海藻样品中无机砷测定方法的研究

1、海藻样品中无机砷测定方法的研究韦昌金, 刘霁欣*, 徐浩北京吉天仪器有限公司 北京 100016摘要 通过比较总砷提取率、加标回收率和砷形态的转化，考察了提取剂组成、样品与提取剂比例、无机砷的检测方法，建立了一种新的海藻中无机砷含量的测量方法：1.2 mol/L HCl提取后再用双氧水氧化，之后采用等度高效液相色谱-氢化物发生原子荧光(HPLC-HGAFS)方法测量，该方法对无机砷的最小检出浓度为0.06mg/kg。采用此方法测定了多种海藻样品中无机砷含量，发现除羊栖菜无机砷含量达到了37.1mg/kg外，其它海藻中无机砷含量均低于0.2mg/kg。另外，采用该方法对海藻样品中总砷的提取率都达

2、到了80.0%以上，绝大部分可达85.0%以上；各种样品的加标回收率都在75.0110.0%的范围之内。关键词 形态分析，海藻，无机砷，前处理方法中图分类号 Investigation of determination method for inorganic arsenic in seaweedsChangjin Wei，Jixin Liu*，Hao Xu (Beijing Titan Instruments Co., Ltd, 100016, Beijing, China)Abstract Extraction reagents, ratio of the sample to extrac

3、tion reagent, separation methods were optimized to develop a new determination methodology of inorganic arsenic in seaweeds, By comparing extraction efficiency, spiked recovery and the transformation of arsenic species, This method included: the seaweeds were extracted with 1.2 mol/L HCl, then the e

4、xtracts were subsequently oxidized with peroxide, finally As(V) in oxidized extracts were determined with isocratic high performance liquid chromatography-hydride generation-atomic fluorescence spectrometry (HPLC-HG-AFS) to quantify inorganic arsenic. The determined minimal inorganic arsenic of the

5、methodology (2 times of the noise) was 0.06mg/kg. Applying the new methodology to analyze the inorganic arsenic in seaweeds, the results indicated that inorganic arsenic in a majority of seaweeds were less than 0.2 mg/kg, except hijiki in which inorganic arsenic was up to 37.1 mg/kg. By this method,

6、 the extraction efficiencies were more than 80.0 % and the spiked recoveries from 75.0 to 110.0% were obtained.Keywords Speciation analysis, seaweeds, inorganic arsenic, extraction method1. 前言自然界中，砷的主要形态有：砷酸盐(As(V)、亚砷酸盐(As(III)、一甲基砷化合物(MMA)、二甲基砷化合物(DMA)、三甲基砷的氧化物(TMAO)、砷甜菜碱(AsB)、砷胆碱(AsC)和砷糖(AsS)等，其中的

7、无机砷(iAs，包括As(V)、As(III)的毒性很高，而有机砷中仅有MMA和DMA有较小的毒性，其它有机形态大多无毒，所以可简单的认为无机砷的含量基本能够反映样品中有毒砷的含量。据文献报道1, 2，多数海藻中基本不含无机砷，其主要砷形态是大量的AsS和少量DMA，但这两种砷形态都有一定的氢化物发生能力3，会对目前国内测定无机砷常用的氢化物原子荧光光度法4产生严重的正干扰，致使海藻类样品(如紫菜、海带)检出无机砷超标。目前常用的无机砷的检测方法主要有两种，一种是Munoz等5提出的浓HCl提取后，对提取液萃取、反萃取消除有机砷干扰后，再以原子光谱测定的方法；另一种是提取后，采用高效液相色谱(

8、HPLC)和原子光谱(主要是ICPMS和HGAFS)联用检测的方法6。其中前一种方法该操作繁琐，过程长，极易造成污染，后一种方法虽然操作简单，但由于多使用水+甲醇作为提取剂，提取效率往往不佳7。所以，目前还没有一个较为完备的无机砷测量方法，本文对上述两种方法进行了综合、改进，通过总砷提取率、加标回收率和砷形态的转化，考察了提取剂组成、样品与提取剂比例、砷形态检测方法的条件，建立了一种新的海藻中无机砷含量的测量方法：1.2 mol/L HCl提取后再用双氧水氧化，之后采用等度方法测量。采用此方法对多种海藻样品(紫菜、海带、羊栖菜、裙带菜和红毛菜)中无机砷、有机砷均有很高的提取率，并且无机砷的加标

