三碘甲状腺原氨酸和缺血预适应对大鼠小肠缺血再灌注损伤的作用

1、    三碘甲状腺原氨酸和缺血预适应对大鼠小肠缺血再灌注损伤的作用        【摘要】目的了解缺血预适应和T3对小肠缺血再灌注损伤的作用。方法观察缺血预适应和T3对大鼠小肠缺血再灌注后肠组织腺苷酸含量和肠粘膜损伤的影响。结果T3组和预适应组(预适应为10分钟缺血后15分钟再灌注)的小肠组织ATP及总腺苷酸含量均明显高于对照组(P0.05)，肠粘膜损伤亦明显减轻；且T3组比预适应组肠粘膜损伤更轻(P0.05)，动物存活率增加(P0.05)。结论T3和缺血预适应对小肠缺血再灌

2、注损伤有一定保护作用，且T3效果更佳。【关键词】三碘甲状腺原氨酸缺血预适应缺血再灌注损伤腺苷酸类肠粘膜 Effects of ischemic preconditioning and triiodothyronine on small intestinal ischemia/reperfusion injuryLIU Pengxi, LIU Qiang, LU Xinsheng, et al.Department of Surgery, Xiang Ya Hospital, Hunan Medical University, Changsha, 410008【Abstract】Objectiv

3、eTo assess the effects of ischemic preconditioning (IP) and triiodothyronine (T3) on small intestinal ischemia/reperfusion injury. MethodTo observe the influence of IP and T3 on rat small intestinal adenine nucleotide contents and mucosal lesion after ischemia/reperfusion.ResultsThe small intestinal

4、 ATP and total adenine nucleotide contents of T3 group and IP group were significantly increased as compared with those of control group (P0.05), the intestinal mucosal lesion was also alleviated (P0.01), and the mucosal lesion of T3 group alleviated more than that of IP group (P0.05), the survival

5、rate of T3 group was also increased as comparing with IP group. ConclusionsT3 and IP both have certain protective effect of small intestinal inchemia/reperfusion injury, and T3 has a better effect than IP.【Key words】Ischemia/reperfusion injuryIschemic preconditioningIntestinal mucosaTriiodothyronine

6、Adenine nucleotides多种应激状态如休克、创伤时均可出现血清T3水平下降1,2，且低T3综合征被认为是疾病危象之一3。有作者用T3治疗肝门阻断的动物，改善了肝门阻断时的血流动力学变化4。小肠缺血再灌注时也出现血压下降，发生肠源性休克，补给外源性T3能否改善这种状况尚未见报告。业已确认，缺血预适应(Ischemic Preconditioning, IP)对心肌缺血再灌注损伤有一定的保护作用5，但目前IP在小肠方面的研究甚少，已有的几篇报告显示IP对小肠缺血的作用存在不同意见6,7。本研究采用大鼠小肠缺血再灌注的动物模型，同时观察IP和T3对小肠缺血再灌注损伤的作用，并初步探讨其

7、可能的作用机制。材料和方法一、动物分组与操作方法选用体重220280g,雄性大鼠28只，术前禁食24小时，允许自由饮水。以3%戊巴比妥钠按1ml/kg体重经腹腔注射进行麻醉。分离出一侧股静脉，用22号套管针穿刺插管。经上腹正中切口入腹，分离出肠系膜上动脉(SMA)。动物被随机分为4组： T3组，7只，阻断与再灌注各1小时，自阻断开始按1.0g.kg-1.h-1经股静脉持续输入T3 2小时； 预适应组(IP组)，7只，夹闭SMA10分钟和松夹15分钟作为预适应，随后阻断和再灌注各1小时； 对照组，7只，阻断与再灌时间同上； 假手术组，7只，分离SMA后不作阻断，观察2.5小时取标本。所有动物均于

8、阻断开始以微量输液泵按10ml.kg-1.h-1经股静脉输入5%葡萄糖盐水两小时。二、标本采集与检测(一) 小肠组织ATP、ADP、AMP含量：再灌注60分钟时于中段小肠取约0.3g肠组织，挤尽肠内容物后立即置液氮中保存，用高效反相液相色谱法测定ATP、APP、AMP含量，并按公式计算出腺苷酸池(AP)及能荷(EC)，AP=ATP+ADP+AMP,EC=ATP+(1)/(2)ADPAP。(高效反相液相色谱仪为岛津LC-9A型，ATP、ADP及AMP标准品购自Sigma公司)。(二) 小肠损伤程度分级：再灌注60分钟时取少许中段小肠组织，置入10%福尔马林液中固定，石蜡包埋切片，HE染色，光镜下

