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文档简介

1、 选修1 生物技术实践 2015.2.71临床使用抗生素前,有时需要做细菌耐药实验。实验时,首先要从病人身上获取少量样本,然后按照一定的实验步骤操作,以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题: (1)取该单菌落适当稀释,用_法接种于固体培养基表面,在37 培养箱中培养24 h,使其均匀生长,布满平板。(2)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性,将分别含有A、B、C、D 四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置,培养一段时间后,含A的滤纸片周围出现透明圈,说明该致病菌对抗生素A_;含B的滤纸片周围没有出现透明圈,说明该致病菌对抗生素B_;含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小,说明_;含D

2、的滤纸片周围的透明圈也比含A的小,且透明圈中出现了一个菌落,在排除杂菌污染的情况下,此菌落很可能是抗生素D的_。(3)根据上述实验结果,为达到抗菌目的,最好应选用抗生素_。2普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱,有人将地衣芽孢杆菌的淀粉酶基因转入酵母菌中,经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种(过程如图甲所示)。(1)图甲中,为达到筛选目的,平板内的固体培养基应以_作为唯一碳源。、过程需重复几次,目的是_。(2)某同学尝试过程的操作,其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是_;推测该同学接种时可能的操作失误是_。(3)以淀粉为原料,用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下

3、密闭发酵,接种_菌的发酵罐需要先排气,其原因是_。3微生物的培养中,制备培养基的过程是: 无菌技术:主要包括 常用灭菌方法:灼烧灭菌 ;干热灭菌主要针对 等;高压蒸汽灭菌主要针对 等。制备固体培养基最后要将平板 ,其主要目的是 4、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数:计数方法: 法和显微镜直接计数法。前者为了增强实验的说服力和准确性,则需设置 ,一般选择菌落数在 的平板进行计数。过程: 鉴定分解尿素的细菌用 5、分解纤维素的微生物的分离:纤维素酶包括 ,鉴定纤维素分解菌所用试剂: 。可根据是否产生 来筛选纤维素分解菌。分离流程: 6该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前,随机

4、取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间,这样做的目的是_;然后,将1 mL水样稀释100倍,在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液;经适当培养后,3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为_。7与微生物培养基相比,植物组织培养的培养基常需添加生长素和_,这些植物激素一般需要事先单独配制成_保存备用。8、纯化菌株时,通常使用的划线工具是_。划线的某个平板培养后,第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌,第二划线区域所划的第一条线上无菌落,其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_。9制作泡菜时,所用盐水需煮沸,其目的是_为了缩短制作时间,有人还会在冷

5、却后的盐水中加入少量陈泡菜液,加入陈泡菜液的目的是_;制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有_、_和_等。从开始制作到泡菜品质最佳这段时间内,泡菜液逐渐变酸。这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是_,原因是_。10酵母菌的酒精发酵过程一般控制在_温度范围最适合酵母菌繁殖,请简要说明理由_ 。 (6)发酵完成后,生物兴趣小组同学制作的果酒品质非常好。为了方便后续年级使用,可将菌液_ 保存。11葡萄糖经酒精发酵可以产生葡萄酒,进一步经醋酸发酵可以产生葡萄醋,请利用相关的知识回答问题: (1)甲、乙两位同学将葡萄榨成汁后分别装入相应的发酵瓶中,在温度等适宜的条件下进行发酵,如下图所示。在排气口要

6、通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接,其目的是_。请找出图中实验操作的错误:甲图中的错误是_,乙图中的错误是_。 (2)若果汁中混杂有醋酸菌,在果酒发酵旺盛时,醋酸菌_(能/不能)将果汁中的糖发酵形成醋酸,其原因是_。12腐乳是我国古代劳动人民创造出的一种经过微生物发酵的大豆食品。下面是腐乳制作的流程示意图:让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制(1)现代科学研究表明,许多种微生物参与了豆腐的发酵,其中起主要作用的是毛霉,毛霉是一种_状真菌。(2)腐乳制作的原理是_ _ (3)传统的制作过程中,豆腐块上生长的毛霉来自_。而现代的腐乳生产是在严格的无菌条件下,将优良的毛霉菌种接种在豆腐上,这样可

