免疫标准操作程序SOP

1、芜湖市第二人民医院检验科标准操作文件121标准操作程序项目甲型肝炎病毒IgM检测的标准操作程序方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次文件编号CHDEYY-JYK-MY-001文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室甲型肝炎病毒IgM

2、检测的标 准操作程序WHDRYY-JYK-MY-001共2页第1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该S0P变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本S0P的工作人员提出，并报经专业主管、科主任批准签字。标本的采取和保存采静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免 溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。测定原理采用兔抗-人IgMu链包被反应被，加入待测标本，同时加入 HAVAg，抗HAV-HRP，如待测 标本中含有抗-HAV-IgM时，就能与包被兔抗-人IgMu链结合，并且与HAVAg,抗-HAV-HRP 结合成复合物，加 TMB底物产生显

3、色反应，反之则无显色反应。操作步骤1.2.3.4.5.6.7.将待测标本用生理盐水作（1 : 1000）稀释， 各2空，每孔加入阴性对照（或阳性对照） 置37度孵育20分钟。洗板机洗板：选择洗涤 5次程序洗板后拍干。 空，静置5秒，甩干，重复三次后拍干。每孔加入HAVAg30ul （或一滴），酶结合物匀，封板，置37度孵育20分钟。洗板机洗板：选择洗涤 空，静置5秒，甩干， 每孔加显色剂A液、 每孔加入终止液50ul 用酶标仪读数，取波长每孔加入稀释标本100UI，设阴、阳性对照100UI （或2滴），并设空白对照一孔，封板，手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各50ul （或一滴），（空白对照

4、孔不加），充分混5次程序洗板后拍干。 重复三次后拍干。B液各50ul （或一滴） （或一滴），混匀。450nm （建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm）,先手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各，充分混匀，封板，置 37度孵育10分钟。0D值。用空白孔校零，然后读取各孔结果判断样品0D值除以阴性对照平均 0D值大于或等于2.1判断为阳性，否则为阴性阴性对照0D值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际0D值计算 临床意义血清中HAV IgM在亚临床期即已出现，其滴度在感染后3个月维持在1000以上，早被公认为早期诊断甲型肝炎的依据。注意事项试剂使用前应摇匀，并弃去 12滴后垂直滴

5、加，注意均匀用力。从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。洗板时所用的洗水纸请勿反复。不同批号试剂请勿通用。结果判断须在10分钟内完成。1.2.3.4.5.操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室甲型肝炎病毒IgM检测的标 准操作程序WHDEYY-JYK-MY-001共2页第2页2005-01-016. 封片不能重复使用。7. 用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚

6、曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01标准操作程序项目乙肝表面抗原检测的标准操作程序方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-002文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检

7、验科免疫室乙肝表面抗原检测的标准操 作程序WHDEYY-JYK-MY-002共2页第1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该SOP变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字： 专业主管、科主任。标本的采取和保存随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避 免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。测定原理双抗体夹心法测 HBsAg :抗S包被反应板，加入待测血清后，再加入酶标抗 S,加底物显 色为阳性，证明样本中含被测物，含量与显色程度成正比。操作步骤实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡2

8、0稀释。加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照 2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。加酶结合物：每孔 0.05毫升，空白对照孔不加，充分混匀，置37 C孵育30分钟。洗板：1）手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置 孔内洗涤液拍干，如此反复 5次，拍干。2）洗板机洗板：选择洗涤 5次的程序洗板，最后拍干。加显色剂：先加显色剂 A，每孔0.05毫升；再加显色剂 B，每孔0.05毫升；充分混匀， 放置37 C避光孵育15分钟。终止反应：每孔加入终止液 0.05毫升，混匀。 测定：用酶标仪读数，可选择波长 各孔OD值。30分钟，同时将浓缩洗涤液作 1 :2.3.4.