9、按文献标准8对标本小肠损伤情况进行分级。上述取组织后的残端用显微器械行端端吻合，检查无梗阻及肠液漏出后关腹。(三) 动物存活率：观察动物术后72小时存活率。三、统计学处理计量资料x±s表示。采用方差齐性检验、方差分析及q检验，肠损伤分级用秩和检验比较，动物存活率采用直接概率法。显著性水准为=0.05。结果一、各组再灌注末时的小肠腺苷酸含量假手术组、T3组及预适应组的ATP、AP含量均显著高于对照组(P0.05)，但三者间无明显差异(P0.05)。详见表1。表1各组再灌注末ATP、AMP、AP含量(mol/g湿重)及EC值分组ATPADPAMPAPECT3组1.65±0.60

10、*0.37±0.170.26±0.042.28±0.500.80±0.07IP组1.52±0.39*0.37±0.130.25±0.112.14±0.330.79±0.05对照组0.97±0.170.33±0.090.21±0.051.51±0.190.75±0.03假手术组1.77±0.39*0.25±0.030.29±0.062.31±0.41*0.82±0.04注：*与对照组相比P0.05与对照组相比

11、P0.01二、各组的肠粘膜损伤分级T3与IP组的肠粘膜损伤明显较对照组为轻(P0.01),且T3组比IP组的损伤更轻(P0.05)，但此二组均较假手术组损伤严重(P0.01)。详见表2。三、动物术后72小时存活率 表2各组动物肠粘膜损伤比较分组肠粘膜损伤分组0T3组*#034000IP组*013300对照组001240假手术组*430000注：*与对照组比较P0.01,与假手术组比较P0.01#与IP组比较P0.05假手术组与T3组术后72小时动物均存活(7/7)，而IP组与对照组的术后72小时存活率分别为43(3/7)和29%(2/7)，均明显低于前二组(P0.05)。 讨论小肠缺血后，很快

12、即出现肠粘膜的通透性增加，肠粘膜发生缺血性损伤，肠腔内毒性物质和肠缺血本身的毒素以及肠道细菌均可吸收人血，造成机体的多器官功能障碍和感染。大片的小肠缺血坏死是外科临床的危急重症之一，其处理困难，预后较差。许多作者对小肠缺血的保护进行过研究，但仍无满意的结果。休克、创伤、手术等应激状态下均可出现血清T3下降1,2，若能补给外源性T3有可能改善疾病转归4。T3可直接与线粒体内膜上的特异受体结合，使ATP合成增加。有作者发现补给T3后可在半小时内使肝脏的ATP增高9。本实验结果显示T3组动物再灌注末时肠组织ATP、AP含量较对照组显著增高，且肠粘膜损伤减轻，动物存活率明显增加，表明T3对小肠缺血再灌

13、注损伤有较好的保护作用。T3还加强心肌收缩力，增加心输血量，改善组织缺血缺氧状态。本实验中T3组比IP组动物的肠粘膜损伤更轻，动物存活率提高，而其腺苷酸含量并无明显差异，提示T3可能还通过改善缺血再灌注时的血流动力学紊乱，减轻松夹后的肠源性休克从而发挥作用。近年来缺血预适应(IP)已被证实在心肌缺血方面有保护作用5。但在小肠研究方面目前仅有的几篇报告显示IP对小肠缺血的作用存在着不同的看法，有的认为IP对小肠缺血有保护作用6，有的则认为是有害作用7,且其机制尚不清楚。本实验以肠组织腺苷酸含量作为主要指标，观察IP对小肠缺血再灌注损伤的作用，结果发现IP组再灌注末小肠组织ATP、AP含量较对照组

14、增高，肠粘膜损伤减轻，说明IP对小肠缺血再灌注损伤有一定的保护作用。其机制可能与心肌保护作用10相似，是通过改善缺血再灌注时肠组织内ATP水平，从而减轻肠粘膜损伤。作者单位：410008长沙市，湖南医科大学湘雅医院普外科参考文献1. Vitek V, Shatney CH, Lang DJ, et al. Thyroid hormone responses in hemorrhagic shock: study in dogs and preliminary findings in humans. Surgery, 1983,93:768-777.2. Aun F, Medeirosnelo

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