9、回收率也较高。2 实验部分2.1 仪器与试剂形态部分测量采用SA-10原子荧光形态分析装置(HPLC-HGAFS装置，北京吉天仪器有限公司)进行检测，其中HPLC部分使用LC-10ATVP高压液相泵(苏州岛津)，详细的测定条件见表1。数据采集和处理采用北京吉天仪器有限公司的LCAFS色谱-原子荧光联用数据采集系统、处理软件系统完成，峰面积定量。总砷含量使用介质辅助微波消解(TMW-100，北京吉天仪器有限公司)进行前处理，采用氢化物发生原子荧光(AFS9130，北京吉天仪器有限公司)测定。As(III)标准溶液从国家标准物质中心购得。CH3AsO(ONa)2·6H2O和Na2HAsO

10、4·7H2O从Sigma-Aldrich购得，(CH3)2AsO2H从Acros购得。除As(III)以外的各标准储备液通过溶解相应量的固体试剂得到，4下保存，标准工作曲线用的混合砷标准当日稀释配制。流动相使用之前需经过0.45m滤膜过滤，KBH4溶液用0.5% KOH当日配制，所有的试剂均是分析纯或是优级纯，整个实验都使用超纯水(>18M)。表1 无机砷测定的HPLC -HG-AFS条件Table 1 Experiment condition for determination of inorganic arsenic with HPLC -HG-AFSHPLC色谱柱(Col

11、umn)Hamilton PRP-X100 (250mm×4.1mm i.d.,10m )保护柱(Guard column)Hamilton PRP-X100 (25mm×2.3mm i.d.,12-20m)等度分离流动相(Mobile phase in isocratic separation)15 mmol/L (NH4)2HPO4，pH 6.0梯度分离流动相(Mobile phase in gradient separation)(A) 1 mmol/L K2HPO4/1%CH3OH，pH 9.0(B) 15 mmol/L K2HPO4/1%CH3OH，pH 9.00

12、5min，100% A；520min，100% B；2035min，100% A；40min，停止。进样体积(Injection volume)100LHG-AFS还原剂(Reductant)1.5% KBH4+ 0.5% KOH载流(Carrier Solution)7% HCl负高压(PMT voltage)285V灯电流(HCL current)100mA载气(Carrier gas)400mL/min屏蔽气(Shield gas)600mL/min2.2 海藻样品的无机砷提取方法及总砷的消解海藻样品部分由上海水产大学提供，部分从市面购得，均粉碎后使用。无机砷的前处理方法：称取经粉碎过的

13、干样2.0g于25mL具塞刻度试管中，加入1.2mol/L HCl溶液10mL，混匀，在70水浴下恒温震摇2h，使样品被充分浸提。取出冷却，加水定容到25mL，再在70水浴下振摇1h。取出冷却，取10mL溶液在3200rpm下离心20min，在5mL离心管中加入1.0mL上清液和0.2mL H2O2后，用水稀释、定容到2mL，混匀后在70水浴下恒温氧化20min，取出冷却，所得溶液在3200rpm转速下离心20 min，上清液用0.45m滤膜过滤后上原子荧光形态分析仪测量。样品和提取溶液中总砷的测定：取0.5g样品或5mL样品提取液，加入8mL HNO3、2mL HClO4、2 mL H2SO

14、4在敞口微波消解装置上进行消解，消解澄清后赶酸至近干，之后用水清洗3次，清洗液转移到50mL比色管中，加入50g/L硫脲和50g/L抗坏血酸的混合液10mL以及1mL HCl，最后用水稀释至刻度。放置30min以上后用AFS9130测量总砷含量，测定条件为：光电倍增管负高压270V，载气流量400mL/min，屏蔽气流量800mL/min，砷灯总电流60mA，载流使用5% HCl，还原剂使用10g/L KBH4+5g/L KOH。3 结果与讨论3.1砷形态分离方法实验当中采用高效液相色谱氢化物发生原子荧光联用法测定样品中的无机砷含量，因为无机砷主要以阴离子形式存在，因此使用PRPX100阴离子

