苏教微生物培养基一实用教案

1、微生物微生物包括包括(boku)哪五类：哪五类：特点：结构特点：结构(jigu)都相当简单都相当简单,多数个体十分微小多数个体十分微小(o.1mm)的生物的总称。的生物的总称。 通常要用光学显微镜或通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构(jigu).且体内一般不含有叶绿素且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作不能进行光合作用用. 原核原核 原生生物界真菌界病毒界真核第1页/共40页第一页，共40页。第2页/共40页第二页，共40页。病毒病毒(bngd) 第3页/共40页第三页，共40页。SARS病毒病毒(bngd) 禽禽流感病毒流感

2、病毒(bngd)第4页/共40页第四页，共40页。朊病毒(bngd)（蛋白质病毒(bngd)）第5页/共40页第五页，共40页。真菌真菌(zhnjn)第6页/共40页第六页，共40页。如图是酵母菌电子显微如图是酵母菌电子显微镜下的形态镜下的形态(xngti)结结构构酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌(mjn)青霉青霉第7页/共40页第七页，共40页。 了解有关培养基的基础知识，进行无菌了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术技术(jsh)的操作，进行微生物的培养。的操作，进行微生物的培养。 一、课题(kt)目标： 掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术板

3、划线法等基本操作技术(jsh)，熟练、规，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。范地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：二、课题重点和难点：三、技能目标：三、技能目标：第8页/共40页第八页，共40页。（2）按培养基的物理形态分：液体(yt)培养基半固体培养基固体培养基一一 基础知识基础知识:（3）按培养基的功能分： P12基础培养基选择(xunz)培养基鉴别培养基（1）按培养基的化学成分分：天然培养基合成培养基半合成培养基阅读课本P8第三段分别(fnbi)说出它们的优点、缺点。第9页/共40页第九页，共40页。 各种培养基的具体配方不同，

4、但一般都包括哪些成分？ 答：不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐等营养物质。 注： 另外(ln wi)还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 第10页/共40页第十页，共40页。第11页/共40页第十一页，共40页。二 无菌技术：无菌操作泛指(fn zh)在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。阅读P8-P9说出消毒(xio d)和灭菌有何不同？1 1、煮沸消毒法、煮沸消毒法:100:100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、

5、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学、化学(huxu)(huxu)药剂消毒法药剂消毒法: :用用75%75%酒酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒; ;氯气消毒水氯气消毒水源源4 4、紫外线消毒、紫外线消毒(1)常用消毒的方法：常用消毒的方法：第12页/共40页第十二页，共40页。1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌: :2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160-170 160-170 下加下加热热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气、高压蒸气(zhn q)(zhn q)灭菌：灭菌：100kPa100kPa

6、、121 121 下维持下维持15-30min.15-30min.(2)常用常用(chn yn)灭菌的方法：灭菌的方法：第13页/共40页第十三页，共40页。分类分类定义定义方法方法灭菌法灭菌法杀灭一切微生物杀灭一切微生物物理法：热力、辐射、微物理法：热力、辐射、微波、等离子体波、等离子体化学法：醛类、烷化剂化学法：醛类、烷化剂高效消高效消毒法毒法杀灭一切致病微杀灭一切致病微生物生物紫外线、含氯剂、臭氧、紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等复配剂等中效消中效消毒法毒法杀灭除芽孢外的杀灭除芽孢外的致病微生物致病微生物超声波、碘类、醇类、酚超声波、碘类、醇类、酚类类低效消低效消毒法毒法杀灭细菌繁殖体、杀

7、灭细菌繁殖体、亲脂病毒亲脂病毒单链季胺盐、双胍类、中单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子草药、金属离子第14页/共40页第十四页，共40页。常常识识 1 无菌技术包括： （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 清洁和消毒 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具(qj)进行 灭菌 ； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近 旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与 周围物品 相接触。 2 消毒方法： （1）日常生活经常用到的是 煮沸 消毒法； （2）对一些不耐高温的液体，则使用 巴氏 消毒法（作简要介绍）； （3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒 石炭酸或煤酚皂

8、 等溶液以增强消毒效果，然后使用 紫外线 进行物理消毒。 （4）实验操作者的双手使用 酒精 进行消毒； （5）饮水水源用 氯气 进行消毒。 3灭菌方法： （1）接种环、接种针、试管口等使用 灼烧 灭菌法； （2）玻璃器皿、金属用具等使用 干热 灭菌法，所用器械是 干热灭菌箱 ； （3）培养基、无菌水等使用 高压蒸汽 灭菌法，所用器械是 高压蒸汽灭菌锅 。 （4）表面灭菌和空气灭菌等使用 紫外线 灭菌法，所用器械是 紫外灯 。第15页/共40页第十五页，共40页。三、实验三、实验(shyn)操作操作 1.制备制备(zhbi)牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）菌）第1

9、6页/共40页第十六页，共40页。【补充(bchng)】培养基的配制原则： 目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。 营养要协调：培养基中各种( zhn)营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比41时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为31时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。 pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。第17页/共40页第十七页，共40页。1 1配制：计算、称量、熔化配制：计算、称量、熔化2 2调节调节pHpH：用：用3%3%的的HCI/NaOHHCI/NaOH调节调节 pH 7 pH 70- 70- 72 23 3