7、以_。(4)加盐的作用是_和_。(5)卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的,加酒的作用是_和_。13胡萝卜素是一种常用的食用色素,可分别从胡萝卜或产胡萝卜素的微生物菌体中提取获得,流程如下: (2)培养酵母菌R时,培养基中的蔗糖和硝酸盐可分别为酵母菌R的生长提供_和_。(3)从胡萝卜中提取胡萝卜素时,干燥过程应控制好温度和_以 ;萃取过程中宜采用_方式加热以防止温度过高;萃取液浓缩前需进行过滤,其目的是_。(4)纸层析法可用于鉴定所提取的胡萝卜素。鉴定过程中需用胡萝卜素标准品作为_。14玫瑰精油的提取:(1)玫瑰精油的性质: ,能随水蒸气一同蒸馏。 (2)提取流程 :在开花的盛期(时期)

8、采收玫瑰花瓣,与清水以质量比为 的比例进行混合。在水蒸气蒸馏装置中进行蒸馏,在锥形瓶中收集到乳白色(颜色)的乳浊液。向乳化液中加入NaCl,增加盐的浓度,静置,出现 。用分液漏斗将其两层分开,得到油层。向油层中加入一些 吸水,静置约12h,过滤得到的液体为玫瑰油。(3)分析:加入氯化钠的目的是 ,有利于玫瑰油与水的 ;加入无水Na2SO4的目的 15、(1)橘皮精油的性质:无色透明,具有诱人的橘香味,主要成分为柠檬烯,一般采用压榨法提取。(2)提取流程:石灰水浸泡 压榨过滤静置 橘皮油(3)分析:橘皮洗净晾干后,要浸泡在pH为12、质量分数为 7%8%的石灰水中1624h,其目的是 16如图1

9、是在发酵罐内利用三孢布拉氏霉发酵生产胡萝卜素过程中,菌体生物量及胡萝卜素产量随时间变化的曲线图。图2是样品层析结果及与胡萝卜素标准样品的比对。请回答下列问题:(1)发酵罐内三孢布拉氏霉培养基按物理形态分应为_,玉米粉和豆饼为微生物的生长分别主要提供_。在接入菌种前,应对培养基进行_,以避免杂菌污染。(2)图1中,菌体的最快增长出现在第_h,菌体的生物量到达最大值后下降,其原因是_ _ 为保证连续的生产,应采取的措施是_ _(3)胡萝卜素常用的提取方法为_法,实验表明,石油醚的提取效果远好于丙酮和酒精,原因是_ _ (4)将萃取的胡萝卜素样品与胡萝卜素标准样进行比对,结果如图2。从图中分析可知,

10、色带_为胡萝卜素。17柠檬油是植物芳香油中的一种,它是一种广谱性的杀虫剂,可杀死蚊子、苍蝇、蟑螂和臭虫等传染疾病的害虫,以及危害粮食、蔬菜的常见害虫,包括幼虫、蛹等,被称为一种绿色杀虫剂。提取柠檬油的操作步骤如图。请根据实验流程图回答下列问题:(1)新鲜的柠檬果皮中含有大量的_和水分,如果直接压榨,出油率较低。(2)压榨是个机械加压过程,要求既要将原料压紧,防止原料滑脱,又要将_挤压出来。(3)A是_,目的是破坏细胞结构,分解果胶,防止压榨时果皮滑脱,提高_。B过程一般加入相当于柠檬果皮质量0.25%的小苏打和5%的硫酸钠,其目的是使柠檬油易与水分离,并调节pH至_。(4)C过程为用_过滤,目

11、的是除去固体物和残渣。(5)柠檬油是食品、化妆品和香水配料的优质原料,具有很高的经济价值,提取柠檬油不采取水中蒸馏的原因是:水中蒸馏会导致_的问题。柠檬果皮精油的提取适宜采用_法。18回答下列有关植物有效成分提取的问题。(1)提取玫瑰精油可用_法,对装有玫瑰花瓣和水的蒸馏瓶加热,可在锥形瓶中收集到油水混合物,再向油水混合物中加入_,可以使油水混合物分层,通过分液漏斗获取油层,此时油层中还有一定水分,一般还要加入一定量的_吸水。(2)用压榨法提取橘皮精油,为防止压榨时滑脱,提高出油率,可以将橘皮干燥去水后用_浸泡再压榨;在压榨液中加入小苏打和硫酸钠的目的是_。(3)胡萝卜素不易挥发,一般考虑_法

12、提取,在乙醇、丙酮、石油醚、乙酸乙酯、乙醚、苯、四氯化碳中,_最适合用于提取胡萝卜素。整个过程不用明火加热是为了_,蒸馏瓶上加装冷凝回流装置是为了_。19请回答下列与实验室提取芳香油有关的问题。(1)植物芳香油的提取可采用的方法有压榨法、_和_。(2)芳香油溶解性的特点是不溶于_,易溶于_,因此可用_作为提取剂来提取芳香油。(3)橘子果实含有芳香油,通常可用_作为材料提取芳香油,而且提取时往往选用新鲜的材料,理由是_。(4)对材料压榨后可得到糊状液体,为除去其中的固体物获得乳状液可采用的方法是_(5)得到的乳状液加入氯化钠并放置一段时间后,芳香油将分布于液体的_层,原因是_。加入氯化钠的作用是