15、交换柱作为分离，分离方法有两种，即等度分离和梯度分离方法。关于等度分离方法的优化可参见文献8，其分离谱图如图1A，图中的洗脱顺序依次是As(III)、DMA、MMA、As(V)，保留时间最长的As(V)在12分钟之前就完全被流动相洗脱下来。另外一种分离方法是梯度分离方法，由于无法购买到AsS试剂，因此以紫菜海带的混合水提液来代替，并在得到的水提液中加入400µg/L 的As(III)、DMA、MMA、As(V)混合标准溶液，加标水提液4倍稀释后的梯度分离谱图见图1B。由图1B可知，梯度分离方法不仅可以把四种主要砷形态即As(III)、DMA、MMA、As(V)分离开来，也可以把几种未

16、知有机砷形态(unAs，应为AsS)分离得很好，完成一个梯度分离的时间程序是40分钟。图1 等度分离和梯度分离砷形态的谱图A， 等度分离谱图，四种砷形态浓度均为75 µg/L； B， 梯度分离谱图，紫菜海带的混合水提液(4倍稀释)，四种砷形态的加标浓度均为100 µg/LFig.1 Chromatogram of arsenic species with isocratic and gradient separationA，Chromatogram of arsenic species with isocratic separation . As(III) 75 µ

17、;g/L ,DMA 75 µg/L, MMA 75 µg/L , As(V) 75 µg/L；B，Chromatogram of spiked arsenic species in water extract of seaweeds with gradient separation. As(III) 100 µg/L ,DMA 100 µg/L, MMA 100 µg/L , As(V) 100 µg/L.3.2 海藻中无机砷提取方法的选择3.2.1无机砷提取方法的提取率 采用文献中常见的两种无机砷的提取方法，即(1+1)的

18、甲醇+水提取法和HCl提取法对海藻进行了提取。甲醇+水提取方法的过程是称取经粉碎过的干样0.5g于15mL离心管中，加入(1+1)甲醇+水溶液10mL，混匀后置于超声波中室温超声萃取20min，然后在3200rpm转速下离心20min，倒出上清液，在残渣中加入(1+1)甲醇+水溶液5mL，重复上述萃取过程3次，合并各次上清液到100 mL烧杯中。上清液在60下氮吹至约剩下5mL，冷却后用水稀释、定容至10mL。所得溶液在3200 rpm下离心20min，上清液消解后测得该方法的提取率(样品提取液中的总砷含量与样品中总砷含量的比)。HCl提取法是最常用的无机砷提取方法，虽然在HCl中AsS会发生

19、分解，但其分解要经过稳定性很高的DMA，很难分解为无机砷，所以HCl提取时，AsS的分解不会改变无机砷值，这得到了文献9和本组前期工作10的证实。考察了无机砷测量国家标准方法(6.0mol/L HCl提取)的提取率，其具体过程是：称取经粉碎过的干样2.0g于25mL具塞刻度试管中，加入6.0mol/L HCl溶液20mL，混匀，在70水浴下恒温震摇1h，使试样充分浸提。取出冷却，用6.0mol/L HCl定容到25mL，脱脂棉过滤，上清液消解后测得该方法的提取率。采用两种提取方法提取两份海带样品的提取率列于表2中，由表2可知，(1+1)甲醇+水提取的提取率相对较低，在70.085.0%左右，这

20、与文献中报道的甲醇水提取率不高的结果是一致的7；而6.0mol/L HCl的提取率都在88.0 %以上，明显高于(1+1)甲醇+水的提取率。3.2.2 不同无机砷提取方法对应的测量方法的选择 无机砷包含As(III)和 As(V)，一般认为甲醇水提取可保持砷形态不发生变化，首先采用耗时短的等度分离方法分析甲醇水提取液成分，但发现其中一种未知有机砷unAs(*)的保留时间与As(III)重合，另外一种保留时间较长的未知有机砷unAs(#)和As(V)的保留时间非常接近，而且此种未知有机砷unAs(#)的含量非常高，严重干扰As(V)的定量，如图2A，因此，测定甲醇水提取方法所得的无机砷时，不能采

