DNA提取各种缓冲液的配制

1、植物总 DNA 的提取一、所需仪器设备及消耗品剪刀、塑料袋（封口）、冰箱、棕色广口瓶（1000、500、200、100、50ml）、量筒（1000、500、100、10ml）、烧杯（1000、500、200、100ml）、pH试纸、电 子天平、高压灭菌锅、研钵、液氮罐（液氮） 、水浴锅、离心机、 移液器（1套）、 枪头（1ml、200ml、20口l）、枪头盒、离心管（1.5ml）（包括盒和架）、一次性 手套、电泳仪、电泳槽、塑料胶带（宽） 、微波炉、凝胶成像系统、垃圾桶、冰 盒（自制）、记号笔、单面刀片二、 所需化学药品及试剂CTAB NaCI、EDTA-Na 2fO Tris、冰乙酸、硼酸、

2、B-巯基乙醇、NaAc氯仿（三氯甲烷） 、异戊醇、 无水乙醇、 溴酚蓝、 琼脂糖、 蔗糖、溴化乙锭 （EB）、RNase NaOH HCl（浓）、ddHO三、 各种缓冲液的配制（一）2%CTA提取缓冲液（300ml）（高压灭菌）4mol/L的NaCI 35ml X3 =105ml1mol/L的Tris-HCl 10mlX3=30ml0.5mol/L的EDTA 4mlX3=12mlCTAB2gX3=6g（二）1XTE（母液pH8.0） （50ml）（高压灭菌）1mol/L的Tris-HCl（pH8.0）500口l0.5mol/L的EDTA（ pH8.0）100口l最后加ddHO定容到50ml工作

3、液为0.1XTE（45ml灭菌的ddHO中，加入5ml已灭菌的1XTE）（三）4mol/L的NaCI（150ml）（高压灭菌）35.055g的NaCI,力口ddHO120ml溶解，再加水定容到150ml（四）1mol/L的NaCI（400口l）（用于配制RNase储存液）取4mol/L的NaCI（已灭菌）100口I，力口300口I灭菌的ddHQ（五）3moI/L的NaAc溶液（pH5.2） （50ml）（高压灭菌）NaAc- 3H2O20.405g加ddH2O30mI用冰乙酸调节pH至5.2力口ddHO定容到50ml（六）RNase储存液（10mg/ml）（1ml）1mol/L的Tris-HC

4、l（pH7.5）10口l1mol/L的NaCI15口lRNase10mg沸水浴1520min（七）EB储存液（1mg/ml）EB 30mgddH2O 30ml磁力搅拌至完全溶解，装入棕色瓶，铝箔包裹，保存于室温。制胶时EB终浓度为0.5口g/ml（30ml力口15口I、40ml加20口I）（八）10XTBE缓冲液（电泳缓冲液）（高压灭菌）Tris碱54g硼酸27.5g0.5mol/L的EDTA（pH8.0）20ml以上溶于400ml的ddbbO中，在定容到500ml工作液为1XTBE或0.5XTBE（九）6X上样缓冲液（4C保存）0.25%的溴酚蓝（2.5mg/1ml 40%（w/v）的蔗糖水

5、溶液）40%（w/v）蔗糖水溶液（2g/5ml的ddHO,加热溶解，注：温度不能太高）（十）1mol/L的HCI溶液（不用灭菌）8.62 ml的浓盐酸，加灭菌ddHO 91.38ml，混匀，室温保存（100ml）。（-一）5mol/L的NaOH容液（50ml，10g的NaOH容于50ml灭菌的ddHhO中）（不 用灭菌）200g的NaOH溶于灭菌的ddHO中，定容至1000ml（十二）1mol/L的Tris-HCl（pH8.0）（100ml）（高压灭菌）12.11g的Tris碱80ml的ddHO加浓盐酸调节pH值至8.0（大约加4.2ml）（十三）0.5mol/L的EDTA（pH8.0）（50

6、ml）（高压灭菌）9.305g的EDTA-Na2H2O1g的NaOH磁力搅拌器剧烈搅拌40ml的ddHO最后加水定容到50ml，用NaOH调节pH值至8.0DNA定量用紫外分光光度计法，1 OD26050卩g/ml双链DNAPCR（聚合酶链反应）一、所需仪器设备及消耗品冰箱（4C、20C）、高压灭菌锅、离心机、移液器（1套）、枪头、枪头盒、PCRf（包括盒和架）、PCF仪、离心管（包括盒和架）、一次性手套、电泳仪、电泳槽、塑料胶带（宽）、微波炉、凝胶成像系统、垃圾桶、冰盒（自制）、记号笔、单面刀片二、所需化学药品及试剂质粒（阳性对照）、引物（1、2）、4XdNTR DNA模板、buffer（M

7、gCI2）、TaqDNA聚合酶、ddH2O琼脂糖、DNA标准样品 （DNA ladder） 、 溴化乙锭（EB、5XTBE电泳缓冲液（Tris、硼酸、EDTA三、PCF 反应体系与反应程序仅供参考成分母液浓度各成分加入量各成分终浓无离子水(口1 / 20口I)度9.7缓冲液10X21X(buffer)MgC225mmol/L1.21.5 mmoI/L4XdNTP2mmol/L20.2 mmol/L引物5pmoI/L20.5pmoI/LTacDNA聚 合酶5U/10.63U模板DNA20ng/口12.550 ng操作顺序：1水、4XdNTP混合2buffer、taqDNA聚合酶混合，、混合3加入

8、引物4混匀、分装PCRt5向每个PCRt加入模板DNAPCR扩增反应程序:94C预变性35min。进入循环：94C变性30s56C退火3045s72C延伸12min,3036个循环。循环结束后再72C延伸7min。外源脱水应答转录因子DREB基因在转基因小麦中的诱导型表达与抗旱生理效果In duced Expressi on ofDREBTra nscripti onal Factor and Study on ItsPhysiological Effects of Drought Tolera nee in Tran sge nic Wheat成分母液浓度各成分加入量各成分终浓无离子水(11/2511)度13?缓冲液10X2.51X(buffer)4XdNTP2mmol/L20.2 mmol/L引物15?1imol/L?引物25?1imol/L?TacpNA聚 合酶5U/10.2?1U模板DNA20ng/(111?50 ngPCR扩增反应程序：94C预变性5min。进入循环：94C变性45s45C退火45s72C延伸1min,35个循环。 循环结束后再72C延伸10min。一般PCR反应中引物的终浓度为0.21.0卩mol/L,1.0卩mol/L时，特异性