13、_。(6)从乳状液中分离得到的芳香油中要加入无水硫酸钠,此剂的作用是_。20胡萝卜素可用于治疗因缺乏维生素A而引起的各种疾病;还是常用的食品色素;还具有使癌变细胞恢复为正常细胞的作用。下图是提取胡萝卜素的实验流程示意图,请回答下列相关问题。(1)提取胡萝卜素的实验流程是_萃取过滤浓缩。 (2)除了可以从植物中提取天然胡萝卜素外,还可以从养殖的岩藻中获得或者利用_生产。(3)新鲜的胡萝卜含有大量的水分,在胡萝卜素的提取过程中,要对新鲜的胡萝卜进行_处理,但要注意控制_和时间,这是因为_。(4)图中A过程表示_,此过程用到的有机溶剂应该具有很高的_,能够充分_胡萝卜素,并且不与水混溶。(5)图中B

14、过程表示_,浓缩之前进行过滤的目的是_。21辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保健、医药工业等领域。辣椒素的获得途径如图:(1)图中和分别表示辣椒组织培养中细胞的_和_过程。(2)图中培养外植体的培养基中常用的凝固剂是_。培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值_(填“高”或“低”)时,有利于芽的分化。对培养基彻底灭菌时,应采用的灭菌方法是_。(3)图中外植体的消毒所需酒精的体积分数是_。用酶解法将愈伤组织分离成单细胞时,常用的酶是_和纤维素酶。(4)提取辣椒素过程中,萃取加热时需安装冷凝回流装置,其目的是_。 22下图表示菊花的嫩枝和月季的花药离体培养过程,请据图回答下面的问题。 (1)对菊花来

15、说,要选取_的嫩枝来进行组织培养。对月季来说,适宜花粉培养的时期是_期。为确定该花粉是否处于该时期,最常用的方法是_。(2)在培养嫩枝组织和花粉的培养基中都要加入一定的植物激素,常用的植物激素有_。(3)某同学在培养过程中发现培养基上感染了几种细菌。若在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_指示剂培养几种菌后,指示剂变红就可以鉴定其中含有能够分解尿素的细菌。为了避免微生物对培养造成影响,所以在进行接种时应注意_。 接种室要消毒 只要戴口罩,操作时便可说话外植体可预先用体积分数为70%的酒精浸泡,取出后用无菌水冲洗后,再用0.1%的氯化汞溶液消毒,并用无菌水冲洗干净 接种操作要在酒精灯火焰旁进行 接种

16、完毕应立即盖好瓶盖A B C D(4)月季的花药培养与菊花的嫩枝组织培养不同,从植物产生的途径来说,花粉植株产生的途径除了图中所示外,还可以通过_阶段发育而来,这两种发育途径的差别主要取决于_。(5)不同植物对各种条件的要求往往不同,进行菊花组织培养一般将温度控制在_,并且对光照的控制为_。1、答案 :(1)涂布 (2)敏感 不敏感 该致病菌对C的敏感性比对A的弱 耐药菌 (3)A解析 (1)根据微生物的特点对其进行一系列浓度梯度稀释,然后用涂布法接种于固体培养基表面,再在适宜条件下培养。(2)对某种抗生素越敏感的致病菌,在该抗生素存在的范围内越不易生存,形成的透明圈就越大。故含A的滤纸片周围

17、出现透明圈,说明有抗生素A的地方该致病菌受到抑制;B的周围没有透明圈,说明致病菌对抗生素B不敏感,通过含C的透明圈要比A的透明圈小,说明该致病菌对C的敏感性比A的弱;D出现了透明圈,说明该致病菌对D敏感,但是在透明圈上出现一个菌落,又排除杂菌污染,判断此菌落的微生物对抗生素D产生了耐药性。(3)根据以上分析,为达到抗菌的目的,最好选择抗生素A。2、答案 (1) 淀粉 进一步筛选纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌 (2)稀释涂布平板法 涂布不均匀 (3)工程酵母 工程酵母菌分解淀粉产生葡萄糖的能力强,导致酒精发酵产生CO2的速率更快解析 (1)图甲中过程为构建基因表达载体,需要的酶有限制性核酸内切酶