21、用等度分离方法，必须采用梯度分离的方法。HCl提取法所得提取液中含有6.0mol/L HCl，需经过稀释才能满足HPLC的进样要求，HCl提取液经过稀释后等度分析图谱示于图2B中。将图2A、2B相比可知，6.0mol/L HCl提取使样品中的砷形态发生了显著的变化，与As(V)的保留时间非常接近的未知有机砷unAs(#)此时已完全分解，不再干扰As(V)的定量；但仍存在大量与As(III)峰位重合的未知有机砷unAs(*)，严重干扰As(III)的准确定量，这可以通过在样品的提取液中加入具有氧化性、易分解的双氧水把As(III)氧化为 As(V)，最终通过对As(V)的定量得到样品中的无机砷含

22、量，这样就可以避免采用耗时长的梯度分离方法，利于提高分析的效率。综上所述，采用甲醇水提取的提取率较低，还必须采用耗时长的梯度分离法测量无机砷，不利于准确、有效的分析样品中的无机砷，而6.0mol/L HCl提取法的提取率较高，还可采用耗时短的等度色谱法测量无机砷，因此选择HCl提取无机砷、等度色谱法测量的无机砷检测方法，下文就对这一方法进行进一步的优化。表2 不同方法获得的提取液中的提取率Table 2 Results of different extraction reagents提取方法Extraction reagent编号(No.)提取液中总砷aTotal arsenic in ext

23、ract (mg/kg)样品中总砷bTotal arsenic in sample (mg/kg)砷提取率 extraction efficiency (%)(1+1)甲醇+水(1+1) Methanol + water 148.565.374.2254.565.583.26.0mol/L HCl157.865.388.4262.765.595.7图2 海带经不同无机砷提取方法提取液的砷形态A，甲醇水提取液等度分离谱图；B，6 mol/L HCl提取液等度分离谱图；unAs(*), 干扰As(III)定量的未知As形态；unAs(#)，干扰As(V)定量的As形态。Fig.2 Chromato

24、gram of arsenic species in alga with different extraction method A，Chromatogram of arsenic species in extract of alga by methanol-water; B，Chromatogram of arsenic species in extract of alga by 6.0 mol/L HCl; unAs(*), unknown arsenic species which interfered the determination of As(III) ; unAs(#), un

25、known arsenic species which interfered the determination of As(V)3.3 不同浓度的酸提取海带的提取率以及砷形态变化虽然6.0mol/L HCl提取法的提取率较高，还可采用耗时短的等度色谱法测量无机砷，但是6.0mol/L HCl的酸度太高，在分析前需较大倍数稀释，因此在保证提取率且不影响无机砷测定的前提下，降低提取剂中酸浓度有利于检出样品中低含量的无机砷，因此考察了酸的种类和浓度对海带中无机砷提取率和各种砷形态变化的影响。选用海带作为样品，是因为海带中含有较高浓度的未知有机砷unAs(#)，在等度测量时更易对As(V)造成干扰从

26、而影响最终的无机砷定量。3.3.1 不同浓度的酸对海带提取率的影响 实验中常用三强酸是盐酸(HCl)、硝酸(HNO3)和硫酸(H2SO4)，由于H2SO4的氧化性很强，并具有脱水性，易引起样品炭化，因此只比较了不同浓度的HCl或HNO3对海带样品的提取率。称取一定量的样品，分别采用不同浓度的HCl或HNO3为提取剂，置于70水浴下震摇提取2h，在不同酸浓度下三种海带样品的提取率如表3。由表3可知，当HCl浓度为0.6 mol/L时，海带的砷提取率均大于88.0%，甚至大部分可达90.0%以上，进一步增加HCl浓度并不会显著增加砷提取率，说明采用0.6mol/LHCl为提取剂，就可将绝大部分砷提

27、取到溶液态中。而当采用HNO3为提取剂时则与HCl完全不同，当HNO3浓度在0.141.4mol/L范围内时，随HNO3浓度的增加，提取率增加，当HNO3浓度为1.4 mol/L时，各种海带的砷提取率均大于90.0 %，甚至可达到95.0 %以上，这说明采用HNO3为提取剂时，其浓度必须高于1.4mol/L。3.3.2不同浓度的酸对海带提取液中砷形态的影响 采用酸提取可使样品中的砷形态发生变化，使得色谱图大大简化，从而简化无机砷的定量，研究了0.0246.0mol/L范围内的HCl以及0.0281.4mol/L范围内的HNO3在70水浴下震摇提取海带样品2h后的砷形态变化，结果示于图3。由图3

