小剂量环磷酰胺治愈荷膀胱癌小鼠过程中外周血血小板计数的动态变化及意义

1、小剂量环磷酰胺治愈荷膀胱癌小鼠过程中外周血血小板计数的动态变化及意义作者：李墨林, 贾玉杰, 姜妙娜, 舒晓宏, 李传刚* 作者单位：大连医科大学: 基础医学院病理生理教研室, 药学院, 附属二院泌尿外科, 辽宁 大连 116044【摘要】 目的: 建立环磷酰胺(CTX)治愈荷膀胱癌T739小鼠的动物模型, 观察外周血象特别是血小板计数在化疗治愈肿瘤中的动态变化及其意义。 方法: 给正常T739小鼠皮下接种小鼠可移植性膀胱移行细胞癌组织, 建立荷膀胱癌的小鼠模型。接种后第7天, 荷瘤小鼠腹腔内分别注入15、 40、 100 mg/kg的CTX, 等量生理盐水对照, 确定CTX治愈肿瘤的量效关系

2、。然后再取12只荷瘤小鼠, 随机分成2组, 15 mg/kg CTX单次腹腔内注射, 等量生理盐水对照, 分别在用药后6 h、 用药后第2、 4、 9、 14天内眦静脉取血, 进行血常规检测, 分析荷瘤小鼠外周血象的动态变化。 结果: 15100 mg/kg CTX治疗后2周内, 荷瘤小鼠肿瘤生长受抑制或肿瘤结节缩小的速率与所用CTX的剂量呈正相关; CTX治疗后2月, 荷瘤小鼠的存活率与所用CTX的剂量呈负相关。15 mg/kg CTX单次腹腔内注射在治愈多数荷瘤小鼠的同时对外周血象无明显抑制作用。用药后6 h 治疗组荷瘤鼠外周血血小板计数为(1483.4184.4)109/L, 明显高于对

3、照组小鼠(1086.681.0)109/L, 两组数据比较具有统计学意义(P0.05)。 结论: 15 mg/kg CTX可治愈多数荷膀胱癌T739小鼠。 单剂量CTX治疗后6 h荷瘤小鼠外周血血小板计数的一过性增高可能与其抗肿瘤作用有关。【关键词】 环磷酰胺 肿瘤治愈 膀胱癌 T739小鼠 血小板计数Changes and significance of peripheral blood platelet count in tumor shrinkage induced by a low dose of CTX in T739 miceLI Molin, JIA Yujie, JIANG M

4、iaona, SHU Xiaohong, LI Chuangang*Pathophysiology Department of Dalian Medical University, Dalian 116044, ChinaAbstract AIM: To establish a mouse model for BTT739 tumorbearing mice cured by a low dose of cyclophosphamide (CTX). And then to observe the dynamic changes and significance of peripheral b

5、lood counts especially blood platelet count during tumor shrinkage induced by a low dose of CTX in T739 mice. METHODS: Mouse bladder carcinoma tissues were inoculated subcutaneously into T739 mice. Seven days later, different doses of CTX or the same volume of NS were administered intraperitoneally

6、to treat these tuomrbearing T739 mice. Tumor sizes were observed and recorded subsequently to find out the minimal dose of CTX that could cure most of these tumorbearing mice. Then another 12 tumorbearing mice were randomly divided into 15 mg/kg CTX treatment group and control group. Blood samples w

7、ere obtained from orbital venous sinus on different times after CTX treatment. Complete blood counts were performed and the relationship between peripheral blood platelet counts and tumor shrinkage was analyzed. RESULTS: Within 2 weeks after CTX treatment, the speed of tumor shrinkage had a positive

8、 relationship with the dose of CTX used; but the survival rate of the tumorbearing mice had a negative relationship with the dose of CTX used in 2 months after CTX treatment. 15 mg/kg CTX could cure most of the tumor bearing mice, while it had no remarkably inhibitive effects on peripheral blood cel

9、ls. The perpherial platelet count increased to (1483.4184.4)109/L in mice 6 h after CTX treatment. There was significant difference compared with that in mice of control group (1086.681.0)109/L (P0.05). CONCLUSION: CTX 15 mg/kg could cure most of bladder tumorbearing T739 mice. The transient increas

10、e of the peripheral platelet count in 6 h after CTX treatment may relate to the antitumor effects of CTX.Keywordscyclophosphamide; tumor shrinkage; bladder carcinoma; T739 mice; platelet count恶性肿瘤发病率逐年增加, 化疗已经成为各种晚期恶性肿瘤有效治疗的基础。尽管新的化疗药物不断涌现, 根据药理学研究成果制定的肿瘤大剂量联合化疗方案并没有明显提高肿瘤患者的5年存活率。治疗后肿瘤的复发和转移是多数恶性肿瘤

11、患者的主要死因。越来越多的证据显示肿瘤细胞、 血管内皮细胞和血小板之间的相互作用可能与肿瘤转移的发生、 发展密切相关1。尽管临床研究已经发现血小板计数的变化可作为肿瘤发生、 发展、 疗效及预后判断的参考指标2, 3, 但是血小板计数对恶性肿瘤化疗预后的评估尚未见报道。以往本研究组制备出多种单一剂量化疗药物治愈荷瘤小鼠的动物模型4, 发现化疗后荷瘤小鼠外周血血小板计数的一过性增高可能与细胞周期特异性化疗药物5氟尿嘧啶(5FU) 发挥抗肿瘤作用、 使肿瘤结节的消退或肿瘤的治愈有关5。为进一步证实外周血血小板计数的变化在化疗治愈肿瘤中的意义, 本研究中选用细胞周期非特异性化疗药物环磷酰胺(cyclo