9、5.6.7.510秒，弃去1.450nm （以空白孔校零）或双波长450/63Onm,读取结果判断0D 值 *2.10D值小于COV为阴性Cutoff值计算：COV=阴性对照平均 标本OD值大于COV为阳性，标本注：阴性对照 OD值低于0.05按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。临床意义HbsAg在感染早期出现于患者血循环中，可持续数月，数年乃至终生，是诊断HBV感染最常用的指标。但所谓 HBV感染的“窗口期” ，HbsAg可以阴性，而抗 HBc等其他HBV血 清标志物则可阳性。注意事项1试剂使用前应摇匀，并弃去12滴后垂直滴加，注意均匀用力。2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡3

10、0分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。3洗板时所用的洗水纸请勿反复。操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室乙肝表面抗原检测的标准操 作程序WHDEYY-JYK-MY-002共2页第2页2005-01-014不同批号试剂请勿通用。5结果判断须在10分钟内完成。6封片不能重复使用。7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01标准操作

11、程序项目乙肝表面抗体检测的标准操作程序方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-003文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室乙肝表面抗体检测的标准操 作程序WHDEYY-JYK-MY-003共2页第

12、1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该SOP变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字: 专业主管、科主任。标本的采取和保存随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避 免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。测定原理双抗原夹心一步法测 HbsAb : S抗原反应包被板，加入待测血清后，再加入酶标抗 物显色为阳性，证明样品中含被测物，含量与显色程度成正比。操作步骤1.S,加底2.3.4.5.6.7.实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡20稀释。加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升，

13、并设阳性对照 2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。加酶结合物：每孔 0.05毫升，空白对照孔不加，充分混匀，置37 C孵育30分钟。洗板：a）手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。b）洗板机洗板：选择洗涤 5次的程序洗板，最后拍干。加显色剂：先加显色剂 A，每孔0.05毫升；再加显色剂 B，每孔0.05毫升；充分混匀， 放置37 C避光孵育15分钟。终止反应：每孔加入终止液0.05毫升，混匀。测定：用酶标仪读数，可选择波长 各孔OD值。30分钟，同时将浓缩洗涤液作 1 :510秒，弃去450nm （以空白孔校零）或双波长450/63Onm,

14、读取结果判断Cutoff值计算：COV=阴性对照平均 标本OD值大于COV为阳性，标本注：阴性对照 OD值低于0.05按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。 临床意义抗一HBs为HBV的中和抗体，有清除HBV ,防止在感染的作用， 患者恢复期，提示感染已终止。此外，注射过乙肝疫苗的人，抗一 注意事项1试剂使用前应摇匀，并弃去 12滴后垂直滴加，注意均匀用力。2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，内储藏备用。3洗板时所用的洗水纸请勿反复。4不同批号试剂请勿通用。0D 值 *2.10D值小于COV为阴性抗一HBs 般出现于乙肝HBs阳性。余者应及时封存，置冰箱操作人员部

15、门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室乙肝表面抗体检测的标准操 作程序WHDEYY-JYK-MY-003共2页第2页2005-01-015结果判断须在10分钟内完成。6封片不能重复使用。7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01标准操作程序项目乙肝E抗原检测的标准操作程序方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/0

16、1/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-004文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室乙肝E抗原检测的标准操作 程序WHDEYY-JYK-MY-004共2页第1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该SOP变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提

17、出，并报经下述人员批准签字： 专业主管、科主任。标本的采取和保存随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避 免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。测定原理双抗体夹心法测 HbeAg :抗e包被反应板，加入待测血清后，再加入酶标抗e,加底物显色为阳性，证明样本中含被测物，含量与显色程度成正比。操作步骤实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡20稀释。加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照 2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。加酶结合物：每孔 0.05毫升空白对照孔不加，充分混匀，置37C孵育30分钟。洗板：a）手工洗板：弃去反应板条