28、A可知，随HCl浓度的增加， unAs(#)+As(V)对应的峰高不断降低，在HCl浓度为1.2 mol/L时，达到最低点，并保持不变；由文献9可知，unAs(#)在酸性介质中会发生分解，而As(V)则没有变化，综合以上两点可知，此时unAs(#)已完全分解，残余的是As(V)所对应的峰。图3B是采用0.024 mol/L HCl提取海带得到的谱图，由图可知，在此条件下还存在大量unAs(#)，严重干扰As(V)的测定；而采用6.0 mol/L HCl提取可使unAs(#)完全分解不再干扰As(V)的测定，如图3C。unAs(#)+As(V)的峰高随HNO3浓度的增加的变化趋势与HCl的相似，

29、也是先降低而后基本不变，如图3D，由图3D可知当HNO3浓度大于0.35mol/L时，就可使未知有机砷unAs(#)完全降解，从而不影响As(V)的定量。综合考察提取率和提取液中形态的变化可知，1.4mol/L的HNO3才能保证采用等度法准确测得样品中无机砷含量，而采用HCl时，仅需1.2mol/L就可以达到相同效果；另一方面，NO3-在阴离子柱上保留极强，对柱效影响远大于Cl-，因此采用1.2 mol/L HCl提取样品显然是更好的选择。此外，实验表明采用1.2 mol/L HCl为提取剂时，提取温度高于60且提取时间大于1.5 h即可以使未知有机砷unAs(#)完全分解，考虑到样品之间的差

30、异，最终确定采用70水浴下震摇2h来提取样品中的无机砷。图3 不同浓度的酸提取海带的砷形态变化A， unAs(#)、As(V)的峰高和随HCl浓度的变化；B，0.024 mol/L HCl提取液谱图（稀释20倍）；C，6 mol/L HCl提取液谱图（稀释20倍）；D， unAs(#)、As(V)的峰高和随HNO3浓度变化Fig.3 Chromatogram of arsenic species in extracts of alga with different acid in different concentrationA，variability of the sum of peak h

31、eight of unAs(#) and As(V) with different HCl; B，chromatogram of arsenic species in extract of alga with 0.024 mol/L HCl（20 times dilution）;C，chromatogram of arsenic species in extract of alga with 6.0 mol/L HCl（20 times dilution）; D，variability of the sum of peak height of unAs(#) and As(V) with di

32、fferent HNO3表3 三种海带样品在不同酸浓度下的砷提取率Table 3 Extraction efficiencies with different acid in different concentration样品编号(No.)总砷值Total arsenic (mg/kg)提取率Extraction efficiency (%)HCl / mol/LHNO3 / mol/L0.61.23.06.00.140.350.71.4367.1297.296.095.585.541.359.271.690.7438.5893.791.982.181.612.320.652.897.2538

33、.6788.490.285.979.616.820.991.698.63.4 样品与提取剂的比例对提取率影响确定了提取剂和提取条件后，进一步考察了样品与提取剂的比例对提取率的影响，具体过程是：称取一定量的样品，采用1.2mol/L HCl为提取剂，在70水浴下震摇提取2h，样品量与提取剂比例对提取率影响结果列于表4。由表4的结果可知，当样品和1.2mol/L HCl比例在1/20到1/5 (g/mL)的范围内均有较高的提取率，可达90.0 %以上；而当样品和1.2mol/L HCl比例小于1/5 (g/mL)时，提取率有下降的趋势，这应该是由于干紫菜和干海带重量很轻，占用的体积较大，样品和1.

