主要荧光素一览表之欧阳数创编

1、(1)荧光素类创作：欧阳数时间：2021.03.02Fluorescein标准荧光素(Reference standard) Z，在其基础上 进行结构改造，可产生一系列荧光素衍生物。Fluorescein 适用于 Argon-ion Laser 的 488nm 光谱 线，有相对高的荧光吸收，较好的荧光产率以及良好的水 溶性。标记蛋白时通常不会产生蛋白沉淀。与其他荧光素类衍生物一样，Fluorescein具有光淬 灭率高，pH敏感性强与发射波谱宽的缺点。主要应用于聚焦激光扫描微阵列(Confocal laser scanning microscopy)和流式细胞计应用(Flow cytometr

2、y)。FITC异硫氤酸荧光素，Fluorescein isothiocyanate,是 荧光素衍生物的一种，5-FITC较6-FITC更经常使用。FITC的异硫氧酸基能与氨基反应，可用于标记氨基修 饰DNA, 旦形成，产物极为稳定。适用于Argon-ion Laser 的 488nm 光谱线,Abs/Em=492/519nm (pH=9. 0)。与蛋白的结合力也强。FITC具有荧光素衍生物的普遍特性。在水屮易变坏， 不能长久保存。FITC-Oligo广泛用于杂交探针；FITC-多肽用于 Edman降解蛋白测序；FITC也经常被用于蛋白电泳检测（即使是毛细管电泳）和荧光能量激发转移测试。FAM竣

3、基荧光素，Carboxyfluorescein,是荧光素衍生物 的一种，5-FAM较6-FAM更经常使用。Carboxyfluorescein-5-succimidyl ester, 即 5-FAM （NHS）广泛存在于荧光标记试剂盒。与FITC相比，FAM与氨基反应更快，产物也更稳定，但 FITC结合蛋白的量更大且进程更易于控制。FAM也适用于Argon-ion Laser的488nm光谱线，Abs/Em=492/518nm （pH=9.0）,具有荧光素衍生物的普遍 特性，在水中稳定。5-FAM主要应用于DNA自动测序中，标记其中的 d/ddCTP （PE公司），也经常用于PCR产物定量，核

4、酸探 针等。TET四氯荧光素,Tetrachloro fluorescein,是荧光素衍 生物的一种。TET以及HEX均是在FAM基础上加以改进的，氯原子 使FAM的Abs与Em值都产生一定的红移，并在一定程度上 减弱了 pH敏感性。TET也适用于Argon-ion Laser激发光 源，Abs/Em=521/536nm。TET, HEX, FAM和TAMRA可配合用于DNA自动测序 屮，其中TET用于标记d/ddATP, HEX用于标记d/ddGTP或 d/ddATP （PE 公司）HEX六氯荧光素，Hexachloro fluorescein, 是荧光素衍 生物的一种。适用于Argon-i

5、on Laser激发光源，Abs/Em二535/556nm。（请参见 TET 介绍）JOE竣基-4', 5' -二氯-2', T -二甲氧基荧光素,Carboxv- 4', 5' dichloro-2, , T -dimethoxyf luorescein, 是荧光 素衍生物的一种，6-J0E更被广泛使用。JOE荧光产量高，pH敏感性弱，适合于标记蛋白。6- JOE也适合于Argon-ion Laser激发光源， Abs/Em=520/548 （pH=9. 0）常用于DNA自动测序，标记d/ddATP，也经常被用于 进行电泳检测与PCR产物定量。(2)

6、罗丹明类(Rhodamine dye)R 110 标准荧光素(Reference standard)之一，在其 基础上进行结构改造，即可产生一系列罗丹明类衍生物。与Fluorescein类衍生物相比，罗丹明类荧光素具有更强 的光稳定性，更高的荧光产量以及更低的pH敏感性 罗 丹明类荧光素极为适合于标记寡核甘酸，但蛋白会引起大 多数罗丹明类荧光素的荧光淬灭，故大多数不适宜用于标 记蛋白。R110被用于DNA自动测序。TAMRA全称竣基四甲基罗丹明，即Carboxytetramethylrhodamine,是罗丹明类荧光素衍生 物，6- TAMRA被广泛使用。TAMRA是少数几个能用于标记蛋白的，

