动物细胞融合单克隆抗体

1、 植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图“太空婚礼”植物科研项目计划书项目项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交原理原理融合前处理融合前处理促融方法促融方法用途用途过过程程第一步第一步第二步第二步第三步第三步第四步第四步细胞膜的流动性、细胞的全能性酶解法去壁物理法化学法原生质体的制备原生质体的融合与筛选杂种细胞的形成与培养杂种植株的鉴定与筛选克服远缘杂交不亲和获得具优良性状的杂种植株同核体同核体异核体（杂交细胞）人工诱导还有3个3个以上细胞的融合-元贝驾考 http:/ 元贝驾考2016科目一 科目四金手指考试 http:/ 金手指驾驶员考试物

2、理法 的融合效率较高,且对细胞（原生质体）的伤害小,易操作、控制和观察。太空中处于失重状态，不同种细胞（原生质体）更容易亲近；为什么在太空中细胞（原生质体）融合率会大大上升？为什么选用物理法诱导？请同学们阅读课本P52动物细胞融合内容问题：什么是动物细胞融合？它相当于植物体细胞杂交过程的哪一步？它们的过程、基本原理、诱导融合方法和意义是否相同？ 1.1动物细胞融合过程、原理与诱导方法 为什么灭活的病毒能作诱导剂？灭活丧失感染性保留融合活性1.1动物细胞融合过程、原理与诱导方法鼠B淋巴细胞鼠骨髓瘤细胞人工诱导1.2动物细胞融合的概念杂交瘤细胞 动物细胞融合（技术）：是指（在一定的条件下）两个或多

3、个细胞融合形成一个单核细胞的过程。1.3动物细胞融合技术的意义和应用问题：抗体由什么细胞产生？其化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？2.1单克隆抗体的概念 一个天然抗原物质可有多种和多个决定簇。教材中所说的抗原分子刺激淋巴细胞，说的也就是抗原决定簇刺激B淋巴细胞，使其分裂分化出特异性的效应B细胞，分泌特异性抗体。抗体的传统生产方法从血清中分离抗体该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。多种效应B细胞动物体内多种抗体抗原 读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个

4、B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。2.1单克隆抗体的概念单: 单个细胞 克隆: 无性繁殖单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性强的抗体提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示3：从诱变育种、基因工程、细胞工程等角度有哪些可能的设计思路？问题：如何大量生产单克隆抗体？2.2单克隆抗体的制备一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量繁殖的细胞 实验目的实验目的: :

5、制备单克隆抗体制备单克隆抗体. . 实验原理：实验原理： 实验过程：实验过程：2.2单克隆抗体的制备 看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？ 描述单克隆抗体制备过程步骤注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基 筛选1专一抗体检测克隆化单克隆抗体有限稀释法培养 筛选21.注射抗原的目的是什么？注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基 筛选1专一抗体检测克隆化单克隆抗体有限稀释法培养 筛选22.诱导细胞融合的手段有哪些？注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基

6、筛选1专一抗体检测克隆化单克隆抗体有限稀释法培养 筛选23.若细胞两两融合后，有几种融合情况？注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基 筛选1专一抗体检测克隆化单克隆抗体有限稀释法培养 筛选24.第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？5.实际操作中如何经过两次筛选获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞？ 有限稀释法稀释多次稀释将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。常用的方法有：酶联免疫吸附试验和免疫荧光测定。问题：单克隆抗体的突出优点是什么？特异性强、灵敏度高 克隆单个杂交瘤细胞，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。2.3单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用诊断试

7、剂最广泛应用准确、高效、简易、快速 (“生物导弹” 单抗导向，药物为弹头)现在你能主持“太空婚礼”动物科研项目了吗？比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备原理原理融合前处理融合前处理促融方法促融方法用途用途过过程程第一步第一步第二步第二步第三步第三步第四步第四步细胞膜的流动性、细胞的全能性膜的流动性、细胞增殖酶解法去壁小鼠免疫处理、细胞分散物理法化学法物理、化学、生物法原生质体的制备融合亲本细胞的准备原生质体的融合与筛选动物细胞融合与两次筛选杂种细胞的形成与培养产特定抗体的杂交瘤细胞培养杂种植株的鉴定单克隆抗体的分离提纯单抗有助于疾病的诊断、治疗、预防获得

8、具优良性状的杂种植株课后作业课后作业 通过报刊、杂志、互联网或其他媒体搜集资料，了解细胞融合技术与单克隆抗体的新进展，就自己感兴趣的领域，自定选题，写一篇综述报告。参考选题：1、1984年诺贝尔生理学或医学奖2、单克隆抗体的种类；3、单克隆抗体与疾病诊断；4、生物导弹；物理法 的融合效率较高,且对细胞（原生质体）的伤害小,易操作、控制和观察。太空中处于失重状态，不同种细胞（原生质体）更容易亲近；为什么在太空中细胞（原生质体）融合率会大大上升？为什么选用物理法诱导？1.1动物细胞融合过程、原理与诱导方法 为什么灭活的病毒能作诱导剂？灭活丧失感染性保留融合活性抗体的传统生产方法从血清中分离抗体该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。多种效应B细胞动物体内多种抗体抗原 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