。强调强调(qing dio)几个概念：几个概念：愈伤组织：离体的植物器官、组织或细胞，在培养一段时间以后，通过(tnggu)细胞分裂，形成一种高度液泡化、无定形状态薄壁细胞组成的排列疏松无规则的组织。第7页/共33页

3、第七页，共33页。脱分化：分化的细胞经诱导后，脱分化：分化的细胞经诱导后，失去特有的结构失去特有的结构(jigu)功能功能转变成未分化的细胞的过程，转变成未分化的细胞的过程，又称去分化。又称去分化。实质是恢复细胞的全能性过程(guchng)。结果是形成愈伤组织。再分化：脱分化产生的愈伤组织在培再分化：脱分化产生的愈伤组织在培养养(piyng)过程中重新分化成根或过程中重新分化成根或芽等器官的过程。芽等器官的过程。第8页/共33页第八页，共33页。知识(zh shi)拓展 当细胞分裂素和生长素共同(gngtng)使用时，能刺激愈伤组织的形成，而通过调节二者的浓度比，就可以调控植物细胞培养过程中芽

4、和根的形成；但两者的比例变化后，诱导的结果是不同的：当生长素含量高于细胞分裂素时，主要诱导植物组织脱分化和根原基的形成（即有利于根的发生）；当细胞分裂素含量高于生长素时，则主要诱导植物组织再分化和芽原基的形成（即有利于芽的发生）。第9页/共33页第九页，共33页。(1)(1)在组织培养实验在组织培养实验(shyn)(shyn)中，为什么要强调所用器械的中，为什么要强调所用器械的灭菌和实验灭菌和实验(shyn)(shyn)人员的无菌操作？人员的无菌操作？ 植物组织培养中用到的培养基含有丰富的营养成分，有利于培养物的生长，然而各种杂菌同样也可以在上面迅速生长，所以植物组织培养过程中污染现象经常发生

5、。培养基一旦被污染，迅速生长的各种杂菌不但会和培养物争夺营养，而且这些杂菌生长的过程中会生成大量对培养物有害的物质，导致培养物迅速死亡。 造成培养基污染的因素有很多，一般包括：外植体带菌、培养瓶和各种器械灭菌(mi jn)(mi jn)不彻底、操作人员操作不规范等。所以在组织培养实验中用到的植物材料和各种器械都要进行彻底地灭菌(mi (mi jn)jn)，实验人员操作一定要规范，避免带入杂菌。讨论(toln)：第10页/共33页第十页，共33页。的培养基被污染(wrn)后的培养基没有(mi yu)污染试管(shgun)苗第11页/共33页第十一页，共33页。(2)(2)在本实验中，切取胡萝卜块

6、根时强调要切取含有形成在本实验中，切取胡萝卜块根时强调要切取含有形成层部分，原因是这部分容易诱导形成愈伤组织。请思考层部分，原因是这部分容易诱导形成愈伤组织。请思考(sko)(sko)一下，胡萝卜的其他部分（如茎、叶、花），是一下，胡萝卜的其他部分（如茎、叶、花），是否也能培养成小植株，你能用实验的方法进行验证吗？否也能培养成小植株，你能用实验的方法进行验证吗？胡萝卜的其他部分（如茎、叶、花）也能培养再生形成小植株，只是诱导(yudo)(yudo)愈伤组织比较困难。第12页/共33页第十二页，共33页。(3)(3)请根据上面的实验请根据上面的实验(shyn)(shyn)过程，概括出植物过程，概

7、括出植物组织培养技术的流程简图。组织培养技术的流程简图。第13页/共33页第十三页，共33页。脱分化再分化第14页/共33页第十四页，共33页。（3 3）转基因植物）转基因植物(zhw)(zhw)的培育的培育胚 状 体人工种皮人工胚乳第15页/共33页第十五页，共33页。反馈(fnku)练习1.下列属于(shy)组织培养的是：（ ）A.花粉培养成单倍体植株B.芽发育成枝条C.根尖分生区发育成成熟区D.未受精的卵发育成植株A第16页/共33页第十六页，共33页。2.在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，下列哪一项条件是不需要的（ ）A.消毒灭菌B.适宜(shy)的温度C.充足的

8、光照D.适宜(shy)的养料和激素C第17页/共33页第十七页，共33页。3.要将胡萝卜韧皮部细胞(xbo)培养成完整植株，不需要 （ ）A.具有完整细胞(xbo)核的细胞(xbo)B.离体状态C.导入外源基因D.一定的营养物质和激素C第18页/共33页第十八页，共33页。二、植物(zhw)细胞培养1.植物(zhw)细胞培养的概念 是指组织培养过程中形成的愈伤组织或其它易分散的组织置于液体培养基中，进行悬浮(xunf)培养，得到分散的悬浮(xunf)细胞，通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量的细胞群体的一种技术。第19页/共33页第十九页，共33页。固体(gt)培养基液体(yt)培养基第20页

