消毒剂效力及有效期验证方案

1、WYETH PHARMACEUTICAL CO. LTD.惠氏制药有限公司Qualification of Disinfectant Effectiveness and StabilityTMP-07-077TEST METHOD VALIDATION PROTOCOL分析方法验证方案方案编号(版本号:):Protocol No. (Version:):(V: )TMP-07-077分析方法名称TEST METHOD:QUALIFICATION OF DISINFECTANT EFFECTIVENESSAND STABILITY消毒剂效力及有效期确认方案PROTOCOL APPROVAL PA

2、GE方案批准页PROTOCOL PREPARATION 方案准备WYETH PHARMACEUTICAL CO., LTD.惠氏制药有限公司SIGNATURE 签名DATE日期QC Microbial AnalystQC Microbial AnalystPROTOCOL REVIEW 方案复核QC Senior AnalystQC ManagerQAValidation OfficerPROTOCOL APPROVAL匕准Senior QO ManagerPROTOCOL REVISION HISTORY PAGE方案修订历史记录页REVISION NUMBER修订次数VERSION版本号R

3、EVISION CONTENT修订内容01Original 原稿1. 目的 PURPOSE 52. 范围 SCOPE 53. 引言 INTRODUCTION 54. 参考资料 REFENRENCE65. 验证方法 TEST METHOD65.1. 所用仪器和物料 65.2. 测试工作菌种65.3. 实验程序 66. 接受标准86.1. 消毒效力接受标准： 86.2. 中和效力控制及其接受标准： 8Page 5 of 81.目的 PURPOSE验证惠氏苏州工厂目前使用的几种消毒剂 Process LpHse:酸性、Process Vesphene se碱 性、Ethanol酒精溶液、快活溶液，在

4、不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、塑料门帘、墙面等不 同材质上的消毒效力，同时验证消毒剂的使用有效期。2.范围 SCOPE本验证需要验证的消毒剂有：Process LpHse:（酸性）、Process Vesphene H se:（碱性）、Ethanol酒精溶液、快活溶液 FORWARD disinfectant四种。表1:各消毒剂使用时涉及的材质消母剂适用对象所涉及的材质Process LpHse: 酸性酚类消毒剂 （广谱、中效）生产设备/器具/车间 地面、墙壁、天花板不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、 塑料门帘、墙向ProcessVespheneH se: 碱性酚类消毒剂 （广谱、中效）车间设备/器具/操

5、作 问地漏不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、 塑料门帘、墙向Ethanol酒精溶 液醇类消毒剂 （中效）生产设备/器具/微生 物实验室不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、 塑料门帘、墙向快活溶液季较盐类消毒 齐1J（彳氐效）车间地面、墙壁、天 花板/非控制区域、 车间公用区不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、 塑料门帘、墙向3. 弓 I言 INTRODUCTION本验证的原理是，在某种材质表面接种 0.1ml （10 4-105CFU）B菌种，室温下自然风干后, 将消毒剂直接喷在材质表面，等消毒剂作用一段时间后，检验没有被杀灭的细菌数；根据 细菌被杀灭的数量，来判断消毒剂的杀菌效果。实际消毒操作时，消毒剂喷到要消毒物体

6、表面后，再通过人为的涂擦等操作使消毒剂与物体表面充分接触，同时，此操作也会机械 去除掉一部分微生物。在该验证中，消毒剂是喷到材质表面，这种方法要比实际消毒时的 效果差，因此验证的结果更能体现实际的消毒效果。Qualification of Disinfectant Effectiveness and StabilityTMP-07-077WYETH PHARMACEUTICAL CO. LTD.惠氏制药有限公司4. 参考资料REFENRENCEDisinfectant Effectiveness Study (812-Analytical Report-0807-1.0)SOPTS-35(V5

7、)5. 验证方法TEST METHOD5.1. 所用仪器和物料所用培养皿、移液管、容器均在121度下灭菌30分钟后使用无菌一次性培养皿，移液管。生物安全柜(BHC-1300 n A/B 3生物安全柜)工作窗口吸入风速为 0.5m/s 灭菌锅培养箱(25度和32度各一个)5.2. 测试工作菌种大肠埃希菌(CMCC(B)44102)菌种斜面金黄色葡萄球菌 (CMCC(B)26003)菌种斜面白色念珠菌(CMCC98001)菌种斜面环境菌种科氏葡萄球菌斜面(六、九、十月环境检测沉降菌平板上连续检出科 氏葡萄球菌，特选此菌为环境菌种)需验证的消毒剂应质量合格并在有效期即将结束时开始验证试验，实验所用的