7、6- TAMRA适用 于 Argon-ion Laser 激发光源，Abs/Em=547/573nm(Ph二8.0) , 6-TAMRA (NHS)常用于荧光标记试剂盒中。6- TAMRA主要用于DNA自动测序屮。Texas Red Texas Red是一个长波长荧光素，与Fluorescein几乎没有波谱重叠，只适合于Ar-Kr Laser的 568nm光谱线或HeNe Laser的594光谱线，比Tetramethylrhodamine 和 LissamineTM Rhodamine B 波长 更长，荧光量更高。Texas Red在荧光微阵列和流式细胞计中更被经常作为第三波长标记(Thir

8、d labels)。(3) B0DIPY 类B0DIPY类荧光素是由分子探针公司开发，以用来替代那 些有部分缺陷的传统荧光素，普遍具有荧光产量高，pH敏 感性低(无离子变化)，光稳定性强以及发射波谱窄的优 点，故B0DIPY类荧光素已被广泛用于核酸，脂肪酸，磷 脂以及各种受体。同时，由于在电泳过程屮对序列片段影 响小，故已被逐渐用于DNA自动测序。但相对而言，BODIPY类荧光素并不特别适合标记蛋白.BODIPY FL可代替 Fluorescein BODIPY R6G 可代替 Rhodamine 6G BODIPY TMR 可代替 Tetramethvlrhodamine BODIPY TR

9、 可代替Texas Red 这些BODIPY类荧光素具有与被替代 物几乎类似的光谱特征，能共用同样的光过滤器与激发光 源，但更具优点。(4) 其他荧光素Cascade blueCascade blue是在陀(pyrene)结构基础上改造得来 的，即sulfonated pyrene,它是一种短波长紫外激发荧光 素，与另一种常用的紫外荧光素Aminocoumarin相比,Cascade blue的Em与Fluorescein有更小的光谱重叠, 有更高的荧光吸收和更大的荧光产量.Cascade blue在 376nm处存在第二个吸收峰，水屮不稳定。Cascade blue主要用于标记蛋白，作为极性

10、示踪了(polar tracer)可进行膜蛋白定位等.但也能用于标记核酸 和葡聚糖。Aminocoumarin 一种短波长紫外激发荧光素， 通常使用的是7-amino-4-methylcoumarin,红移现彖明显, 比Cascade blue有更长的发射波长，肉眼观察明显，更适 用于 confocalo表1：主要荧光激发光源Excitation sourcePrincipal spectrum lines (nm)Mercury-arc Lamp366, 405, 436, 516, 578Xenonarc Lamp250*1000 (contmous)Tungsten-halogen La

11、mp350"1000 (continous)Cr：LiSAF Laser130Heliumcadmium Laser325,442Argon-ion Laser188,514Nd:YAG Laser532Helium-neon Laser543, 591, 633Krypton"ion Laser568,647表2：主要荧光素一览表DyeAbs/Em Max(nm)NotesAcridine orange500/526green fluorescence bound to DNA, and red shift to'650 upon association with

12、 RNA» useful for flowcytometryFAM192/518Most widely used green fluorescein, absorption overlaps the 488 nm spectral line of the argonion laser, prone to photobleaching, pH sensitive between pHis widely used for automated DNAsequencingFITC194/519Subject to argon"ion laser, widespread use fo

13、r hybridization, immunoreagent, protein sequencing and FRETHEX535/556pH insensitive, used for automated DNA sequencingJOE520/548Intermediate-wavelength spectra, important dye forautomated DNA sequencingLissamme rhodamine B570/590Optimal for 568 nm excitation photostable,used in confocal laser scanni

14、ng microscope easier to label protein than TMRPyrene310/378Excimer：470Long excited-state lifetime, spectral shifts due to excimer emission, used in protein comformation and oxygen sensorsROX570/590spectra between Lissamine rhodamine B and TexasRed, used in automated DNA sequencingTET521/536pH insens

15、itive, used for automated DNA sequencingTetramethylrhodamine555/580pH insensitive , photostable, Widely used for automated DXA sequencingTexas Red595/615Suited for the Ar*Kr 568nm and He"Ne 594nm spectra, brighter and lower background than other red dyes as third label, used in confocal laser s

16、canning microscopesDansyl Chloride372/NDEnvironmentally sensitive, large stokes shift forprotei sequencingDabcyl453/noneBroad absorption, no fluorescence, as a quenching group useful for fluorescence resonance energy transfer (FRET)CR-6G525/555Spectral between fluorescein andtetramethylrhodamine, good photostable, preferrednucleotide off proteinCascade Blue100/420Resistant to quenching upon protein conjugation,Water solubleBODIPY R6G528/547Substitute for rhodamine 6G, Useful for automatedDNA sequenc