18、孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。b）洗板机洗板：选择洗涤 5次的程序洗板，最后拍干。加显色剂：先加显色剂 A，每孔0.05毫升；再加显色剂 B，每孔0.05毫升；充分混匀， 放置37 C避光孵育15分钟。终止反应：每孔加入终止液0.05毫升，混匀。测定：用酶标仪读数，可选择波长 各孔OD值。30分钟，同时将浓缩洗涤液作 1 :2.3.4.5.6.7.510秒，弃去1.450nm （以空白孔校零）或双波长450/63Onm,读取结果判断0D 值 *2.10D值小于COV为阴性Cutoff值计算：COV=阴性对照平均 标本OD值大于COV为阳性，标本注：阴性

19、对照 OD值低于0.05按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。临床意义HBeAg阳性是具有传染性的标志，在乙肝潜伏期HbeAg消失 但并不意味着HBV DNA停止复制，或传染性消失。HBeAg是HBV的核心部分，故一般认为乃至整个病程中，HBeAg均可检出。抗 HBe是HBeAg的相应抗体。一般认为 和抗HBe出现是病情趋向好转的征象。注意事项1. 试剂使用前应摇匀，并弃去12滴后垂直滴加，注意均匀用力。2. 从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱 内储藏备用。3. 洗板时所用的洗水纸请勿反复。操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2

20、005/01/012005/01/012005/01/01实验室名称项目编号制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室乙肝E抗原检测的标准操作 程序WHDEYY-JYK-MY-004共2页第2页2005-01-014. 不同批号试剂请勿通用。5. 结果判断须在10分钟内完成。6封片不能重复使用。7.用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01标准操作程序项目乙肝E抗体检测的标准操作程序方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批

21、准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-005文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01实验室名称项目编号制定日期芜湖市第一人民医院检验科免疫室乙肝E抗体检测的标准操作 程序WDYYY-JYK-MY-005共2页第1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该SOP变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下

22、述人员批准签字: 专业主管、科主任。标本的采取和保存随机静脉血2ml，分离血清备用。免溶血，避免反复冻融，不可用测定原理竞争抑制一步法测 HBeAb :抗也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避NaN3防腐。e包被反应板，加入待测血清后，加入中和e抗原,再加入酶标抗e,加底物不显色的为阳性，证明样本含被测物，含量与显色程度成反比。操作步骤1.2.3.4.5.6.7.&验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作稀释。加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照 2孔，阴性对照2孔，照1孔。加中和试剂：每孔 0.05毫升，空白对照孔不加。加

23、酶结合物：每孔 0.05毫升空白对照孔不加，充分混匀，置37C孵育30分钟。洗板：a）手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。b）洗板机洗板：选择洗涤 5次的程序洗板，最后拍干。加显色剂：先加显色剂 A，每孔0.05毫升；再加显色剂 B，每孔0.05毫升；充分混匀， 放置37 C避光孵育15分钟。终止反应：每孔加入终止液0.05毫升，混匀。测定：用酶标仪读数，可选择波长450nm （以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。1: 20空白对510秒，弃去结果判断Cutoff值计算：COV=阴性对照平均 OD值*0.3标本OD

24、值大于或等于 COV为阴性，标本 OD值小于COV为阳性注：非原倍血清样品（稀释血清、质控血清）COV=阴性对照*0.5临床意义抗HBe是HBeAg的相应抗体。一般认为HbeAg消失和抗HBe出现是病情趋向好转的征象。 但并不意味着HBV DNA停止复制，或传染性消失。注意事项1试剂使用前应摇匀，并弃去12滴后垂直滴加，注意均匀用力。2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。3洗板时所用的洗水纸请勿反复。操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01实验室名称项目编号制定日期芜湖市

25、第二人民医院检验科免疫室乙肝E抗体检测的标准操作 程序WHDEYY-JYK-MY-005共2页第2页2005-01-014不同批号试剂请勿通用。5结果判断须在10分钟内完成。6封片不能重复使用。7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01标准操作程序项目乙肝核心抗体检测的标准操作程序方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年01月01

26、日起实施，每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-006文件版本号第1版医务科保管者院长办公至保官者院档案室保管者检验科主任操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验 科免疫室乙肝核心抗体检测的标准操 作程序WHDEYY-JYK-MY-006共2页第1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该SOP变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字: 专业主管、科主任。标本的采取和保存随机静脉血2ml，分离血清备用。免溶血，避免

