牡丹论文牡丹 16S rDNA基因文库 细菌种群多样性 植物促生菌 菌株筛选

1、牡丹论文：基于非培养方法的牡丹根部细菌种群多样性研究【中文摘要】本文采用构建16S rDNA基因克隆文库的非培养方法研究了不同地区(上海、洛阳)、不同品种(凤丹、蓝芙蓉)和不同季节(冬、夏)牡丹根部细菌种群多样性。采用五种不同DNA提取方法提取牡丹根部土壤总DNA,通过DNA浓度和纯度测定以及PCR扩增电泳比较,确定Mobio土壤DNA提取试剂盒最适合牡丹根部土壤总DNA的提取。通过对16S rDNA基因克隆文库的ARDRA分析方法,对不同地区牡丹根部细菌种群多样性进行研究,试验表明不同地区牡丹根部细菌种群多样性非常丰富,其中牡丹根面样品细菌种群多样性低于散土和根际。另外,不同地区牡丹根部细菌

2、优势菌群都是变形菌门。对不同品种牡丹根部细菌种群多样性研究表明,不同品种牡丹根部细菌种群多样性不同,其中根际样品的细菌种群多样性相差最大。上海蓝芙蓉根部的细菌种群多样性高于上海凤丹根部细菌多样性,而洛阳地区凤丹根部细菌多样性高于洛阳蓝芙蓉根部细菌多样性。对不同季节牡丹根部细菌种群多样性进行研究,试验结果表明不同季节之间牡丹根部细菌种群多样性有很大差异,表现为夏季牡丹根部细菌种群多样性高于冬季牡丹根部细菌种群多样性。其中,冬、夏两季牡丹根际样品之间的细菌.【英文摘要】Bacterial community diversity of root domains of tree peony in tw

3、o areas ( Shanghai and Luoyang ) in two varieties (FengdanandLan Furong) in two seasons ( Summer and Winter ) was studied by the cultured-independent method of constructing 16S rDNA clone libraries.The soil total DNA of tree peony root domains was extracted by five methods. Comparing to the DNA conc

4、entration and purity and PCR amplification, the DNA extraction method of Mobios kit was determined to extract soil DNA of tree peony root .【关键词】牡丹 16S rDNA基因文库 细菌种群多样性 植物促生菌 菌株筛选【英文关键词】Tree peony 16S rDNA gene library bacteria community diver-sity plant-growth promoting bacteria strain screening【索购全

5、文】联系Q1：138113721 Q2：139938848【目录】基于非培养方法的牡丹根部细菌种群多样性研究摘要2-3ABSTRACT3-4第一章 绪论8-191.1 植物根际促生细菌研究8-111.1.1 植物根际和根际促生细菌概念8-91.1.2 植物根际促生细菌的生物多样性91.1.3 植物根际促生细菌的功能多样性9-111.1.3.1 对植物的直接促生作用9-101.1.3.2 对植物的间接促生作用10-111.2 植物根际促生细菌的研究方法11-161.2.1 分离培养（Culture-dependent）方法111.2.2 非培养（Culture-independent）方法11-

6、161.2.2.1 基于生理学方法（BIOLOG 微量分析）121.2.2.2 基于生物化学方法（PLFA 图谱分析）12-131.2.2.3 基于杂交技术方法（荧光原位杂交）13-141.2.2.4 基于PCR 的分子生物学方法14-161.3 园林植物根际细菌研究16-181.3.1 园林植物根际细菌多样性研究16-171.3.2 园林植物根际细菌功能研究17-181.4 选题依据及思路18-19第二章 牡丹根部非培养细菌种群多样性19-902.1 材料和方法19-232.1.1 植物材料192.1.2 牡丹根部土壤样品采集19-202.1.2.1 牡丹根部散土取样192.1.2.2 牡丹

7、根际土取样192.1.2.3 牡丹根面土取样19-202.1.3 土壤总DNA 提取202.1.4 牡丹根部细菌16S rDNA 基因克隆文库的构建20-222.1.4.1 牡丹根部细菌16S rDNA 片段扩增202.1.4.2 连接反应20-212.1.4.3 感受态细菌转化212.1.4.4 单克隆挑取和阳性克隆鉴定21-222.1.5 ARDRA 分型222.1.6 克隆文库评价222.1.7 序列测定和系统发育分析22-232.1.8 核酸序列提交232.2 实验结果23-872.2.1 土壤总DNA 提取方法确定23-242.2.2 16S rDNA 克隆文库的构建及检测242.2

8、.3 16S rDNA 克隆文库的ARDRA 分型24-252.2.4 克隆文库的评价25-282.2.5 核酸序列收录号28-292.2.6 牡丹根部细菌种群多样性特征29-782.2.6.1 夏季上海蓝芙蓉根部细菌种群多样性特征29-372.2.6.2 夏季洛阳蓝芙蓉根部细菌种群多样性特征37-442.2.6.3 夏季上海凤丹根部细菌种群多样性特征44-512.2.6.4 夏季洛阳凤丹根部细菌种群多样性特征51-602.2.6.5 冬季洛阳凤丹根部细菌种群多样性特征60-672.2.6.6 冬季洛阳蓝芙蓉根部细菌种群多样性特征67-732.2.6.7 冬季上海凤丹根部细菌种群多样性特征73-782.2.7 地区因素对牡丹根部细菌种群多样性的影响78-812.2.8 品种因素对牡丹根部细菌种群多样性的影响81-842.2.9 季节因素对牡丹根部细菌种群多样性的影响84-872.3 讨论87-90第三章 牡丹根部细菌功能菌株的初步筛选90-933.1 试验材料903.1.1 供试菌株903.1.2 主要试剂903.1.3 培养基903.2 试验方法90-