12、phosphamide, CTX)来制备化疗治愈荷瘤小鼠的模型, 观察CTX治疗后荷瘤小鼠外周血象特别是血小板计数的动态变化, 为深入研究化疗治愈肿瘤的作用机制奠定基础。1 材料和方法1.1 材料 健康近交系T739小鼠(68周龄, 体质量1822 g, 雌雄兼用, 性别和年龄相匹配)由中国医学科学院肿瘤研究所实验动物中心提供。小鼠可移植性膀胱移行细胞癌株BTT739由上海市第一人民医院提供。环磷酰胺(CTX) 0.2 g/瓶(产品批号06111521), 购自江苏恒瑞医药股份有限公司。1.2 方法2 结果2.1 单剂量CTX对荷膀胱癌T739小鼠体内治疗的效果 15100 mg/kg的CTX

13、单次腹腔内注射后, 各组荷瘤小鼠肿瘤结节直径的变化见图1。由图可见不同剂量CTX治疗后2周内, 各组荷瘤小鼠肿瘤生长的速度明显受到抑制, 肿瘤生长受抑制的程度与CTX的使用剂量呈正相关。CTX治疗后各组小鼠的存活率曲线见图2。由图可见CTX治疗后2月, 100 mg/kg CTX治疗组和对照组的荷瘤小鼠全部死亡, 40 mg/kg CTX治疗组中仅有2只荷瘤小鼠肿瘤消退并继续存活, 而在15 mg/kg CTX治疗组的荷瘤小鼠中有6只荷瘤小鼠肿瘤消退并治愈, 与其他治疗组比较差异有统计学意义(P0.05); 用药后第2天, 荷瘤小鼠外周血Hb浓度仍略高于对照组荷瘤小鼠(P0.05); CTX用

14、药后第4天, 荷瘤小鼠外周血Hb浓度为(99.344.16) g/L, 明显高于对照组荷瘤小鼠(91.343.06) g/L, 差异具有统计学意义(P0.05); 在CTX用药后第9天, 荷瘤小鼠外周血Hb浓度比对照组荷瘤小鼠(114.710.08) g/L略低, 为(105.3411.0) g/L, 但无统计学意义; CTX 治疗后第14天, 荷瘤小鼠外周血Hb浓度为(10814.42) g/L, 明显低于对照组荷瘤小鼠(13915.56) g/L, 差异具有统计学意义(P0.05)。15 mg/kg CTX对外周血全血细胞的影响表现在: CTX治疗后6 h, 荷瘤小鼠外周血RBC、 WBC

15、和Plt计数分别为(9.860.64)1012/L、 (12.383.96)109/L和(1483.4184.4)109/L, 与对照组荷瘤小鼠(9.00.6)1012/L、 (10.541.74)109/L和(1086.681.0)109/L比较, 其中两组荷瘤小鼠外周血RBC、 WBC计数的差异无统计学意义, 而Plt计数的差异具有统计学意义(P0.01)。用药后第2、 4、 9、 14天治疗组荷瘤小鼠外周血RBC、 WBC和Plt计数的变化与对照组小鼠比较差异无统计学意义。表1 治疗后荷瘤小鼠外周血全血细胞的动态变化(略)Tab 1 Dynamic changes of peripher

16、ial blood cell count in tumorbearing mice after 15 mg/kg CTX treatmentaP0.05), 但CTX用药后14 d, 治疗组荷瘤小鼠外周血RBC计数和Hb浓度较对照组小鼠略高, 而用药后914 d, 治疗组小鼠外周血RBC计数和Hb浓度略低于对照组小鼠, 其原因考虑可能与CTX的消化道毒副作用, 使荷瘤小鼠进食、 进水减少有关。15 mg/kg CTX对荷瘤小鼠血小板计数的影响表现在: CTX用药后6 h荷瘤小鼠外周血Plt计数达(1483.4184.4)109/L, 与对照组小鼠比较有明显差异(P0.01); CTX用药后第2

17、天, 荷瘤小鼠外周血Plt计数降为(532.648.4)109/L, 随后回升, CTX治疗后第9天Plt计数达(887.4279)109/L, 随后下降, 在治疗后14 d 降至(513250.4)109/L, 但治疗组小鼠Plt计数的动态变化与对照组小鼠(47437.4)、 (97056.4)和(810189.6)109/L比较差异均无统计学意义。小剂量CTX治疗后荷瘤T739小鼠外周血Plt计数在治疗后6 h“一过性”升高, 该结果与大剂量5FU治疗荷瘤C57/BL6小鼠外周血Plt计数在治疗后24 h“一过性”升高相一致6。从而进一步证实了化疗后24 h 内外周血Plt计数的“一过性”

18、升高与化疗药物发挥抗肿瘤作用、 抑制肿瘤生长或使肿瘤结节缩小有关。尽管15 mg/kg CTX用药后第9天外周血Plt计数较前有所回升, 但与对照组比较差异无统计学意义, 而大剂量5FU治疗后第11天荷瘤C57/BL6小鼠外周血Plt计数却出现第2次“一过性”升高, 因此, 化疗后12周荷瘤小鼠外周血Plt计数的“一过性”升高能否作为判断化疗疗效及化疗后机体免疫功能状态的参考指标仍有待于进一步探索。【参考文献】1 Warrell RP Jr, Bockman RS, Staszewski H, et al. Clinical study of a new antimetastatic compound, Nafazatrom (Bay g 6575): Effects on platelet consumption and monocyte prostaglandin production in patients with advanced cancerJ.