杨梅素分散片对大鼠实验性脑缺血的保护作用及对血栓形成的影响

1、杨梅素分散片对大鼠实验性脑缺血的保护作用及对血栓形成的影响         作者：覃洁萍，王乃平，钟正贤, 陈学芬, 李燕婧，张炜 【摘要】 目的研究杨梅素分散片对大鼠实验性脑缺血的保护机制及对血栓形成的影响。方法采用双侧颈总动脉结扎法制备大鼠实验性全脑缺血再灌注损伤模型，通过测定大鼠脑含水量，超氧化物歧化酶（SOD）、单胺氧化酶(M               &#

2、160;        作者：覃洁萍，王乃平，钟正贤, 陈学芬, 李燕婧，张炜【摘要】  目的研究杨梅素分散片对大鼠实验性脑缺血的保护机制及对血栓形成的影响。方法采用双侧颈总动脉结扎法制备大鼠实验性全脑缺血再灌注损伤模型，通过测定大鼠脑含水量，超氧化物歧化酶（SOD）、单胺氧化酶(MAO)的活性和丙二醛(MDA)、乳酸(LA)的含量，观察杨梅素分散片对大鼠实验性脑缺血的影响；采用体内静脉血栓形成法,观察杨梅素分散片对体内静脉血栓形成的影响；并研究其对血小板聚集的影响。结果与模型组相比，杨梅素分散片各剂量组 (140，70，3

3、5 mg/kg)均可显著改善脑水肿、减少过氧化脂质的形成，减少乳酸的聚积，并对单胺氧化酶有抑制作用；显著减轻大鼠静脉血栓重量；显著抑制ADP诱导的血小板聚集。结论 杨梅素分散片对大鼠实验性脑缺血具有明显保护作用，并有明显抗血栓形成作用，机制可能与其抑制脂质过氧化物损害及提高抗氧化酶活性、改善凝血状态、抑制血小板依赖性血栓的形成有关。 【关键词】  杨梅素分散片； 实验性脑缺血； 血栓形成； 血小板聚集Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of Myricetin Dispersible Tablets on experimental

4、cerebral ischemia-reperfusion injury in rats and thrombosis formation.MethodsExperimental cerebral ischemia-reperfusion injury model was induced by ligation bilateral common carotid arteries. The protective effect of myricetin dispersible tablets was observed by detecting the content of cerebral wat

5、er, SOD and MAO activities，MDA and LA contents. ResultsIn contrast with model group, Myricetin Dispersible Tablets(140 mg/kg，70 mg/kg and 35 mg/kg) could significantly decrease the cerebral water content, MDA and LA contents, as well as the weight of venous thrombus , suppress MAO activity, and sign

6、ificantly increase SOD activity. ConclusionMyricetin Dispersible Tablets may protect cerebrum from ischemic injury by suppressing lipid peroxidation , increasing antioxidase activity, suppressing platelet aggregation and thrombus formation.Key words：Myricetin Dispersible Tablets;  Experimental

7、cerebral ischemia;  Thrombosis formation;  Platelet aggregation     杨梅素(myricetin)，又称杨梅树皮素，是一种天然黄酮醇类化合物，为杨梅树皮的主要化学成分，也是广西藤茶中的主要有效成分之一，并广泛存在于许多天然植物、水果和茶叶中。近年来研究发现，杨梅素可抑制血小板活化因子（PAF）介导的兔血小板聚集、5-羟色氨（5HT）释放及血小板内钙离子浓度升高, 从而起到保护心血管的作用，且实验结果表明其抗PAF作用比传统活血化淤中药红花的有效成分羟基红花黄色素作用强，其作用机理

8、与PAF受体拮抗剂银杏总内酯相似，可作为一种新的PAF受体拮抗剂1。目前,美国International Food Information Council Foundation （IFIC）已将杨梅素列为功能性食品，并应用于医药、食品、保健品和化妆品中。杨梅素分散片是我们课题组正在研究的新药制剂，它是用从广西藤茶中提取得到的杨梅素为主要原料研制而成的。本实验旨在研究杨梅素分散片对实验性脑缺血的保护作用及对体内血栓形成的影响，为其新药开发和临床应用提供科学依据。1  器材1.1  药物杨梅素分散片，于广西中医学院制剂教研室制备，批号060820，实验时用蒸馏水研磨配制成不同浓

9、度药液备用；复方丹参片，安徽华陀国药厂产品，批号20060512；阿司匹林，湖南新汇制药有限公司产品，批号060602；盐酸肾上腺素注射液，天津药业集团新郑股份有限公司产品，批号070401。1.2  试剂超氧化物歧化酶（SOD）测试盒，批号20070315；丙二醛（MDA）测试盒，批号20070316；单胺氧化酶（MAO）测试盒，批号：20070320；乳酸（LA）测试盒，批号20070317；总蛋白（TP）测试盒，批号20070319。均为南京建成生物工程研究所生产。二磷酸腺苷（ADP），上海国药集团化学试剂有限公司产品，批号20060624。1.3  动物KM种小鼠，

10、1822 g；Wistar种大鼠，体重200250 g。清洁级，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号SCXK桂20030003。动物按性别分笼饲养于有空调的实验动物室内，室温(22±1),相对湿度(60±5)%。自由饮水和喂标准颗粒饲料。1.4  仪器电热水浴恒温箱，上海医疗器械三厂生产；722型光栅分光光度计，上海第三分析仪器厂生产；MDK-3200型全自动血流变测试分析仪, 重庆麦迪克科技开发有限公司产品；BS631型血小板聚集仪，北京生化仪器厂生产；美国PE Lambda 12 型紫外分光光度计。2  方法2.1  杨梅素分散片对大鼠

11、急性脑缺血再灌注损伤的保护作用2.2  杨梅素分散片大鼠体内静脉血栓形成的影响3取Wistar大鼠50只，雌雄各半，体重200250 g，随机分为空白对照组，复方丹参片组（1.2 g/kg）,杨梅素分散片高、中、低剂量（140，70，35 mg/kg）组，每组10只。各组均灌胃相应药液，1次/d，连续7 d，末次给药后1 h，大鼠以10水合氯醛腹腔注射麻醉，于腹中线切开皮肤约3 cm，分离下腔静脉，于左肾静脉下方用粗线结扎下腔静脉，缝合腹壁。4 h后，重新打开腹腔，在结扎下方2 cm处夹闭管腔，将该段管腔内血液吸尽，剖开管腔，取出血栓，放在滤纸上，吸干血液，用微量电子天秤称取血栓湿重

12、(mg)。以血栓重量为评价指标，测定各给药组对静脉血栓形成的影响。2.3  对体外ADP诱导大鼠血小板聚集的影响4取体重200250gWistar大鼠，用10水合氯醛3 mlkg体重腹腔注射麻醉后，剖开腹腔，从腹主动脉取血，注入盛有3.8%枸椽酸钠溶液试管中，轻轻摇匀，以1 000 r/min离心5 min，吸取上清液为富血小板血浆（PRP），剩余血继续以3 000 r/min离心10 min ，吸取上清液为贫血小板血浆（PPP）。将BS631型血小板聚集仪打开，预热30 min后，用PRP调零（0%），用PPP调幅度（100%）。测定时对照管取PRP 0.4 ml及生理盐水20 l，给药管取0.4 ml