斯普瑞达SPRIDA对SMMC7721肝癌细胞生长和粘附功能的影响

1、文档收集于互联网，已重新整理排版.word版本可编借，有帮助欢迎下载支持.文档收集于互联网，已重新整理排版.word版本可编借，有帮助欢迎下载支持.斯普瑞达(SPRIDA)对SMMC-7721肝癌细胞生长和粘附功能的影响作者：刘培勋，周则卫，徐文清，刘晓秋，刘正明，李松年【摘要】目的 使用SMMC-7721肝癌细胞株对SPRIDA-A、SPRIDA- B和SPRIDA-A+SPRIDA-B体外抑制肿瘤生长和粘附功能进行研究。方法 采用 MTT 比色分析法观察 SPRIDA-A SPRIDA-B、SPRIDA-A+SPRIDA-B 对SfflC-7721肝癌细胞生长和粘附功能的影响，测定其生长抑

2、制率和粘 附抑制率结果SPRIDA-A对SMMC-7721肝癌细胞生长抑制作用不明显， SPRIDA-B和SPRIDA-A+SPRIDA-B对肝癌细胞生长有明显抑制作 用，并 呈剂量依赖关系；SPRIDA-B对SMMC-7721肝癌细胞粘附功能有 明显抑 制作用，并呈剂量依赖关系。SPRIDA-B作用于SMMC-7721肝癌细胞后， 可见明显的凋亡细胞形态出现。结论SPRIDA-B对SMMC-7721肝癌细胞 生长和粘附功能有明显抑制作用，并可诱导细胞凋亡，是一个极具研究 价值的抗肿瘤及抗转移的新药。【关键词】SPRIDA-A ; SPRIDA-B ;肝癌细胞；转移；粘附；凋亡 Effects

3、 of SPRIDA on growth and adhesion of hepatoma cell SMMC-7721Abstract Objective Study on SPRIDA-A, SPRIDA-B and SPRIDA-A+SPRIDA B inhibit growth and adhesion of tumor in vitro by using hepatoma cell line SMMC-7721. Methods MTT was used to investigate the effect of SPRIDA-A, SPRIDA-B, SPRIDA- A+SPRIDA

4、 Bon growth and adhesion of hepatoma cell SMMC-7721, and detect the inhibition rate of growth and adhesion. Results SPRIDA-A could not obviously inhibit the growth of hepatoma cell SMMC- 7721 , SPRIDA-B and SPRIDA-A+SPRIDA-B could obviously inhibit the growth and adhesion of hepatoma cell SMMC-7721

5、in a dose dependent manner It was clear that SPRIDA-B could induce the apoptosis of the cells, when it was used on hepatoma cell SMMC-7721. Conclusion SPRIDA-B that could obviously inhibit the growth and adhesion of hepatoma cell SMMC-7721 and induce the apoptosis of the cells, was an antitumor and

6、antimetastasis drug with remarkable value for study.Key words SPRIDAA ; SPRIDA-B ; hepatoma cell ; metastasis ; adhesion ; apoptosis苦豆子Sophor alopecuroides L为豆科槐属植物，在我国西北地 区分布广泛。我们从其全草中提取、分离得到生物碱I,并经半合成、纯 化制备得 SPRIDA-A 和 SPRIDA-B, SPRIDA-A 和 SPRIDA-B 为同分 异 构体。SPRIDA-A为人工构型，SPRIDA-B为天然构型。两者由于构型 不 同，生

7、物活性也可能不同，为了验证其体外抗肿瘤和抗肿瘤转移作 用， 我们利用SMMC-7721肝癌细胞进行了其体外抗肿瘤及抗转移作用的研究 13 1材料与方法 1. 1材料1. 1. 1药物SPRIDA-A、SPRIDA-B,均为白色固体粉末，引吸湿性 强，溶于水，纯度大于95%,由木实验室自制。1. L2主要试剂RPMI-60培养基、小牛血清、胰蛋白酶、MTT、二 甲基亚砚(DMSO)购于中国医学科学院血液学研究所，ECMGEL购自sigma 公司。1. 1.3细胞系SMMC-7721肝癌细胞株，购于中国医学科学院基 础 医学研究所。1. 2方法1. 2. 1细胞培养SMMC-7721肝癌细胞常规培

