水中细菌总数的测定

1、水中细菌总数的测定、目的要求I.学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。2了解水源水的平板菌落计数的原则。二、基本原理本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁 多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一 种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生 长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普 通肉膏蛋白胨琼脂培养基。三、器材I 培养基肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌水。2.仪器或其他用具灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸 管，灭菌试管等。四、操作步骤I.水样的采取(1) 自来水先将自

2、来水龙头用火焰烧灼 3min 灭菌，再开放水龙头使水流 5min 后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。(2) 池水、河水或湖水应取距水面I015cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃 塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满 后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。2细菌总数测定(1) 自来水 用灭菌吸管吸取 lml 水样，注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。 分别倾注约15mL己溶化并冷却到45C左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基, 并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15mL作空自对照。培养基凝

3、固后，倒置于37C温箱中，培养24h,进行菌落计数。 两个平板的平均菌落数即为 lml 水样的细菌总数。(2)池水、XX或XX等 稀释水样取 3 个灭菌空试管，分别加入 9ml 灭菌水。取 lml 水样注入第 一管 9ml 灭菌水内、摇匀，再自第一管取 1ml 至下一管灭菌水内，如此稀释到 第三管，稀释度分别为 10-1、 10-2 与 10-3。稀释倍数看水样污浊程度而定，以培养后平板的菌落数在 30300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到 无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。般中等污秽水样，取 10-1、10-2、10-3 三个连续稀释度，污秽严重的取 10-

4、2、10-3、10-4 三个连续稀释度。4/ 4 一稀释度做两个培养皿。自最后三个稀释度的试管中各取ImL稀释水加入空的灭菌培养皿中，每 各倾注15ml已溶化并冷却至45C左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即 放在桌上摇匀。 凝固后倒置于37C培养箱中培养24h。3菌落计数方法（1）先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌苔生长 时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。 若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可 将此一半的菌落数乘 2以代表全平板的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌 落数。（2）首先选择平均菌落数在 30300

5、之间的,当只有一个稀释度的平均菌落数 符合此范围时,则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数 （见表 26-1,例 1）。（3）若有两个稀释度的平均菌落数均在 30300之间,则按两者菌落总数之 比值来决定。若其比值小于 2,应采取两者的平均数；若大于 2,则取其中较小 的菌落总数（见表26-1，例2及例3）。（4）若所有稀释度的平均菌落数均大于数乘以稀释倍数（见表26-1,例4）。300，则应按稀释度最高的平均菌落（5）若所有稀释度的平均菌落数均小于乘以稀释倍数（见表26-1，例5）。30，则应按稀释度最低的平均菌落数30300之间，则以最近300或30的（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在 平均菌落数乘以稀释倍数 （见表 26-1,例 6）。五、实验报告1结果1）自来水 2）池水、 xx 或 xx 等2思考题1）从自来水的细菌总数结果来看，是否合乎饮