9、/共33页第二十页，共33页。原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此(ync)，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质。 继代培养是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失(snsh)，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上，这种转移称为继代培养或传代培养。 第21页/共33页第二十一页，共33页。2.植物(zhw)细胞培养与植物(zhw)组织培养的关系. 植物(zhw)组织培养是植物(zhw)细胞培养的基础培养的目的(md)不同植物组织培养的目的是得到更多的植物体植物细胞培养的目的是获得人类所需要的

10、细胞次生代谢产物次生代谢产物是由次生代谢产生的一类细胞生命活动或植物生长发育正常运行的非必需的小分子有机化合物，其产生和分布通常有种属、器官、组织以及生长发育时期的特异性。 第22页/共33页第二十二页，共33页。3.实例(shl) 成功的培养了红豆杉的细胞(xbo)，从中提取出重要的抗肿瘤药物紫杉酮4.培养(piyng)过程筛选细胞获得次生代谢产量高、生长迅速的单细胞无性繁殖系扩大培养发酵生产次生代谢产物分离纯化无性繁殖系是指从一个祖先通过无性繁殖方式产生的后代,是具有相同遗传性状的群体。如从一块植物组织的外植体、一团愈伤组织或一个细胞产生的所有愈伤组织或细胞群。 第23页/共33页第二十三

11、页，共33页。5.优点(yudin)可大量生产具有生理(shngl)活性的次生代谢产物生产过程快速(kui s)、高效，而且不受季节、外部环境等条件的限制。第24页/共33页第二十四页，共33页。因为不同种生物之间存在因为不同种生物之间存在着生殖隔离，所以用传统着生殖隔离，所以用传统的有性杂交方法的有性杂交方法(fngf)(fngf)是不可能做到这一点的。是不可能做到这一点的。于是，一些于是，一些(yxi)(yxi)科学家试图用这两种科学家试图用这两种植物的体细胞进行杂交，来实现这一美妙植物的体细胞进行杂交，来实现这一美妙的设想。的设想。这幅番茄这幅番茄马铃薯图利马铃薯图利用用(lyng)(l

12、yng)传统有性传统有性杂交方法能实现吗？为杂交方法能实现吗？为什么？什么？三、植物体细胞杂交技术第25页/共33页第二十五页，共33页。 1972 1972年卡尔森等通过年卡尔森等通过(tnggu)(tnggu)两个烟草两个烟草品种之间原生质体的融合，获得了第一个体细品种之间原生质体的融合，获得了第一个体细胞杂种。胞杂种。19781978年梅尔彻斯年梅尔彻斯(Melchers)(Melchers)等首次获得等首次获得(hud)(hud)了番茄和马铃薯的属间体细胞杂了番茄和马铃薯的属间体细胞杂种种“Potamato”“Potamato”。 目前，已得到栽培烟草与野生烟草、目前，已得到栽培烟草与

13、野生烟草、栽培大豆与野生大豆、籼稻与野生稻、籼稻栽培大豆与野生大豆、籼稻与野生稻、籼稻与粳稻、小麦与鹅冠草等细胞杂种及其后代，与粳稻、小麦与鹅冠草等细胞杂种及其后代，获得了有价值的新品系或育种上有用的新材获得了有价值的新品系或育种上有用的新材料。料。 第26页/共33页第二十六页，共33页。第27页/共33页第二十七页，共33页。杂杂种种(zzhng)植植株株融合融合(rngh(rngh)的原的原生质体生质体ABAB再再生生(zishng)出出细细胞胞壁壁脱脱分分化化愈伤组织再再分分化化1. 1.过程过程植物细胞的融合植物细胞的融合植物组织培养植物组织培养原生质体B原生质体A杂种杂种细胞细胞A

14、B去 壁去 壁人人工工诱诱导导方法？方法？促进融合促进融合的方法？的方法？融合完成的标志植物细胞A植物细胞B第28页/共33页第二十八页，共33页。2.2.概念概念(ginin)(ginin) 将不同种的植物体细胞，在一定条件下将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种融合成杂种(zzhng)(zzhng)细胞，并把杂种细胞，并把杂种(zzhng)(zzhng)细胞培育成新的植物体的技术。细胞培育成新的植物体的技术。3.3.原理原理(yunl)(yunl)细胞膜的流动性细胞膜的流动性植物细胞的全能性植物细胞的全能性第29页/共33页第二十九页，共33页。4.优势和未解决(jiju)的问题 、优势（与有性杂交(yuxng zjio)方法比较） ：、未解决(jiju)的问题：未能让杂种植物按照人们的需要将亲代的优良品性全都表现出。打破了