27、反复冻融，不可用测定原理也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避 NaN3防腐。C包被反应板，加入待测血清后，加入中和C抗原，再加入酶标抗抗C,加底物不显色的为阳性，证明样本含被测物，含量与显色程度成反比。操作步骤1.实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡20稀释。加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照 2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。1） 1: 30稀释血清（血浆）检测结果代表临床意义，待检标本可用稀释后的洗 涤液加以稀释2 ）原倍血清（血浆）检测结果代表流行病学意义。酶结合物：每孔 0.05毫升（抗一HBc1: 30稀释血清代表临床意义，可用稀释后的洗涤

28、 液加以稀释；原倍血清代表流行病学意义），空白对照孔不加，充分混匀，置37 C孵育30分钟。洗板：a）手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置 孔内洗涤液拍干，如此反复 5次，拍干。b）洗板机洗板：选择洗涤 5次的程序洗板，最后拍干。加显色剂：先加显色剂 A，每孔0.05毫升；再加显色剂 B，每孔0.05毫升；充分混匀， 放置37 C避光孵育15分钟。终止反应：每孔加入终止液0.05毫升，混匀。测定：用酶标仪读数，可选择波长450nm （以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。结果判断Cutoff值计算：原倍血清 COV=阴性对照平均 OD值*0.31 :

29、30稀释血清COV=阴性对照平均 OD值*0.5标本OD值大于或等于 COV为阴性，标本 OD值小于COV为阳性。临床意义抗HBc是HBeAg的相应抗体，也是 HBV感染后血清中最早出现的HBV的标志性抗体。持续时间长，甚至终生存在。几乎所有个体在感染HBV后都能产生抗 HBc,故它是乙肝流行病学调查的良好指标。在HBV感染的“窗口期”抗 HBc常是唯一可测出的 HBV血清标志物。2.3.4.5.6.7.30分钟，同时将浓缩洗涤液作 1 :510秒，弃去竞争抑制一步法测 HBcAb :抗操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/0

30、1注意事项实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验 科免疫室乙肝核心抗体检测的标准操 作程序WHDEYY-JYK-MY-006共2页第2页2005-01-011试剂使用前应摇匀，并弃去12滴后垂直滴加，注意均匀用力。2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。3洗板时所用的洗水纸请勿反复。4不同批号试剂请勿通用。5结果判断须在10分钟内完成。6封片不能重复使用。7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01标准操作程序

31、项目乙肝病毒Pre-S1抗原检测的标准操作程序方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-007文件版本号第1版医务科保管者院长办公至保官者院档案室保管者检验科主任操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验 科免疫室乙肝病毒P re-S1抗原检测的 标准操作程序WHDEYY-JYK-

32、MY-007共1页第1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该SOP变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字: 专业主管、科主任。标本的采取和保存随机静脉血2ml，分离血清备用。免溶血，避免反复冻融，不可用测定原理用乙肝病毒Pre S1蛋白抗体和抗 夹心一步法检测标本中的乙肝病毒操作步骤1.2.也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避 NaN3防腐。HBS分别用作酶标记抗体和包被抗体。采用ELISA双抗体Pre S1蛋白。3.4.将包被条固定于支架并编上序号。 设阳性对照2孔，每孔加入阳性对照 升，空白对照一孔，加入生理盐水

33、微升，除空白孔外，每孔再加酶结合物 放37 C孵育60分钟。弃去反应孔内液体并拍干，用工作洗涤液（浓缩洗涤液1毫升加19毫升蒸馏水稀释后即为工作洗涤液）注满各孔，静置30秒，再拍干，重复洗涤 5次。每孔加入TMB显色剂A50微升，在加入 TMB显色剂B50微升， 钟。每孔加入终止液50微升。 用酶标仪波长450nm读数，先用空白孔调零，然后读取各测定孔50微升，阴性对照2孔，每孔加入阴性对照 50微100微升。然后，依次在反应孔内加入待测样品5050微升，置微型震荡器混匀5秒后，盖好封片37C中显色1015分5.6.结果判断阴性对照A值*2.5=临界值阴性对照小于0.05时，按0.05计算，高