18、及DNA连接酶;欲筛选可直接利用淀粉的菌种,宜制备以淀粉为唯一碳源的选择培养基;图示、过程需重复几次,其作用在于“纯化”,从而进一步筛选出分解淀粉能力更强的酵母菌。(2)图乙所示培养基平板中的菌落呈分散分布,应为采用稀释涂布平板法接种的结果,然而,该平板上菌落并非“均匀分布”而是相对集中于左侧,这可能是由于制作平板时“涂布不均匀”所致。(3)若以“淀粉”为原料,则相对于普通菌种,工程酵母菌因转入了淀粉酶基因,其利用淀粉的能力将更强,故发酵产生CO2的能力更强,因此需要先排气。3、计算-称量-溶化-灭菌-倒平板 消毒和灭菌 接种环、接种针等金属器具 玻璃器皿 培养基倒置 防止培养皿盖上的水珠滴入

19、培养基造成污染4、活菌计数 重复组 30300 土壤取样样品的稀释微生物的培养与观察 酚红指示剂5、C1 C2 Cx 刚果红 透明圈 流程:土壤取样选择培养梯度稀释涂布平板挑选菌落6、检测培养基平板灭菌是否合格 3.8×107解析为了检测培养基平板灭菌是否合格,可在涂布接种前,随机取灭菌后的空白平板先行培养一段时间。0.1 mL稀释液中平均有(393837)/338个活菌,则每毫升稀释液中活菌的数目为38/0.1380,则稀释前每毫升水样中活菌数目为380×1003.8×104,则每升水样中活菌数目为3.8×104×1 0003.8×

20、107。7、细胞分裂素 母液8、接种环 接种环灼烧后未冷却; 划线未从第一区域末端开始9、杀灭杂菌 增加乳酸菌数量 温度 腌制时间 食盐用量 乳酸菌数量增多,杂菌数量减少 乳酸菌比杂菌更为耐酸10、1825 在此温度下,酶的活性最强,代谢最旺盛 转移到甘油中,与甘油充分混合后,放在20 的冷藏箱中11、答案(1)防止空气中的微生物污染发酵瓶 甲:未夹住发酵瓶的进气管 乙:瓶中发酵液过多,淹没了排气管在瓶内的管口 (2)不能 果酒发酵时的缺氧环境能抑制醋酸菌生长,果酒发酵的最适温度也低于醋酸菌生长的最适温度12、答案 (1)丝 (2)毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨

21、基酸,脂肪酶能将脂肪水解成甘油和脂肪酸 (3)空气中的毛霉孢子 避免其他菌种的污染,保证产品的质量 (4)析出豆腐中的水分,使豆腐变硬 抑制微生物的生长,避免豆腐腐败变质(5)抑制微生物的生长 使腐乳具有独特的风味解析 (1)毛霉是一种丝状真菌。(2)腐乳的制作原理是毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸,脂肪酶能将脂肪水解成甘油和脂肪酸。(3)传统的腐乳制作过程中,不接种微生物,只能来自空气中的毛霉孢子;现代的腐乳生产在无菌条件下进行操作,可以防止杂菌污染,保证产品质量。(4)制作腐乳的过程中,加盐的作用有两方面:析出豆腐中的水分,使豆腐变硬;抑制微生物的生长,避

22、免豆腐腐败变质。(5)卤汤中加酒的作用有两方面:抑制微生物的生长和使腐乳具有独特的风味。13、答案 (1)碳源 氮源 (2)干燥时间 防止胡萝卜素的分解 水浴加热 滤去萃取液中的不溶物 (4)(实验)对照解析 (1)接种微生物的方法主要是稀释涂布平板法和平板划线法,接种过程为了避免其他杂菌的污染,要做无菌操作,所以接种前需对接种环进行灭菌。(2)蔗糖主要提供碳源,当然也可以作为能源物质,硝酸盐含氮元素,可提供氮源。(3)温度过高、干燥时间过长会导致胡萝卜素分解;由于萃取剂往往有挥发性,直接加热时挥发出来的有机溶剂遇明火易爆炸;萃取后需将原料中不溶于萃取剂的成分滤去。(4)提取出来的胡萝卜素往往

23、不是纯的,用胡萝卜素标准品主要起一个对照的作用。14、化学性质稳定,难溶于水,易溶于有机溶剂 1:4 油水分层 无水硫酸钠 增大盐水的密度 分层是吸收精油中残留的水分15、 漂洗 再次过滤 防止橘皮压榨时滑脱,提高出油率16、答案 (1)液体培养基 碳源和氮源 高压蒸汽灭菌 (2)100 营养物质缺乏,有害代谢产物积累 连续加入新的培养液,同时排出代谢产物 (3)有机溶剂萃取 石油醚为水不溶性有机溶剂,萃取效果好 (4)解析 (1)发酵罐内三孢布拉氏霉培养基按物理形态分应为液体培养基,玉米粉和豆饼为微生物的生长分别主要提供碳源和氮源。在接入菌种前,应对培养基进行高压蒸汽灭菌,以避免杂菌污染。(

