NY_T 2052 菜豆象检疫检测与鉴定方法

1、NY_T 2052 菜豆象检疫检测与鉴定方法B 15中华人民共和国农业行业标准NY /T 2052?2011菜豆象检疫检测与鉴定方法Detection and identification for Acanthoscelides obtectus Say2011-09-01 发布 2011-12-01实施中华人民共和国农业部 发布NY /T 2052?2011前 言本标准按照 GB / T 1.1?20 09 给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会 SAC / TC 271 归口。本标准起草单位:全国农业技术推广服务中心、广东省植物保

2、护总站、华南农业大学。本标准主要起草人:冯晓东、王琳、朱景全、陆永跃、李梅辉、刘慧、李小妮、曾玲、王玉玺。NY /T 2052?2011菜豆象检疫检测与鉴定方法1 范围本标准规定了菜豆象 Acanthoscelides obtectus Say 的检疫检测与鉴定方法。本标准适用于豆类生产及贮存、调运过程中对菜豆象的检疫检测与鉴定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB 15569 农业植物调运检疫规程3 原理3.1分类地位 菜豆象属鞘翅日 Coleop

3、tera ,豆象科 Bruchidae 。3.2 检测原理 菜豆象主要借助被侵染的豆粒进行传播。菜豆象形态特征参见附录 B 、附录 C 和附录 D ,分布、寄主范围和为害特征参见附录 E 。4 仪器、用具及试剂4.1 仪器、用具 仪器:生物显微镜、体视显微镜、测微尺、培养箱、农用软 X 光机、照相机等。 用具:玻璃瓶、白瓷盘、培养皿、镊子、小烧杯、酒精灯、微型解剖刀、解剖针、载玻片、盖玻片、吸管、吸水纸、滤纸、脱脂棉、纱布、指形管、小毛笔、记号笔、标签、各类孔径样品筛。4.2 试剂 食盐或硝酸铵、 0. 5% 氢氧化钠 NaOH 、 1% 碘化钾 KI 、 2% 碘酒、 70% 乙醇、无水酒精

4、、 10% 氢氧化钾 KOH 溶液或 10% 氢氧化钠 NaOH 溶液、酸性品红染色剂、植物油或机油 。5 检测5.1 产地检测5.1.1 检测范围 菜豆象寄主植物。5.1.2 检测时期 日均气温在 15 以上,豆类作物成熟中后期。5.1.3 取样方法2 在待检测地块内,随机选取 30 个样点,对每个样点进行 5 次扫网,每次扫网面积约为 0. 25 m ,每个样为采自 3 个样点扫网所获昆虫样本。 如需采集幼虫进行鉴定时,采用随机取样检查法,样点数量不少于 30 个点,每个点的面积为20. 25 m ,每个样为采自 3 个样点整株豆荚中的 500 g 豆类。5.2 调运检测1NY /T 20

5、52?20115.2.1 检测范围 豆类产品及其盛装、贮藏、运输的器具,豆类货物的堆放处。5.2.2 检测时期 豆类在仓库内储存或者调运期间,可常年检测。5.2.3 取样方法 仔细检查货物包装物外表、铺垫材料、车、船、集装箱的四壁、包装袋的边、角、缝隙等处,查看 是否有疑似菜豆象成虫或受害豆粒、蜕、排泄物等,如有则取成虫及受害豆粒。 抽取样品按 GB 15569 的相关规定进行。5.3 取样结果及记录 将取样获得的豆类置于样品采集袋内 , 将收集的疑似菜豆象成虫、幼虫、蛹、卵及蜕等 保存于相关容器中,注明采集时间、采集地点、采集人、寄主后,送实验室进一步培养、检测鉴定。 抽样记录于附录 A 中

6、的表 A . 1 。6 检查方法 根据实际 工 作条件,选择以下 1 种或 1 种以上方法,检查上述所抽样品是否有为害状或疑似菜豆象,并收集各虫态标本。6.1 肉眼检查 检查豆荚内腹线上是否有狭缝或小孔,狭缝或小孔内是否有卵。剥开豆荚检查是否有幼虫,仔细检查豆粒上是否有虫卵、豆粒上有无幼虫蛀入孔、有无 “ 小窗 ” 或羽化孔,查看有无幼虫、蛹或成虫。6.2 过筛检查 用黑色作 衬底,将检验样品放入 4 mm 圆孔样品筛内回旋过筛,观察筛下物。首先检查筛下物内有无成虫、卵和幼虫,然后用毛刷将筛下物扫入培养皿内,带回实验室内镜检。6.3 饲养检查 将 5.3 中抽样获得的豆类样品,放人 25 30