10、分装分装(fn zhun)(fn zhun)：分装：分装(fn zhun)(fn zhun)过过程中注意不要使培养基沾程中注意不要使培养基沾 在在 管口或瓶口上，以免沾污棉塞管口或瓶口上，以免沾污棉塞 而引起污染。分装而引起污染。分装(fn zhun)(fn zhun)三三角烧瓶的量角烧瓶的量 以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。4 4包扎：包扎：操作步骤操作步骤:第18页/共40页第十八页，共40页。 5 5灭菌灭菌: : 将将50ml50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上(si shn)(si shn)棉花塞，包上牛皮纸，再

11、放入高压蒸气灭棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为菌锅，在压力为100kPa100kPa、温度为、温度为121121，灭菌，灭菌151530min30min。 将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160160170 170 下灭菌下灭菌2h2h。 6 6倒平板倒平板: : 待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯附近倒平左右时，在酒精灯附近倒平板。板。2d2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种后观察平板，无杂菌污染才可用来接种. . 7 7无菌检查：无菌检查： 将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培养

12、的温室中培养24482448小小时，以检查灭菌是否彻底。时，以检查灭菌是否彻底。第19页/共40页第十九页，共40页。倒平板(pngbn):第20页/共40页第二十页，共40页。 1 1、临时保藏：、临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落养基，菌落(jnlu)(jnlu)长成后置长成后置于于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、长期保存：、长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法第21页/共40页第二十一页，共40页。1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才能左右时，才能用来倒平板。你用什么用来倒平板。你用什么(shn me)(shn me)办法来

13、估计培养基办法来估计培养基的温度？的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行(jnxng)倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。污染培养基。注意注意:第22页/共40页第二十二页，共40页。3.3.平板冷凝平板冷凝(lngnng)(lngnng)后，为什么要将平板倒后，为什么要将平板倒置？置？4.4.在倒平板的过程在倒平板的过程(guchng)(guchng)中，如果不小心中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部

14、位，这个平将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置(dozh)(dozh)，既可以使培养基表面的水分更好地挥，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养的培养基上滋生，因此

15、最好不要用这个平板培养微生物。微生物。第23页/共40页第二十三页，共40页。选择(xu(xunz)nz)培养基 加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养(z yn)型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞 加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基: 分离杂交瘤细胞第24页/共40页第二十四页，共40页。2 2、纯化、纯化(chn (chn hu)hu)大肠杆菌大肠杆菌: :接种方法接种方法(fngf)(fngf)有：有：平板划线法和稀释

16、涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法:通过接种环在琼脂(qingzh)固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面. 在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.第25页/共40页第二十五页，共40页。第26页/共40页第二十六页，共40页。划线划线(hu xin)后后 培养一培养一段时间后段时间后第27页/共40页第二十七页，共40页。第28页/共40页第二十八页，共40页。第29页/共40页第二十九页，共40页。 1. 1.为什么在操作为什么在操作(cozu)(cozu)的第一步以及每次划线之前的第一步以及每次划线之前都

17、要灼烧接种环？在划线操作都要灼烧接种环？在划线操作(cozu)(cozu)结束时，仍然需要结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作(cozu)的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作(cozu)者。第30页/共40页第三十页，共40页。 2. 2.在灼烧接种环之后在灼烧接种环

18、之后(zhhu)(zhhu)，为什么要等其冷，为什么要等其冷却后再进行划线？却后再进行划线？答：以免答：以免(ymin)(ymin)接种环温度太高，杀死菌种。接种环温度太高，杀死菌种。 3. 3.在作第二次以及其后的划线操作在作第二次以及其后的划线操作(cozu)(cozu)时，时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最

19、终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第31页/共40页第三十一页，共40页。四、课题四、课题(kt)成果评价成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种

20、操作本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。再次练习。 （三）是否进行了及时细致（三）是否进行了及时细致(xzh)(xzh)的观察与记录的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养

21、学生到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。良好的科学态度与习惯。第32页/共40页第三十二页，共40页。本课题本课题(kt)(kt)知识小结知识小结: :第33页/共40页第三十三页，共40页。【典例解析【典例解析(ji x)(ji x)】 例例1 1关微生物营养物质关微生物营养物质(wzh)(wzh)的叙述中，正确的是的叙述中，正确的是: :A.A.是碳源的物质是碳源的物质(wzh)(wzh)不可能同时是氮源不可能同时是氮源 B. B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D. D.无机氮源也能提供能

22、量无机氮源也能提供能量 解析解析(ji x)(ji x)：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于对微生物的具体情况分析。对于A A、B B选项，它的表达是不完整的。选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于源，也是能源，如蛋白胨。对于C C选项，除水以外的无机物种类繁选项，除

23、水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaClNaCl则只能提则只能提供无机盐。对于供无机盐。对于DD选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。答案：D第34页/共40页第三十四页，共40页。例例2 2下面下面(xi mian)(xi mian)对发酵工程中灭菌的理解不对发酵工程中灭菌的理解不正确的

24、是正确的是: :A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B. B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前答案(d n)：B 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A A说的是说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多(ddu)(ddu)是单一的纯种，是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中是错误的，因为灭菌

25、的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C C是正确的，因为是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。会把所接菌种也杀死。第35页/共40页第三十五页，共40页。编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMg

26、SO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml例例3 3右表是某微生物培养右表是某微生物培养(piyng)(piyng)基成分，请据此回基成分，请据此回答：答：（1 1）右表培养）右表培养(piyng)(piyng)基可培养基可培养(piyng)(piyng)的微生物的微生物类型是类型是 （2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养加入培养(piyng)(piyng)基中。基中。如不想浪费此培养如不想浪费此培养(piyng)(piyng)基，可再加基，可再加入入 . .用于培养用于培养(piyng) (piyng) 金黄金黄色葡萄球菌色葡萄球菌. . 自养自养(z