34、2 mol/L HCl比例过小时，不利于完全浸没样品造成的。此外，当样品量和1.2mol/L HCl比例为1/5 (g/mL)时，在70水浴下震摇提取2h后，可使未知有机砷unAs(#)完全降解，不会干扰到As(V)的定量，但此时的提取液非常粘稠，不易取出，这可以通过在70水浴下震摇提取2h后，在提取体系中补加水摇匀后再在70水浴下震摇提取1h来解决。表4 样品量与提取剂比例对提取率影响Table 4 Effect of the ratio of sample to extraction reagent on extraction efficiencies样品量：10%HClRatio of

35、sample to extraction reagent（g/ mL）提取率 extraction efficiency(%)1：2094.51：6.794.31：594.21：490.53.5 双氧水在溶液中的百分含量对As(III)的氧化作用 虽然采用1.2 mol/L HCl可将保留时间较长的未知有机砷unAs(#)完全降解，不干扰As(V)的定量，但还存在大量与As(III)重合的未知有机砷unAs(*)，严重干扰As(III)的准确定量，因此采用等度分离方法测定无机砷含量时，需在样品提取液中加入H2O2把As(III)氧化为 As(V)，最终通过对As(V)的定量得到样品中的无机砷含

36、量，通过考察H2O2对As(III)的氧化效率，来确定提取液中H2O2的百分含量。3.5.1 双氧水百分含量对As(III)标样的氧化配制一系列的溶液，使每个溶液中所含的As(III)的浓度均为100µg/L，双氧水在溶液中的百分含量依次为1%、3%、5%、7%、10%，所得溶液混匀后，在70水浴中恒温放置20min，取出冷却后，上形态分析仪测定，得到H2O2在溶液中的百分含量与As(III)被氧化效率的关系(列于表5中)。由表可知不同含量的H2O2对应的总无机砷的回收率均在93.0108.0%之间，说明H2O2氧化过程不产生砷损。另外，当H2O2在溶液中的百分含量高于3%时，As(

37、III)即可定量氧化为As(V)(氧化率>95%)，考虑到提取液中还含有一些还原性有机物，所以最终选定10%的H2O2作为氧化剂。表5 双氧水在溶液中的百分含量对100µg/L As(III)氧化效率的影响Table 5 Effect of the concentrations of peroxide in solution on oxidation efficienciesH2O2 /%As(III) /µg/LAs(V) /µg/LAs回收率Recovery(%)H2O2氧化效率Oxidation efficiency (%)15.787.593.287

38、.531.498.099.498.050107.2107.2107.270106.8106.8106.8100101.3101.3101.33.5.2 双氧水百分含量对提取液的氧化As(III) was added into the extractss to reach the concentration of 50µg/L. Then different ratio H2O2 (5%, 8%, 11%, 14%, 20% ) was added. The mixtures were placed in water bath at 70 for 20 min. After coole

39、d down, the solution was analyzed by SA-10. As shown in table 6, the recovery of As was in the range of 89.691.7%. It indicated that As(III) would be oxidized to As(V) quantificationally in the extracts when the ratio of H2O2 was higher than 10% (oxidation efficiency >95%). 10% H2O2 was selected

40、at last.Table 6 Effect of the concentrations of peroxide in extracts (5.8µg/L As(V) )H2O2 /%Spiked As(III)/ µg/LAs(V) /µg/LAs Recovery(%)55050.689.675049.787.8105051.791.7145051.690.6205051.591.43.6 DMA 和MMA在提取过程中的稳定性海藻中的主要砷形态AsS在强酸的作用下会转化为DMA8，为了证实DMA和MMA在酸提取条件下不会转化为无机砷，可以通过以下实验证明：分别

41、在酸液和海藻的酸提取液中加入一定量的DMA、MMA再重复一次酸提取及H2O2氧化的全过程，然后用原子荧光形态分析仪测量，测得结果示于表7中。由表7可知，无论是在酸液还是在样品的酸提取液中， DMA和MMA的加标回收率均在99.0108.0%之间，且未检测到无机砷含量的增加，说明DMA、MMA在酸提取及H2O2氧化的过程中不会转化为无机砷，不会干扰无机砷的定量测量。表7 DMA 和MMA在提取及氧化过程中的稳定性Table 7 Stability of the DMA and MMA during the extraction and oxidation procedure基体状态Sample

42、state无基体No Sample样品Sample加标砷形态Spiked arsenic speciesDMAMMADMAMMA加标浓度（最终溶液）Spiked(final sol.)(g/L)50505050回收率Spiked recovery(%)99.5107.9106.7105.33.7 紫菜样品的透析由于紫菜中的蛋白质含量很高，提取之后如直接进样，蛋白会吸附在色谱柱上，造成柱效下降，因此在紫菜样品提取液上柱之前需要除蛋白，本文采用透析法处理紫菜样品提取液，在透析之前用氨水中和提取液至pH=5，考查了透析时间（分别为1、2、3、4小时及过夜）对加标As(V)回收的影响，结果如表8所示。