8、养于10%小牛血清、 100U/ml青霉素及100U/ml链霉素的RPMI-60培养基中，置于37 C C02 培养箱内培养，23d传代1次，以维持细胞处于对数成长期。1.2.2 SPRIDA-A SPRIDA-B SPRIDA-A+SPRIDA-B 对 SMMC- 7721 肝癌细胞生长的影响采用唾哇氮蓝(MTT)比色分析法。将对数生长 期细胞接种于96孔培养板，细胞浓度为8X104/mL每孔0. 2nd,将 SPRIDA-As SPRIDA-B. SPRIDA-A+SPRIDA-B 与细胞共培养 24h,加 150 UI DMSO,全自动酶标仪测定波长490nm光密度(A)值，每孔设6个复

9、孔。 试验重复三次，计算各组均值。试验组按下式计算细胞生长抑制率：生长抑制率(%):(1-试验组A值/对照组A) X 100%1. 2. 3 SPRIDA-A、SPRIDA-B 对 SMMC-7721 肝癌细胞粘附功能 的影响采用唾哩氮蓝(MTT)比色分析法96孔板每孔中分别铺上ECMCEL 各50ul, 4 C过夜。加入1 %BSA150 u 1/孔，37 C孵箱内孵育2h,倒 置沥干。9002与细胞共培养24h,调节细胞浓度为8X104/ml,每孔 加0.2ml,吸附lh,用无血清培养液洗2次，加入200 U 1完全培养液，加 MTT20U1/孔,37。C孵箱内孵育4h,加DMS0150

10、u 1/孔。全自动酶 标仪 测定波长490nni的光密度(A)值，每孔设4个复孔，试验重复二次，计 算粘附抑制率：粘附抑制率()=(1-加药组A值/未加药组A值)X 100%1. 2. 4 SPRIDA-A、SPRIDA-B对SWC-7721肝癌细胞形态的影响 将对数生长期细胞接种于预先置有盖玻片的6孔培养板内，细胞浓度 为 8X104/ml,每孔 2nd, SPRIDA-A、SPRIDA-B 终浓度分别为 3. 7879 X10-4mol/L. 1. 1364X10-3mol/L、2. 2727X 10-3mol/L 与细胞共培 养24h,取出盖玻片，Ciemsa染色后光镜下进行细胞形态学观

11、察4, 5o2试验结果2. 1 SPRIDA-A、SPRIDA-B单用SWC-7721肝癌细胞的生长抑制作 用见表1。表1 SPRIDA-A. SPRIDA-B单用SMMC-7721肝癌细胞的生长抑制 作用由表1可见，SPRIDA-B对SmC-7221肝癌细胞生长的抑制作用 大 于SPRIDA-Ao随着SPRIDA-B药物浓度增大，抑制率也明显增加，并呈 剂量依赖关系。当药物浓度为1. 1364X10-3mol/L时，抑制率可达60%o 两组比较,差异有显著性(P<；0. 05)o2. 2 SPRIDA-B SPRIDA-A+SPRIDA-B 对 SMMC-7221 肝癌细胞的 生长抑制作

12、用见表2。表 2 SPRIDA-B、SPRIDA-A+SPRIDA-B 对 SMMC-7221 肝癌细胞的 生长抑制作用由表 2 可见，SPRIDA-B, SPRIDA-A+SPRIDA-B 对 SMMC-7221 肝 癌 细胞的生长均有抑制作用，并呈剂量依赖关系，但在同一剂量条件下 相比，SPRIDA-A+SPRIDA-B对SMMC-7221肝癌细胞的生长抑制作用更加 明显，但两组比较，P0. 05,差异无显著性。2. 3 SPRIDA-A, SPRIDA-B, SPRIDA-A+SPRIDA-B 对 SMMC-7221 肝癌细胞的生长抑制作用见表3。表 3 SPRIDA-A, SPRIDA

13、-B, SPRIDA-A+SPRIDA-B 对 SMMC-7221 肝癌细胞的生长抑制作用由表3可见，SPRIDA-A对SMC-7221肝癌细胞生长抑制作用不 明 显，而SPRIDA+SPRIDA-B和SPRIDA-B对SMMC-7221肝癌细胞生长均 有 明显的抑制作用，并呈剂量依赖关系。当药物浓度为1. 1364X 10-3mol/L 时，抑制率 SPRIDA-B 为 54%, SPRIDA+SPRIDA-B 为 64%。但组间比 较，差异无显著性（P0. 05）o2. 4 SPRIDA-A SPRIDA-B对SMMC-7221肝癌细胞粘附功能的影 响 见表4 粘附能力是癌细胞侵蚀的始动步