7、 、相对湿度 50% 70% 的培养箱内饲养观察,逐日观察是否有成虫出现。6.4 染色检验 白色或近白色的豆粒样品,用酸性品红染色法将虫蛀孔染成红色,被害豆粒种皮下如呈现羽化孔,可进一步检查豆粒内是否有老熟幼虫和蛹。染色检查过程可在以下两种方法中选择一种进行: 50 g样 品 样品筛或纱 布 1% KI 或 2% 碘酒 2 min 0.5% NaOH 0 .5 min l min 水洗 0.5 min 挑 出 表面有褐色到深褐色点的豆粒 镜检; 50 g 样品 样品筛 30 水 1 min 酸性品红2 min 水洗 0.5 min 挑出表面有粉红色小点的豆粒 镜检。 褐色、红色或其他深色豆粒样

8、品,不必进行染色检验。6.5 油脂检验 取过筛检验完的样品 500 g l 000 g ,分成每 50 g 一 组,放在浅盘内铺成一薄层,按 l g 豆粒用植物油或机油 1 m L l.5 m L 的比例,将油倒入豆粒内均匀浸润, 0.5 h 后检查。被油脂浸润的豆粒变成琥珀色,幼虫侵害处呈一小点,虫孔处种皮呈现透 明斑。再将有上述症状的豆粒挑出,带回实验室内镜检。 此法对白皮、黄皮、淡褐色皮的豆粒效果良好,对红皮豆粒效果较差。6.6 比重检验 使用不同盐类及浓度溶液,利用物理比重法将受蛀食豆粒与健康豆粒区分开来。方法是将 100 g样品倒入 18. 8% 食盐水或硝酸铵溶液中搅拌 10 s

9、15 s ,静止 1 min 2 min ,捞出浮豆,剖检被害豆粒。6.7 X 光检验2NY /T 2052?2011 用农用软 X 光机透视检验豆粒内有无幼虫、蛹或成虫。3NY /T 2052?20117 鉴定 将检查获得的各虫态标本置于体视显微镜下,观察是否符合附录 B 和附录 C 的鉴定特征。7.1 外部形态特征观察 将卵、幼虫和成虫置于体视显微镜下直接观察,描述外部形态特征并测量相关数据。7.2 内部解剖结构观察 将成虫若干头置于适量 10% 氢氧化钾 KOH 或 10% 氢氧化钠 NaOH 溶液中,水浴加热 3 min 5 min 后取出,置于体视显微镜下解剖,挑出完整的外生殖器制成

10、玻片,置于生物显微镜下观察形态特征,如 需永久保存则可参照有关昆虫外生殖器玻片制作方法制片。8 结果判定8.1 成虫、幼虫符合附录 C 所描述特征鉴定为菜豆象。鉴定结果填人附录 A 中的表 A.2 。8.2 如果样品为卵、蛹,且分别符合附录 C 所描述特征,需进一步抽取成虫、幼虫标本进行鉴定。9 档案保存 将采集到的菜豆象标本置于小塑料瓶中,加入 70% 乙醇后密封,并贴上标签。标签上注明采集时间、采集地点、寄主、采集人。 原始记录、标本和鉴定结果等材料妥善保存于植物检疫机构。4NY /T 2052?2011 附 录 A (规范性附录 )植物有害生物抽样调查和样本鉴定表A . 1 植物有害生物

11、批样调查记录见表 A. 1。表 A. 1 植物有害生物抽样调查记录表编号 生产(经营)者 地址及 联系人 调查日期 抽样地点 样品编号 植物名称 品种名称 植物生育期 调查株数或面积 植物来源 症状描述 发生原因及 防控情况 抽样方法、 部位、比例 备注抽样单位(章): 生产、经营单位(章):抽样人: 负责人:年 月 日 年 月 日 注:本单一式两联,第一联抽样单位留档,第二联交受检单位。5NY /T 2052?2011A . 2 植物有害生物样本鉴定报告见表 A. 2。表 A. 2 植物有害生物样本鉴定报告 编号 植物名称 品种名称 植物生育期 样品数量 取样部位 样品来源 送检日期 送检人