24、2)图1中,菌体的最快增长出现在第100 h,菌体的生物量到达最大值后下降,其原因是营养物质缺乏,有害代谢产物积累,为保证连续的生产,应采取的措施是连续加入新的培养液,同时排出代谢产物。(3)提取胡萝卜素常用的方法为有机溶剂萃取法,实验表明,石油醚的提取效果远好于丙酮和酒精,原因是石油醚为水不溶性有机溶剂,萃取效果好。17、答案 (1)果蜡、果胶 (2)油分 (3)石灰水 出油率 78 (4)普通布袋 (5)原料焦糊和有效成分水解 压榨解析 (1)新鲜的柠檬果皮中含有大量的果蜡、果胶、水分,会影响出油率。(2)压榨过程要将原料压紧,防止滑脱,将油分挤压出来。(3)为了提高出油率,压榨前,需要将

25、橘皮用石灰水浸泡,这样可以破坏细胞结构,降低压榨液的黏稠度,过滤时不会堵塞筛眼。(4)图中C过程为过滤,用普通布袋,可以除去固体物和残渣。(5)水中蒸馏时,柠檬油中有效成分会水解,也容易发生原料焦糊问题,因此宜采用压榨法18、答案 (1)水蒸气蒸馏(蒸馏) NaCl 无水硫酸钠(2)石灰水 促进油和水的分离 (3)萃取 石油醚 防止引起燃烧或爆炸 防止加热时有机溶剂挥发解析 (1)提取玫瑰精油可用水蒸气蒸馏法;收集油水混合物后,向其中加入NaCl,可促进油水混合物分层;油层中的水分可以用无水硫酸钠吸收。(2)提取橘皮精油时,将橘皮干燥去水后用石灰水浸泡,可以防止压榨时滑脱,提高出油率;在压榨液

26、中加入小苏打和硫酸钠的目的是促进油和水的分层。(3)胡萝卜素不易挥发,一般采用萃取法提取;在乙醇、丙酮、石油醚、乙酸乙酯、乙醚、苯、四氯化碳中,乙醇和丙酮易溶于水,不适合用萃取法,石油醚的沸点最高,且不易挥发,最适合用于提取胡萝卜素;由于萃取剂易燃易爆炸,不能明火加热;蒸馏瓶上加上冷凝回流装置是为了防止加热时有机溶剂挥发。19、答案 (1)蒸馏法 萃取法 (2)水 有机溶剂 有机溶剂(其他合理答案也可) (3)橘子皮 芳香油含量较高(4)过滤(其他合理答案也可) (5)上 油的密度比水小(其他合理答案也可) 增加水层密度,使油和水分层 (6)吸收芳香油中残留的水分解析 (1)植物芳香油的提取可

27、采用的方法有压榨法、蒸馏法、萃取法。(2)芳香油溶解性的特点是不溶于水,易溶于有机溶剂,因此可用有机溶剂作为提取剂来提取芳香油。(3)一般采用新鲜的橘子皮来提取橘皮精油,因为新鲜的含有芳香油多。(4)除去液体中的固体常用方法是过滤。(5)芳香油密度比水小,且不溶于水,会浮在液体的表面。加入氯化钠会增加水层密度,使油和水分层。(6)无水硫酸钠的作用可以吸收芳香油中残留的水分。20、答案 (1)粉碎 干燥 (2)微生物的发酵 (2)干燥 温度 温度太高、干燥时间太长会导致胡萝卜素分解(3)萃取 溶点 溶解 (4)浓缩 除去萃取液中的不溶物解析 (1)天然胡萝卜素除取自植物外,还可以从养殖的岩藻中获得或利用微生物发酵生产。(2)进行有机溶剂萃取时宜对原料进行干燥处理。(3)图中A为萃取,该过程所用到的有机溶剂应具有很高的溶点,能充分溶解胡萝卜素,且不与水混溶。(4)图中B为浓缩,在浓缩前宜进行过滤以除去萃取液中的不溶物。21、答案 (1)脱分化(或去分化) 再分化 (2)琼脂 低 高压蒸汽灭菌 (3)70% 果胶酶 (4)防止有机溶

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