血型鉴定操作规程

1、血型鉴定操作规程一.玻片法（仅适用于正定型）1 .原理：1.1 根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为 A型、 B型、AB型和。型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定 ABO血型。1.2 根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分 RhD阳性和RhD阳 性。2标本采集：用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况 下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反 定型试验可采集末梢血。3 .标本运送与储存：采集好的标本与申请单同期尽快（一般 2小时内）送往输血科。标本采集后 和检测后，应置于28c环境下。检

2、测后的标本应至少保存 7天，以备结果查 对。4 .仪器与材料：抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、 RhD （IgM）血型定型试剂（单克隆 抗体）、载玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。5 .操作步骤：5.1 用标记笔在载玻片上划分成 A、B、D三个区域；5.2 在标记好的玻片上分别加1滴抗-A、抗-B和抗-D血型定型试剂；5.3 再各加1滴10%患者红细胞悬液（该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可 以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞）；5.4 用干净的搅拌棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物均匀涂开， 使其覆盖大约直径20mm的面积；5.5 缓慢连倾斜摇动玻片1-2min,观察结果并记录

3、。6 .结果判定：6.1 凝集或发生溶血为阳性结果；6.2 细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果；6.3 对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。二、纸板法1 .原理：1.1 根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为 A型、 B型、AB型和。型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定 ABO血型正定型。A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。用已知的 A、B细胞检测被检者血清中有无相应的抗-A或抗-B抗体，即反定型。综合正反 定型结果确定受检标本 ABO血型。1.2 根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分 RhD阳性和RhD阳 性。

4、2标本采集：用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况 下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，可采集末梢 血。3 .标本运送与储存：采集好的标本与申请单同期尽快（一般 2小时内）送往输血科。标本采集后 和检测后，应置于28c环境下储存。检测后的标本应至少保存 7天，以备结果 查对。4 .仪器与材料：抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD （IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）、血型鉴定专用纸板、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。5 .操作步骤：5.1 取洁净五孔血型鉴定专用纸板，做好姓名标记；5.2 按纸板标识向每孔中分别加入相应试剂抗 A、抗B

5、、抗D血清各1滴以 及受检者血清各2滴；5.3 各孔中分别加入受检者红细胞适量及相应所需3-5%A型、B型试剂红细胞（自制或商品化试剂）并搅匀，使其覆盖直径15-20mm的面积；5.4 轻轻旋转摇晃混匀，直到形成均匀的细胞悬液或凝集块，边摇边观察；5.5 3min以上记录结果。记录观察到的凝集程度或溶血程度。6 .结果判定：6.1 凝集或发生溶血为阳性结果；6.2 细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果；6.3 对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。三、试管法1 .原理：1.1 根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为 A型、 B型、AB型和。型。根据抗-A和抗-

6、B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定 ABO血型正定型。A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。用已知的 A、B细胞检测被检者血清中有无相应的抗-A或抗-B抗体，即反定型。综合正反 定型结果确定受检标本 ABO血型。1.2 根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分 RhD阳性和RhD阳 性。2标本采集：用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况 下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反 定型试验可采集末梢血。3 .标本运送与储存：采集好的标本与申请单同期尽快（一般 2小时内）送往输血科。标本采集后 和检测后，应置于28c环境

7、下储存。检测后的标本应至少保存 7天，以备结果 查对。4 .仪器与材料：抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD （IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）、一次性试管、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。5 .操作步骤：5.1 ABO血型正定型试验取两支洁净试管，做好标记，按试管标记向试管中加入抗 -A、抗-B血清各1 滴；向每管中各加入1滴3-5%被检红细胞盐水（血清或血浆）悬液；轻轻混合试管内容物，1000g离心15s;结果判断：将试管拿成锐角，缓慢倾斜，使液体通过细胞扣，当细胞不再 附着在试管上时，继续缓慢地倾斜和振摇，直到形成均匀的细胞悬液或凝集 块；记录结果：记录观察到的凝集程度或溶血程

8、度。用 ABO反定型实验进一步 验证正定型结果。5.2 ABO血型反定型试验取两支洁净试管，做好标记，向每管中各加 2滴被检血清（或血浆）；按试管标记向试管中加入3-5%A型、B型试剂红细胞各1滴；轻轻混合试管内容物，1000g离心15s;结果判断：将试管拿成锐角，缓慢倾斜，使液体通过细胞扣，当细胞不再 附着在试管上时，继续缓慢地倾斜和振摇，直到形成均匀的细胞悬液或凝集 块；记录结果：记录观察到的凝集程度或溶血程度。与正定型结果进行相互验 证；如果反应较弱，可将试管于室温（或）放置 510min,以促进弱抗体的反 应，再离心观察结果。如果反应还是很弱可以增加血清（或血浆）滴数，最多到 6滴以加

9、强反应。5.3 RhD血型鉴定试验取一支洁净试管，做好标记，加入抗-D血清1滴；向试管中加入1滴3-5%被检红细胞盐水（血清或血浆）悬液；轻轻混合试管内容物，1000g离心15s;结果判断：将试管拿成锐角，缓慢倾斜，使液体通过细胞扣，当细胞不再 附着在试管上时，继续缓慢地倾斜和振摇，直到形成均匀的细胞悬液或凝集 块；记录结果：记录观察到的凝集程度或溶血程度。6.1 凝集或发生溶血为阳性结果；6.2 细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果。四、微柱凝胶法1 .原理：ABO/RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗 A、抗B、抗D标准血清， 如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发

10、生凝集反应，凝胶颗 粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒， 使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。2 .标本采集及处理：用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况 下可以使用抗凝动脉血。3000rpm,离心3-5min。（婴幼儿及其他不便于真空管 采血的患者，如不进行反定型试验可采集末梢血。）3 .标本运送与储存：采集好的标本与申请单同期尽快（一般 2小时内）送往输血科。标本采集后 和检测后，应置于28c环境下储存。检测后的标本应至少保存 7天，以备结果 查对。4 .仪器与材料：ABORhD血型定型检测卡（单克隆抗体）、 ABORhD血型检测卡（微柱凝 胶）、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、一次性试管。5 .操作步骤：5.1 将微住凝胶试剂卡做好患者姓名等标记；5.2 将待检红细胞用低离子强度溶液稀释成 0.5%-0.8%勺悬浮液，加入标有 -A、-B、-D（和又t照）的微管中，各1滴（或50ul）;5.3 用低离子溶液将反定型红细胞1、B配成0.5%0.8嘛度，分别加入对应的微孔 AC、BC中，各1滴（或 50。再分别加入患者血浆各1滴（或50；5.4 专用离心机离心5分钟，2分钟900rpm, 3分钟1500rpm，取出肉眼判定结6 .结果判定：6.1 阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微住