34、于0.05时按实际OD值计算。 即为阳性，待测样本小于临界值即为阴性。临床意义0D值。待测样本大于临界值乙肝病毒Pre S抗原（前si抗原）主要存在于病毒完整颗粒中，表示病毒具有复制功能和传染性。其敏感性好于 HBeAg可弥补由于HBeA蛮异等造成的HBeAg阴性的临床“误导”。在早期诊断上早于乙肝两对半和 ALT。可与HB DNA取得几乎同样的敏感性。 注意事项1.2.3.4.包被条需密封防潮，从冰箱取出后，在室温中平衡不少于 保存在28度，在有效期内使用。终止液终止后，需在 30分钟内测定结果。不同批号试剂请勿通用。15分钟。操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01

35、/012005/01/012005/01/015用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项目丙型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-008文件版本号第1版医务科保管者院长办公至保官者院档案室保管者检验科主任操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01实验室名称

36、项目编号制定日期芜市第二民医院检验 科免疫室丙型肝炎病毒抗体检测的标 准操作程序WHDEYY-JYK-MY-008共2页第1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该SOP变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字： 专业主管、科主任。标本的采取和保存随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避 免溶血，避免反复冻融，不可用测定原理 采用ELISA间接抗体两步法测抗 标记第二抗体，加底物显色为阳性，操作步骤每次试验设阴性、阳性对照各两孔，分别加入阴、阳性对照血清 对照，加入样品稀释液100ul。其余孔加

37、匀后，置37C温育30分钟。洗板机洗板：选择洗涤 5次的程序洗板，每孔加酶结合物100ul,（空白对照除外）洗板机洗板：选择洗涤 5次的程序洗板，NaN3防腐。HCV，用HCV抗原包被反应板加入待测标本后再加入酶 证明样本中含丙肝抗体，含量与显色程度成正比。1.lOOul，再设一孔空白lOOul样品稀释液，再加待测血清10ul。充分混2.3.4.5.6.每孔加显色剂 A、B各50ul，轻轻震荡后，每孔加入终止液50ul终止反应，用酶标仪读数，可选择波长 取各孔OD值。结果判断1.2.3.4.5.6.最后扌白干。，置37C温育20分钟。 最后扌扌干。37 C避光静置10分钟。450nm （以空白

38、调零），读阳性对照平均值大于 1.20，实验结果有效。实验设计要求阳性、阴性对照OD值之差应大于1.20,否则本次实验无效。若阴性对照值小于 0.050时，按0.050计算。临界值=阴性对照平均值+0.1测试标本的计算值小于临界值则为测试标本的计算值等于或大于临界值则为HCV抗体阴性。HCV抗体阳性。临床意义抗一HCV阳性仅提示已被 HCV感染，不是获得免疫力的标志。急性期多为IgM型，慢性期多为IgG型，两者均为非保护性抗体，是具有传染性的标志。注意事项1.2.3.4.5.试剂使用前应摇匀，并弃去 12滴后垂直滴加，注意均匀用力。从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应

39、及时封存，置冰箱内储藏备用。洗板时所用的洗水纸请勿反复。不同批号试剂请勿通用。结果判断须在10分钟内完成。操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/016.封片不能重复使用。实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验 科免疫室丙型肝炎病毒抗体检测的标 准操作程序WHDEYY-JYK-MY-008共2页第1页2005-01-017.用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01标准操作程序项目丁型肝炎病毒抗体

40、检测的标准操作程序（IgG）方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-009文件版本号第1版医务科保管者院长办公至保官者院档案室保管者检验科主任操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验 科免疫室丁型肝炎病毒抗体检测的标 准操作程序（igG）WHDEYY-JYK-MY-009共2页

