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文档简介

1、第一节DNA的重组DNA Recombination 一、同源重组发生在同源序列间的重组称为同源重组(homologous recombination,又称基本重组。是最基本的DNA重组方式,通过链的断裂和再连接,在两个DNA分子同源序列间进行单链或双链片段的交换。以E.coli的同源重组为例,了解同源重组机制的Holliday模型。 受体 第二节重组DNA技术DNA Recombination Technique基因工程诞生的历史背景:1973年是基因工程诞生的元年。1. 1944年Oswald T.Avery等的肺炎球菌转化证明了DNA是遗传信息携带者。2. 1953年James Wats

2、on和Francis Crick 两人提出了DNA结构的双螺旋模型,揭示了遗传物质自我复制的机制。3. 1961-1965年,科学家破译了生物界全部64个遗传密码,发表了划时代的遗传密码字典,提出了遗传信息由DNARNA蛋白质传递的中心法则。4. 1970年发现了反转录酶,丰富了中心法则,为cDNA的制备奠定了基础。5.染色体外DNA-质粒的深入研究,为第一批重组DNA载体提供了材料。6. 1968-1970年,限制性内切酶的发现和纯化,为DNA的体外重组提供了有力的工具。7. 1972年,Berg.D等人首次用限制性内切酶EcoRI切割噬菌体和SV40病毒DNA分子,将这两种不同来源的DNA

3、片段成功地在体外连接成杂合DNA 分子。至此,用重组DNA技术改变生物学性状的尝试在1973年由Cohen等人完成。从此,这项技术为生物学带来了一场深刻的革命,这类技术本身也迅速地发展起来,并广泛地渗透到各个学科的研究领域。一、重组DNA技术相关概念(一DNA克隆克隆(clone来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。获取同一拷贝的过程称为克隆化(cloning,即无性繁殖。技术水平:分子克隆(molecular clone即DNA克隆细胞克隆个体克隆(动物或植物 内切核酸酶内切核酸酶,维持细菌遗传性状的稳定。 限制性内切核酸酶或DNA结合蛋白所特异识别、结合的DNA位点的核苷酸序列,呈二元旋转对称,通常将这种特殊的结构顺序称为回文结构(palindrome。识别序列可以是四核苷酸、六核苷酸或八核苷酸;产生的切口可以是粘性末端、平头或钝性末端、配伍末端。55335555555533333333 (三目的基因目的基因:用来扩增作研究或生产某一种蛋白质的基因。就是在重组DNA时,人们感兴趣的基因或DNA序列,又称目的DNA(target DNA。类型:cDNA(complementary DNA:指经反转录合成的、与RNA互补的单链DNA,经聚合可合成双链cDNA。基因组DNA(geneti

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