12、 送检单位 检测鉴定方法:检测鉴定结果:备注:鉴定人(签名):审核人(签名):鉴定单位(盖章):年 月 日 注:本单位一式三份,检测单位、受检单位和检疫机构 各一份。6NY /T 2052?20117NY /T 2052?2011 附 录 C (资料性附录) 菜豆象主要鉴定特征C . 1 豆象科的主要鉴定特征体表:体覆鳞片,鞘翅毛有白色、棕色,常形成斑纹,末端截形。 头部:头略伸长,复眼大,前缘强烈凹入。 触角:触角 11 节,锯齿状,栉齿状。 后足:后腿节常具尖齿,跗节 5 节,第 4 节小。C . 2 菜豆象的主要鉴定特征C . 2.1 成虫 体长 2.0 mm 4.5 mm ,长椭圆形

13、, 头、前胸背板及鞘翅表皮黑色,密披黄褐色毛,背面暗灰 色,仅鞘翅端部红褐色;腹板、臀板及足大部红褐色,仅局部黑色,密披白色毛,杂以黄色毛。头部长而宽,密布刻点,额中线光滑。触角 11 节 , 向后伸达肩部;基部 4 节丝状,第 5 节 10 节锯齿状,末节呈桃形,端部尖。基部4 节(有时也包括第 5 节基半部)及末节红褐色 , 其余节深褐色或黑色。前胸背板圆锥形,中区布刻点,端部及边缘刻点变小。小盾片黑色 , 方形 , 端部 2 裂,密布倒伏状黄色毛。鞘翅行纹深,行纹 3 、 4 及行纹 5 、 6 分别在基部靠近;近基部、近中部及近端部散布褐色毛斑。臀板隆起,被淡色毛。雄虫第 5 腹板后缘

14、明显凹人,雌虫稍 凹 入 。后足腿节端部与基部缢缩,呈梭形,中部约与后足基节等宽;腹面近端部有 1 长而尖的大齿 , 其后为 2 个(偶尔 3 个)小齿,大齿长度约为前 2 个小齿的 2 倍,约为后足胫节宽度 1.2 倍;后足胫节具前纵脊、前侧纵脊、侧纵脊及后纵脊 ; 后足胫节端部前的刺长约为第 1 跗节长的 1 / 6 。雄虫外生殖器的阳基侧突端部膨大,两侧突在基部 1 / 5 愈合;外阳茎瓣端部钝尖,两侧缘稍凹人;内阳茎有多数细的毛状骨化刺,向囊区方向骨化刺变大变稀,囊区 2 个骨化刺团。雌虫第八腹节背板呈狭梯形,基缘深凹,端部疏生少量刚毛,从背板基部两侧角向端缘方向有 两条近平行的骨化条

15、纹,第八腹节腹板呈 “ Y” 形。C . 2.2 幼虫 1 龄幼虫体长约 0.8 mm ,宽约 0.3 mm ,呈圆柱形,中胸及后胸最宽,向腹部渐细。头的两侧各有 1个小眼,位于上颚和触角之间。触角 1 节,基节有 1 个圆筒状突起向外倾斜,末节有 1 根长刚毛。前胸盾呈 “ x” 或 “ H” 形,上面着生齿突。第 8 、第 9 腹节背板具卵圆形的骨化板。足 2 节,第 1 节末端有刺 2根,第 2 节末端扁平,近各足的基部内侧有长刚毛 1 根;腹面着生小刺。 老熟幼虫体长 2.4 mm 3.5 mm , 体宽 1.6 mm 2.3 mm 。体粗壮,弯曲呈 “ C ” 形;足退化。上唇半圆形 , 密布小刺毛;前半部膜质,具刚毛 8 根,其中 6 根靠近前缘排成弧形 , 2 根位于中央稍后;后半部骨化 , 呈横椭圆形,每侧具刚毛 1 根。第 8 、第 9 腹节背板无骨化板。下唇略呈 i 角形,两侧门入,后缘后凸,下唇须缺如。