14、骤，高侵袭的肿瘤细胞与基底膜成 分的异质性粘附能力通常增高，而肿瘤细胞间的同质性粘附能力则 会下 降。粘附试验表明，20min即可见SPRIDA-A组成部分细胞贴壁粘附，而 SPRIDA-B组细胞仍处于圆形的悬浮状态。在本试验剂量范围内，SPRIDA-A对肝癌细胞的粘附功能没有明显影响oSPRIDA-B对肝癌细胞的 粘附功能有明显抑制作用，并呈剂量依赖关系。当SPRIDA-B药物浓度为 3. 7879X 10-4mol/L. 1. 1364 X 10-3mol/L、2. 2727 X 10-3mol/L 时，粘附抑制率分别为68%、90%、77%,与SPRIDA-A相比差异有显著性 (P<

15、；005) o2. 5 SPRIDA-B.环磷酰胺对SMMC-7221肝癌细胞的生长抑制作用 见表5 表4 SPRIDA-A. SPRIDA-B对SMMC-7221肝癌细胞粘附功能的影 响 表5 SPRIDA-B.环磷酰胺对SMC-7221肝癌细胞的生长抑制作用在木试验剂量范围内环磷酰胺对SMMC-7221肝癌细胞的增值作用 不明显。而SPRIDA-B对SMMC-7221肝癌细胞有明显抑制作用，并呈 剂 量依赖关系。当SPRIDA-B药物浓度为4. 3030X10-3mol/L时，抑制 率 可达67%。但两组相比，P0. 05,差异无显著性。2. 6 SWC-7221肝癌细胞的形态学观察观察不

16、同浓度的SPRIDA-A、 SPRIDA-B作用于SMMC-7221细胞24h后发现，SPRIDA-A组细胞形态 大而有规则，核质比大，染色质深而致密，并且视野中细 胞数目很多， 而SPRIDA-B组细胞稀疏，数目少，形态不规则，有的呈梭形，有的呈圆 形，核质比大，染色质较疏松。当SPRIDA-B浓度为1. 1364X10-3mol/L 时，可见有明显的凋亡细胞形态出现；细胞体积 明显变小，薄膜皱缩， 胞核固缩，染色质浓染，有的细胞表现为核碎 裂，个别细胞部分胞浆崩 解为碎片状，可见由膜裹内容物的所谓凋亡小体形成。3结论试验结果表明：（1） SPRIDA-A单用对SMMC-7221肝癌细胞的生

17、长 抑制作用不明显。（2） SPRIDA-B单用对SWC-7221肝癌细胞的生长抑制 有明显作用，随着SPRIDA-B药物浓度增大，抑制率也明显增加，并呈剂 量依赖关系，与SPRIDA-A相比,两组间相比,P<；O. 05,差异 具有显著 性。（3） SPRIDA-A+SPRIDA-B对SMMC-7221肝癌细胞生长有明 显的抑 制作用，并呈剂量依赖关系。与SPRIDA-B单用相比,P0. 05,两组间差 异无显著性。（4）粘附试验表明，SPRIDA-A对肝癌细胞的粘附功能没 有明显影响，SPRIDA-B对肝癌细胞的粘附功能有明显抑制作用，并呈剂 量依赖关系。与SPRIDA-A相比差异有显

18、著性（P<；O. 05） o （5）在 试验剂量范围内，环磷酰胺对SWC-7221的抑制作用不明显，而SPRIDA- B对SMMC-7221肝癌细胞有明显抑制作用，并呈剂量依赖关系。但两组 相比，P0. 05,差异无显著性。（6）不同浓度的SPRIDA-A作用 于SfflC- 7221肝癌细胞后，细胞形态大而规则，核质比小，染色质深而致密，并 且视野中细胞数目很多。而SPRIDA-B组细胞稀疏，数目少，形态不规则， 核质比大，染色质较疏松。当SPRIDA-B浓度为1. 1364 X 10-3mol/L 时，可见明显的凋亡细胞形态出现。4讨论SPRIDA-A与SPRIDA-B由于立体结构不同，可能表现为不同的生物 活性，试验结果证实了这一点。可能与底物与受体作用有关。因为 从结 构上讲，SPRIDA-A具刚性，而SPRIDA-B具柔性，SPRIDA-B易与受体作 用。所以SPRIDA-B活性更强。SPRIDA-B不仅对SMMC-7221肝癌细胞生长有明显的抑制作用，而 且对其粘附功能也有明显抑制作用，并可诱导细胞凋亡，从而影响肿瘤 细胞的侵袭和转移，SPRIDA-B是一个很有开发价值的抗肿瘤及抗转移药 物，值得深入研究。【参考文献】1卫生部新药(西药)临床前研究指导原则汇编(药学、药理学、 毒理学).1993, 137.2周则卫，刘培