丙戊酸钠对氯硝西泮药物动力学的影响及机理

1、丙戊酸钠对氯硝西泮药物动力学的影响及机理摘要目的:研究丙戊酸钠(VPA)对氯硝西泮(CZP)的影响并对其机理进行初步探讨。方法:采用遗传性听源性癫痫(P77-PMC)大鼠,从药物动力学角度用高效液相色谱法测CZP的血药浓度,Omura和Sato法测肝微粒体P450酶的含量,透射电镜观察肝细胞超微结构的改变,SPSS/PC软件作最后的统计学处理。结果:VPA使CZP在用药后15,30,90,180min的血浓度非常显著的增高(P0.01),用药后120,240,360min的血浓度显著增高(P0.05)。使用3P87软件计算药物动力学参数,显示:VPA使CZP的T1/2,AUC,Cmax增高,C

2、l,Ke略有降低,其机制是VPA可使肝细胞滑面内质网数量减少,且有破坏,致肝微粒体P450酶含量显著降低(P0.05)。结论:提示临床上当此二药合用时,应注意结合CZP的血药浓度监测调整剂量。关键词氯硝西泮,药物动力学,P450酶,滑面内质网Effects of sodium valproate on clonazepam in pharmacokinetics and its related mechanismWang Xiaodong(Chinese Peoples Armed Police Forces General Hospital,Beijing 100039)The effect

3、s of sodium valproate on clonazepam in pharmacokinetics was studied using P77-PMC(genetic aural epilepsy model)rats.The results showed that sodium valproate increased the concentration of clonazepam at every time point(P0.05),Half life,area under curve and peak concentration of clonazepam were incre

4、ased,but clearance,apparent volume of distribution,elimination rate contant of clonazepam were decreased signifiantly.The content of hepatic microsomal P450ase and numbers of smooth endoplasmic reticlum of sodium valproate were decreased.It is suggested that the blood concentration of clonazepam sho

5、uld be kept in mind to the adjust dosage of clonazepam when sodium valproate is administrated in combination with clonazepam in clinic.Key wordsclonazepam,pharmacokinetics,P450 ase,smooth endoplasmic reticulum癫痫是儿科神经系统的常见病,目前对该病的治疗仍以药物控制为主。对一些顽固性、难治性的癫痫用单一抗癫痫药无效的病例,须联合使用两种或两种以上的抗癫痫药,方可控制发作。本文从药物动力学的

6、角度研究了丙戊酸钠(Sodium Valproate,VPA)对氯硝西泮(Clonazepam,CZP)的影响,并从肝微粒体酶的生化指标(P450的含量)及肝内质网的超微结构的改变来探讨两药的相互作用机理。1材料与方法1.1材料选用了一种理想的癫痫模型即P77-PMC大鼠,雄性,300g左右,共48只,由北京医科大学实验动物部提供;HPLC不锈钢色谱柱0.6425cm,填料为YWG-C18(无定型硅胶键合色谱柱),粒度为10 m(由北京潮声技术开发公司填装);岛津LC-9A高效液相色谱仪;CZP的标准品及内标氟硝西泮(由美国俄亥俄州立大学医学院儿童医院赠送)。1.2方法1.2.1分组及给药P7

7、7-PMC大鼠24只,随机分为两组:对照组(CZP组)和实验组(VPA+CZP组),每组12只;各组又分为6个亚组,每亚组两只。实验组每天给VPA200mg.kg-1灌胃。每天早9点一次性给予,连用8d;于第8天给CZP2.0mg.kg-1腹腔注射一次。对照组只给一次CZP2.0mg.kg-1,腹腔注射。1.2.2血标本的采集每亚组分别于给CZP后15,30,60,90,120,180,240,360,480,600min取血,共10次。前4次取自一只动物,后6次取自另一只动物,将血标本离心3000rmin-1,10min,分离血清放入4冰箱中,待提取测定药物血浓度。给药前CZP的血药浓度为零

