氟尿嘧啶磁性微球的制备及对人胰腺癌细胞的抑制作用

1、氟尿嘧啶磁性微球的制备及对人胰腺癌细胞的抑制作用         08-07-19 17:09:00     编辑：studa20        作者：孙诚谊 喻超 刘建刚 王玉芝 钱志勇  【摘要】  目的 研究5氟尿嘧啶磁性白蛋白微球(5fluorouracil magnetic albumin microspheres，5FUMAMS)的制备及其联合恒定外磁场体外对人胰腺癌PC3细

2、胞的生长抑制作用。方法 乳化热固化技术制备5FUMAMS并检测其理化性质，MTT比色分析法观察5FUMAMS联合恒定磁场体外对人胰腺癌细胞的抑制作用。结果 5FUMAMS平均粒径为2001000 nm，呈球形，磁响应性良好，载药量为每毫克微球含5FU 50g；单纯磁场组和各种浓度的空白MAMS对肿瘤生长无影响；相应药物浓度的5FUMAMS与5FU抑制率(inhibition ratio，IR)相似，差异无统计学意义(P>0.05)；相应药物浓度的5FUMAMS联合恒定外磁场与单纯的5FUMAMS和游离5FU相比，IR明显提高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论MAMS可作为安全

3、的药物载体；5FUMAMS制备方法和剂型的改变不影响5FU的抗癌活性；联合恒定外磁场5FUMAMS的肿瘤细胞抑制效应显著增强。 【关键词】  5氟尿嘧啶磁性白蛋白微球； 恒定磁场； 胰腺癌PC3细胞    【Abstract】  Objective  To prepare 5fluorouracil magnetic albumin microspheres (5FUMAMS) and discuss its inhibitive action combined with constant external magnetic fiel

4、ds on human pancreatic carcinoma PC3 cells in vitro. Methods  5FUMAMS was prepared by emulsionheat stabilization technique and their physicochemical property detected. The inhibition rates (IR) of 5FUMAMS combined with constant external magnetic fields were assayed by using MTT assay.Results

5、60; The mean diameter of 5FUMAMS was 2001000 nm, with round shape, good magnetic response and 5FU loading of 5%. The tumor growth showed no difference on tumor cells in both pure magnet group and MAMS group. The IR of 5FUMAMS and 5FU at same drug concentration was similar, with insignificant statist

6、ical difference (P>0.05). Compared with pure 5FUMAMS and free 5FU, IR was significantly increased after 5FUMAMS was combined with constant external magnetic fields (P<0.05). Conclusions  MAMS is a safe drug carrier. The preparation method and changes of dosage form exert no action on anti

7、cancer activity of 5FU. The inhibitive action is significantly enhanced after 5FUMAMS is combined with constant external magnetic fields.    【Key words】  5fluorouracil magnetic albumin microspheres;  Constant magnetic fields;  Pancreatic carcinoma PC3 cells  &

8、#160; 胰腺癌早期诊断困难，具有病程短、进展快、病死率高的特点， 中位生存期约6个月， 总体5年生存率低于5%1。目前对胰腺癌仍采用手术切除联合化疗的综合治疗方案。近年来，运用抗癌药物磁性纳米微球联合磁场治疗肿瘤取得可喜进展。本实验制备5氟尿嘧啶磁性白蛋白微球(5fluorouracil magnetic albumin microspheres， 5FUMAMS)并检测其理化性质，分析其联合恒定磁场对人胰腺癌PC3细胞的生长抑制作用，探讨联合磁场后5FUMAMS抑瘤作用增强的机制。    1  材料与方法    1.1

9、  材料    5FU，纯度99%，购自比利时Acros公司；牛血清白蛋白购自美国Sigma公司；超声乳化仪购自江苏金坛医疗仪器厂；SSX550型扫描电子显微镜购自日本；752型紫外可见分光光度计、Multiskan MK3型酶标仪购自上海分析仪器总厂；恒定磁场由北京新海空科技开发中心设计提供；胰腺癌PC3细胞系由解放军302医院肝胆研究中心赠送。    1.2  方法    1.2.1  5FUMAMS的制备：采用乳化热固化技术，取牛血清白蛋白250 mg溶于10 g/L

10、5FU蒸馏水溶液中，添加磁流体0.2 ml，再与100 ml含10%司盘80的蓖麻油混合，搅拌10 min，再超声乳化。另取蓖麻油100 ml加热至160 ，在搅拌下加入上述乳浊液，160 保温10 min，然后搅拌6 h。加乙醚200 ml脱脂，离心，弃去油相，沉淀依次用乙醚，乙醇漂洗，最后置换在蒸馏水中，冷冻干燥48 h，即成微球粉末。    1.2.2  5FUMAMS磁响应：将5FUMAMS按浓度比为110加入0.1%吐温80生理盐水中，超声分散，倒置显微镜下观察微球分散情况；同时，取混悬液1滴滴于载玻片上，然后将1块表面强度为3000高斯的铷铁

11、硼磁铁置于载玻片一端，镜下观察微球运动及聚集情况。    1.2.3  5FUMAMS的形态与大小：将经超声分散的5FUMAMS悬液滴于玻片上，空气干燥后真空喷镀胶体金，扫描电镜下观察。    1.2.4  5FUMAMS的5FU含量测定：首先绘制5FU标准曲线，再测定微球中5FU的含量。精密称取5FU 20.5 mg溶于1 mol/L NaOH中，加蒸馏水定容到100 ml，配制成205 mg/L 5FU储备液。精密移取5FU储备液0、25、50、100、200、400、600、800、1000 l于10 ml容

12、量瓶中，0.1 mol/L HCl定容到10 ml。药物浓度为0、0.512 5、1.025、2.05、4.10、8.20、12.30、16.40、20.50 mg/L紫外分光光度计测定不同浓度药物的吸光度，将数据进行线性拟合，求出5FU的标准曲线方程为A0.007 320.055 08C(相关系数0.999 95)。微球中5FU含量测定采用碱消化法，精密称取5FUMAMS和MAMS各10 mg，分别置于10 ml离心管内，加入5 ml 1 mol/L NaOH溶液。沸水浴水解2 h，冷却，用0.1 mol/L HCl定容到5 ml，在磁场强度为4000高斯的磁场下，进行磁分离4 h。分别取上清液0.5 ml，置于10 ml容量瓶中，0.1 mol/L HCl定容。以MAMS的上清液为对照，紫外分光光度计256 nm处测其吸光度。上述过程重复3次。带入标准曲线方程，求微球的载药量。    1.2.5  肿瘤细胞生长抑制实验：实验分5组。A组：5FUMAMS联合磁场组；B组：5FUMAMS组；C组：游离5FU组；D组：MAMS组；E组：单纯磁场组。参照5FU血浆峰浓度10.0 mg/L