41、第1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该SOP变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字： 专业主管、科主任。标本的采取和保存随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避 免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。测定原理采用丁型肝炎病毒特异性抗原成分作为包被抗原，采用ELISA法检测丁型肝炎病毒抗体。样品加入已有样品稀释液的包被抗原反应孔，在随后的温育过程中，若样品中含特异性抗体，则该抗体与包被抗原形成抗原一抗体复合物被吸附到固相上，再加上酶标记的第二抗体， 最终形成抗原一抗体一酶标二抗复合物，

42、洗涤除去未结合的游离酶， 加入显色剂后显色， 反之若样品中不含特异性抗体，则加入显色剂后不显色。操作步骤1.2.配洗液：将洗涤液（20倍）与蒸馏水按1 : 19的比例稀释，充分摇匀后备用。 加样品稀释液：用加样器在微孔反应条孔中加入样品稀释液每孔100ul,加对照。加标本和留空白：将每份待检标本10ul分别加入已有样品稀释液的各孔中， 加标本做空白对照，标好位置。加对照：在预先空下的 4孔分别加入阴性对照两孔，阳性对照两孔每孔 置，阴、阳对照应在所有待测标本加完后再加，以保证阈值计算的准确性。 温育（一）：充分混匀，37C温育20分钟。洗板（一）：洗板机洗板：洗板次数为5次，每次洗液在孔中滞留

43、时间为液应注满反应孔，确保每次吸净无残留，全部洗完后在毛巾或洗水纸上用力拍干。 加酶标二抗：各孔中加入酶标二抗 温育（二）：37 C温育20分钟。洗板（二）：方法同洗板（一）。加显色剂：每孔加入显色剂 A50ul,全部加完后，再次每孔加入显色剂 温育（三）：37C显色10分钟。终止：显色完毕后立即于每孔加 50ul终止液，混匀。判断：终止后应在10分钟内完成判读，用空白对照调零，用酶标仪在 处测定吸光值。结果判断1. 对空白对照调零后，两孔阳性对照OD平均值大于两孔阴性对照 OD平均值0.5以上, 阴性对照OD平均值小于0.10时，方可认为试剂盒有效并且用户操作无误。2. 阈值的计算：1）两孔

44、阴性对照平均值小于 0.06按0.06计算2）阈值=2.1乘以阴性对照 OD平均值空下四孔准备3.4.5.6.7.&9.10.11.12.13.lOOul。留下一孔不lOOul，标好位1530秒，洗B50ul ,混匀。450nm波长操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验 科免疫室丁型肝炎病毒抗体检测的标 准操作程序（IgG）WHDEYY-JYK-MY-009共2页第1页2005-01-01临床意义HDV是一种有缺陷的病毒，表面被 HBV包膜蛋白包裹。HDV的致病性依赖于

45、HBV，可与 HBV重叠感染或共同感染， HDV感染与暴发型肝炎重症肝炎及肝硬变密切相关。HDV感染的血清学检测测定抗 HDV IgG，般认为是即往感染。注意事项试剂使用前应摇匀，并弃去 12滴后垂直滴加，注意均匀用力。从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。洗板时所用的洗水纸请勿反复。不同批号试剂请勿通用。结果判断须在10分钟内完成。封片不能重复使用。用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。1.2.3.4.5.6.7.操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/

46、01标准操作程序项目丁型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序（IgM）方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室，医务科本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-010文件版本号第1版医务科保管者院长办公至保官者院档案室保管者检验科主任操作人员部门主管质量负责人姓名冯岚曹进平陈健康日期2005/01/012005/01/012005/01/01实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验 科免疫室丁型肝炎病毒抗体检测的标 准操作程序（IgM ）WHDEYY-JYK-MY-010共2页第1页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该SOP变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字： 专业主管、科主任。标本的采取和保存随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避 免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。测定原理采用丁型肝炎病毒特异性抗原成分作为包被抗原，采用ELISA法检测丁型肝炎病毒抗体。样品加入已有样品稀释液的包被抗原反应孔，在随后的温育过程中，若样品中含特异性抗体，则该抗体与包被抗原形成抗原