8、仪器设备均 在校正合格期限内。5.3. 实验程序5.3.1. 消毒剂的配置：消毒剂按照相关的程序进行稀释，配置好的消毒剂溶液储存在实际操作时使用 的喷壶中，在有效期内(7天)每天模拟日常使用方法使用，第 8天开始验证试 验。消毒剂配置方法及消毒反应时间见表 2.5.3.2. 材质的准备：所需的材质均是在实际操作中消毒剂所消毒的表面材质，准备的材质需为无菌材质，在实验过程中，每个实验组需 3块同种材质同时进行。Page 6 of 8WYETH PHARMACEUTICAL CO. LTD.惠氏制药有限公司Qualification of Disinfectant Effectiveness an

9、d StabilityTMP-07-077表2.消毒剂配置方法及消毒反应时间消母剂稀释比例反应时间菌种Process LpHse:酸性1:256(v/v)3,5,10minutes大肠埃希菌 金黄色葡锢球菌 白色念珠菌 科氏葡锢球菌Process Vesphen e se碱性1:128(v/v)3,5,10minutes大肠埃希菌 金黄色葡锢球菌 白色念珠菌 科氏葡锢球菌Ethanol酒精溶液75%2,3,5minutes大肠埃希菌 金黄色葡锢球菌 白色念珠菌 科氏葡锢球菌快活溶液1:10(v/v)3,5,10minutes大肠埃希菌 金黄色葡锢球菌 白色念珠菌 科氏葡锢球菌5.3.3. 菌悬

10、液的制备：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及环境菌种科氏葡萄球菌的营养 琼脂斜面培养物，接种至营养琼脂斜面上，在 35 37c培养20 22小时。再接 种上述菌种的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，在 35 37c培养18 24小时， 上述营养肉汤培养物用0.9%无菌生理盐水溶液逐级10倍稀释，制成每0.1 ml含 菌落数104-105CFU的菌悬液。5.3.4. 实验操作：准备3块待测表面材质于生物安全柜内，分别吸取 0.1 ml(104-105CFU)接种于3 块待测表面材质上，让其在生物安全柜中自然风干后待测，将配置好的的消毒 装入喷壶中，均匀地喷洒在材质的表面后立即开始计时，按表2

11、等计时结束后，迅速把该材质放入100ml的D/E中和液中，充分振荡1min后经0.45微米的 滤膜过滤，用100ml/次的D/E中和液冲洗3次，取滤膜放在D/E中和琼脂平板 上培养。培养条件：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及环境菌种科氏葡萄球菌在30-35C ,至少3天，重复以上实验操作3次，完成验证实验。5.3.5. 阴性控制实验：100ml的D/E中和液经0.45-micron的滤膜后，取滤膜放在 D/E中和琼脂平板上 培养，培养条件：细菌30-35C ,至少3天，5.3.6. 阳性控制实验：准备3块无菌的待测表面材质于生物安全柜内，分别吸取0.1 ml(10-100CFU)阳性菌

12、接种于3块待测表面材质上，让其在生物安全柜中自然风干后，将每种带 菌的材质放入100ml无菌的缓冲溶液中，充分振荡1min,经0.45微米的滤膜过 滤，用100ml/次的D/E中和液冲洗3次，取滤膜放置于D/E中和琼脂平板上培 养。培养条件：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及环境菌种科氏葡 萄球菌在30-35C ,至少3天。6.接受标准6.1. 消毒效力接受标准：计算Log Reduction,评价该种消毒剂对该菌种的杀灭效果，Log Reduction=Log(Average#of Organisms in Control Plates)-Log(Average# of Organisms in Test Plates)接受标准：Log Reduction136.2. 中和效力控制及其接受标准：吸5ml已配制好的消毒剂，经0.45微米的滤膜过滤后，用100ml/次中和液冲洗3次，加入1ml菌悬液(10-100cfu)置滤膜上，用100ml/次中和7冲洗1次，取 滤膜放在D/E中和琼脂平板上培养，计数。每种菌重复做3份样品。分别取上述菌悬液1ml (10-100cfu)置100*