生化实验报告1

1、生物化学实验报告姓 名： 王泽鑫 学 号： 3130060024 专业年级： 2013级中药学 组 别： 第三实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称 氨基酸的薄层层析实验日期2014-12-6实验地点第三实验室合作者谢俊伟指导老师冀开元评分91教师签名冀开元批改日期2015/1/12一、实验目的 掌握薄层层析法的一般原理。 掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。 掌握如何根据移动速率（Rf值）来鉴定被分离的物质（即氨基酸混合液）。二、实验原理 1.薄层层析法是色谱分析技术的一种。硅胶吸附薄层层析是使用层析用硅胶作为吸附剂，它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基（SiOH），这种极性的硅

2、醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附.2. 氨基酸与茚三酮的显色反应 茚三酮水化后生成水化茚三酮，它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、氨及醛，与此同时，还原茚三酮又与氨及茚三酮缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。3.混合氨基酸被分离后在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率Rf值来表示。 层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。三、材料与方法：以流程图示意材料： 层析板、尺子、铅笔、烧杯、玻棒、量筒、吹风机、毛细管、层析缸、药匙、烘箱 甘氨酸溶液、丙氨酸溶液、精氨

3、酸溶液、混合氨基酸溶液、0.5%羟甲基纤维素钠、硅胶、展开-显色剂方法：制备层析板：调浆：称取硅胶3克于烧杯中，加入0.5%的羧甲基纤维素钠8ml，调 成均匀的糊状。涂布：取洁净干燥玻璃板用玻璃棒均匀涂层干燥：将玻璃板水平放置，在室温下自然干燥活化：70烘干30min。切断电源，待玻璃板不烫手取出。点样：取点：在玻板上，用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点。每个样品间相距约1cm。取样：用毛细管分别吸取氨基酸溶液，取样量为毛细管柱高5cm。点样：点样毛细管轻轻接触薄层表面点样，轻触疾起。加样后原点扩散直径不超过2mm。展层、显色：将薄层板点样端浸入展层-显色剂，展层-显色剂液面应低于点样线

4、。盖好层析缸盖，上行展层。当展层剂前沿离薄板顶端2cm时，停止展层，取出薄板，用铅笔描出溶剂前沿界线，用热风吹干或在85下烘干，即可显出各层斑点。计算结果：Rf=氨基酸斑点至原点距离溶剂前缘至原点距离小心量出斑点中心至原点中心距离，再量出原点中心至溶剂前沿的距离，计算出它们的 值。 根据值，鉴定出混合样品中氨基酸的种类。四、结果与讨论：结果：实验数据、现象、图谱；讨论：以结果为基础的逻辑推论，并得出结论。结果：实验数据（单位cm）：样品 斑点-原点 溶剂前缘-原点 Rf值Arg 2.70 5.30 0.509Gly 1.50 5.30 0.283Ala 2.30 5.30 0.434混合液 1

5、.50、2.40、2.80 5.30 0.283、0.452、0.528实验现象：1.制备层析板，如图1：图12.点样如图2：图 13.层析如图3：图34.显色如图4：讨论：根据各显色点Rf值比较，可得下表：显色点 Rf值 对应氨基酸丙氨酸 0.509 精氨酸 0.283 甘氨酸 0.434 混合点1 0.283 精氨酸混合点2 0.452 甘氨酸混合点3 0.528 丙氨酸在实验结果中，混合液出现三个显色点，分别对应精氨酸、甘氨酸、丙氨酸。实验数据可以看出混合液中三种氨基酸Rf值不等于实验测定值，其原因有： 实验制备的层析板涂布不均匀，表面粘合剂有凹凸，导致层析时展开显色剂在层析板展开不均匀，一定程度上影响实验数据的测定，造成实验误差； 层析