43、结果显示透析时间在3小时以上，对As(V)的回收比较完全，在基体中，透析3小时之后，时间的增加对回收基本没有影响，因此透析时间采用3小时。表8 透析时间对As(V)回收率的影响Table 8 The affection of dialysis time to the recovery of As(V)基体状态 Sample state加标浓度Spiked (g/L)回收率 Spiked recovery(%)1小时 (1h)2小时(2h)3小时 (3h)4小时 (4h)过夜 (Overnight)无基体No sample10062.891.6105.4104.1113.8有基体 Sample1

44、0053.673.995.397.696.7根据以上实验结果，可以建立一种较为准确、方便的无机砷检测方法：称取经粉碎过的干样2.0g于25mL具塞刻度试管中，加入1.2mol/L HCl溶液10mL，混匀，在70水浴下恒温震摇2h，使样品被充分浸提。取出冷却，加水定容到25mL，再在70水浴下振摇1h。取出冷却，取10mL溶液在3200rpm下离心20min，在5mL离心管中加入1.0mL上清液和0.2mL H2O2后，用水稀释、定容到2mL，混匀后在70水浴下恒温氧化20min，取出冷却，所得溶液在3200rpm转速下离心20 min，上清液用0.45m滤膜过滤（紫菜样品经透析）后上原子荧光

45、形态分析仪等度测量，根据得到的As(V)含量算得样品中的无机砷含量。按照最小检出浓度定义：具有两倍噪声峰高所需的最低样品浓度(2·HN·c/H，其中HN是基线噪声； c是As(V)浓度；H是As(V)在相应浓度下的峰高)，算得As(V)的最小检出浓度为2.5g/L，即该方法的无机砷最小检出浓度为0.06 mg/kg。3.7 海藻样品中的无机砷含量采用建立的方法测量了一些常见海藻样品中的无机砷含量，结果示于表7中，其中样品614号为紫菜，样品3、5、1516号为海带，样品17为羊栖菜，样品18为裙带菜，样品19为红毛菜。由表7中结果可知，除羊栖菜无机砷含量达到了37.1mg/

46、kg外，其它海藻中无机砷含量均低于0.2mg/kg。羊栖菜和15号海带经处理后的谱图分别示于图4A和图4B中，从图4A看出，羊栖菜中有机砷和无机砷含量均很高；从图4B可知，15号海带中的无机砷很少，大量含有的是有机砷。另外，采用该方法对海藻样品中总砷的提取率都达到了80.0%以上，绝大部分可达85.0%以上，加标回收率都在75.0110.0%的范围之内，进一步说明采用此方法测量海藻中的无机砷是较为准确、可靠的。表7 一些海藻中无机砷的测定结果及加标回收率和提取率Table 7 Results of inorganic arsenic in different seaweeds样品编号(No.)

47、测得无机砷值Found inorganic arsenic (mg/kg) 加标浓度（最终溶液）Spiked (final sol.) (g/L)加标回收率Spiked recovery(%)提取液中总砷aArsenic in extract (mg/kg)样品中总砷bTotal arsenic (mg/kg)提取率 extraction efficiency(%)6a0.0845077.733.936.094.270.0925077.940.639.1103.880.0975079.240.842.795.690.07625100.814.616.389.6100.15125104.017.

48、219.886.9110.15325107.117.520.884.1120.1752597.020.320.0101.5130.2002599.215.116.591.5140.1552599.818.220.688.3150.1105091.556.260.393.23d5098.416.617.396.055080.434.838.690.2165082.535.438.791.51737.1031.3104.154.161.987.4180.09431.383.344.154.780.61931.386.638.448.080.0a 样品614号为紫菜；样品3、5、1516号为海带；样品17为羊栖菜；样品18为裙带菜；样品19为红毛菜。b 将提取液消解后测得的砷含量， c 将样品消解后测得的砷含量，d 未检出。a Sample 614 were lavers,