8、。1.2.3血药浓度的测定采用王丽1等的HPLC法测CZP的血药浓度。VPA对CZP的干扰实验阴性。CZP的最小检测值为5ng.ml-1。标准曲线回归方程为:Y=0.004 9X-0.003 4,r=0.999 9。1.2.4药物动力学参数的计算采用以小动物为药物动力学研究对象的经典计算参数的方法。即取每亚组两只动物共10个时间点的血浓度,与给药前的浓度(0ng.5ml-1)连成药-时曲线,共6条曲线。由于每条曲线上的10个浓度来自两只动物,故取6条曲线同一时间浓度的均数代入3P87药物动力学程序,经SUN PC机处理,根据最优拟合原则选择房室模型,计算出两组CZP的药物动力学参数。1.3机制

9、探讨1.3.1肝微粒体P450酶的测定P77-PMC大鼠,雄性,300g左右,24只,随机分为三组:对照组,CZP组,VPA组,每组8只。对照组:不给药物;CZP组:给CZP2.0mg.kg-1.d-1腹腔注射,连续7d;VPA组:给VPA200mg.kg-1.d-1灌胃,连续7d,于第8天禁食12h,快速断头处死,立即在冰浴上进行肝脏门静脉冰盐水灌洗至肝呈土黄色,在肝尖部取肝组织2g制成匀浆,离心9000g,4,1h,弃去上清液,制成肝微粒体。用Lowry2法测微粒体蛋白含量,Omura和Sato法3测肝微粒体P450酶的含量。1.3.2肝脏超微结构的观察每测肝微粒体标本的同时,取3块0.5

10、mm0.5mm0.5mm的肝组织,常规电镜法固定,超薄切片,JEM-100CX透射电镜观察肝超微结构、滑面内质网的改变。2结果2.1VPA对CZP药物动力学参数的影响T1/2、AUC、Cmax增高,Cl,Ke略有降低(见表1)。表1VPA对CZP药物动力学参数的影响分组T1/2hAUCng.5h.5ml-1TmaxhCmaxng.5ml-1ClVdCZP组1.2188.370.27128.840.00320.0032VPA+CZP1.5211.200.25137.680.00290.0038注:Cl单位为(mg.5ml-1)/(ng.5ml-1);Vd单位为(mg.5kg-1)/(ng.5ml

11、-1) 2.2VPA对CZP的血药浓度的影响连续灌服VPA至第8天,一次性给予CZP后,VPA使CZP多个时间点的血药浓度显著增高(P0.05),见表2。表2VPA对CZP的血药浓度的影响(s,n=6)时间hCZP组ng.ml-1VPA+CZP组ng.5ml-10000.25124.06.7181.712.7*10.50113.610.984.811.2*21.0060.212.961.22.01.5039.73.149.44.2*22.0024.62.230.63.9*33.0017.70.115.41.2*24.006.81.59.21.2*36.004.11.46.10.9*38.002

12、.60.53.70.910.001.00.01.91.0注:*1P0.01*2P0.01*3P0.05 2.3影响机制2.3.1生化机制CZP对P450酶的含量无显著影响,VPA使其含量显著降低(P0.05),见表3。表3CZP和VPA对鼠肝P450酶含量的影响nmol.5mg-1(s,n=8)分组对照组CZP组VPA组P450酶0.370.040.340.070.270.03*1注:*1与对照组相比P0.05 2.3.2形态学机制CZP组:肝组织滑面内质网形态与对照组比无明显差别。VPA组:滑面内质网数量减少、体积变小,有轻度破坏。3讨论3.1VPA对肝微粒体P450酶有抑制作用,所作用的亚型尚不清楚。本实验结果显示VPA使P450酶含量显著降低(P0.05),肝细胞内质网减少,并有破坏,是VPA影响CZP代谢的机制。VPA使CZP血浓度增高,T1/2、AUC、Cmax增高,Cl和Ke略有降低。3.2VPA主要是通过抑制GABA的降解,使GABA的含量升高;并可降低门冬酰胺酶的含量而起到抗癫痫作用。临床上应注意,VPA与CZP合用时,CZP的血浓度比单用时显著增高,可引起困倦、肝脏受损、转氨酶升高,应注意结合临床及血浓度监测调整剂量。作者单位：王晓东(武警总医院北京100039)王丽(北京医科大学附属第一院)参考文献1王丽,徐中曦,程燕