检验医学专业实验III 临床血液学检验部分(另补充部分名解)

1、观察过的正常骨髓细胞系统:红细胞系统、粒细胞系统、巨核细胞系统、单核/淋巴/浆细胞系统,以及一些少见细胞观察过的非正常骨髓涂片:巨幼细胞贫血(MgA、增生性贫血(包括缺铁性贫血IDA、再生障碍性贫血(AA;急性/慢性髓系白血病(AML/CML、急性/慢性淋巴细胞白血病(ALL/CLL;骨髓增生异常综合征(MDS、多发性骨髓瘤(MM、特发性血小板减少性紫癜(ITP。以上内容结合理论课一并复习,注重其血象和骨髓象(尤其是特征性细胞,不特别整理。细胞化学染色:是以细胞形态学为基础,根据化学反应的原理,应用骨髓涂片进行固定、化学反应显色、复染等程序染色,然后在光学显微镜下观察细胞的化学成分及其变化的一

2、项检验方法。【作用】研究血细胞在生理或病理情况下细胞化学成分的变化,有助于了解各种血细胞的化学组成及病理生理改变,可用作血细胞类型的鉴别,以及对某些血液病的诊断和鉴别诊断、疗效观察、发病机制探讨等均有一定价值。一、过氧化物酶(POX染色【原理】POX能分解试剂中的底物H2O2,释放新生态氧,使无色联苯胺氧化为蓝色联苯胺,后者与亚硝基铁氰化钠结合形成蓝黑色的颗粒,沉着于细胞质中。二氨基联苯胺法的原理为:血细胞内的POX,能分解H2O2而释放出新生氧,后者氧化二氨基联苯胺,形成金黄色不溶性沉淀,定位于POX酶所在的活性部位。正常血细胞的染色反应粒细胞系统:分化差的原始粒细胞为阴性,分化好的原始粒细

3、胞至中性成熟粒细胞均呈阳性;且随着细胞的成熟,阳性反应的程度逐渐增强。嗜酸性粒细胞阳性最强,嗜碱性粒细胞阴性。单核细胞系统:大多数细胞呈阴性或弱阳性,阳性颗粒少而细小。其他细胞:淋巴细胞系统、红细胞系统及巨核细胞系统的细胞均呈阴性,浆细胞、组织细胞也呈阴性,吞噬细胞有时呈阳性。【临床意义】主要用于急性白血病类型的鉴别:急性粒细胞白血病时,白血病细胞多呈强阳性反应;急性单核细胞白血病时, 呈弱阳性或阴性反应;急性淋巴细胞白血病呈阴性反应。二、中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP染色【原理】(偶氮偶联法血细胞中的碱性磷酸酶在pH为9.49.6的条件下将基质中的磷酸萘酚钠水解,产生萘酚与重氮盐偶联形成棕黑色

4、沉淀,定位于细胞质内酶活性所在之处。(钙钴法:碱性磷酸酶在碱性条件下将基质液中甘油磷酸钠水解,产生磷酸钠。再依次与硝酸钙、硝酸钴、硫化胺发生一系列反应,形成不溶性棕黑色的硫化钴,定位于酶活性之处。正常血细胞的染色反应NAP主要存在于中性成熟粒细胞胞浆内,故中性成熟粒细胞胞浆呈阳性,其他细胞基本呈阴性。在油镜下计数100个成熟中性粒细胞,分别记录其分级情况: (-、(+、(+、(+、(+,分别为1、2、3、4分,100个细胞中阳性细胞总数即为阳性率,100个细胞中阳性细胞的积分之和即为积分值。【参考范围】阳性率40%,NAP的积分值为30130分。【临床意义】感染性疾病:作细菌性感染与病毒性感染

5、的鉴别。慢性粒细胞白血病的NAP严重减低,类白血病反应的NAP极度增高。急性粒细胞白血病时NAP积分减低,急性淋巴细胞白血病的NAP积分多增高,急性单核细胞白血病时一般正常或减低。再障时NAP活性增高,PNH时活性减低可鉴别。其他血液病:恶组减低。腺垂体或肾上腺皮质功能亢进等NAP积分可增高。三、糖原染色(PAS,即过碘酸-雪夫反应【原理】过碘酸能将血细胞内的糖原氧化,生成醛基,醛基与Schiff液中的无色品红结合,形成紫红色化合物,定位于细胞质中。正常血细胞的染色反应:粒细胞系统:分化差的原始粒细胞阴性,分化好的原始粒细胞至中性分叶核粒细胞均呈阳性反应,并随着细胞的成熟而逐渐增强,阳性呈弥散

6、性、细颗粒状;嗜酸性粒细胞中的嗜酸性颗粒本身不着色,而颗粒之间的胞质呈红色;嗜碱性粒细胞中的嗜碱性颗粒呈阳性,而颗粒之间的胞质不着色。红细胞系统:有核红细胞及红细胞均呈阴性。单核细胞系统:分化差的原始单核细胞呈阴性,其他阳性,绝大多数阳性呈细颗粒状,有时分布于细胞边缘的阳性颗粒较粗大。【临床意义】幼红细胞出现PAS强阳性反应可见于红血病和红白血病,有助于与其他红细胞系统疾病的鉴别。也可见于部分严重缺铁性贫血,重型地中海及巨幼细胞贫血。急性粒细胞白血病细胞PAS反应阴性或弱阳性反应,常呈细颗粒状或均匀淡红色;急性单核细胞白血病细胞PAS反应呈弥漫性阳性而胞质边缘或伪足处阳性颗粒稍粗;急性淋巴细胞

7、白血病的PAS反应呈粗颗粒,甚至大块状。其他:可识别不典型巨核细胞、区分高雪细胞(阳性与尼曼皮克细胞、鉴别腺癌细胞等。四、铁染色【原理】细胞中的铁在酸性条件下与低铁氰化钾溶液反应,生成蓝色的铁氰化钾(普鲁士蓝,定位与含铁的部位。【临床意义】缺铁性贫血时,细胞外、内铁依次减少;非缺铁性贫血时,细胞外铁多增高;铁粒幼贫血时,铁粒幼细胞增多,出现环状铁粒幼细胞。一、血小板计数【实验原理】用RBC稀释液按一定比例将血液稀释并破坏白细胞,充入血细胞计数池内,在显微镜下计数一定范围内的血小板数,经换算成每升血液内的血小板数。【注意事项】(1采血要顺利(2注意与杂质的区别(3应在1h内计数完毕,否则结果偏低

8、(4所用器材必须标准化(5检查前,应避免服用影响到血小板功能的药物【临床意义】(1病理性血小板减少:血小板数量低于100109/L称为血小板减少。引起血小板数减少的原因:血小板生成障碍:如再生障碍性贫血、巨幼细胞性贫血、急性白血病、骨髓纤维化、放射线损伤;血小板破坏增加:如原发性血小板减少性紫癜、系统性红斑狼疮、输血后血小板减少症;血小板消耗增多:如弥散性血管内凝血、血栓性血小板减少性紫癜、病毒感染;血小板分布异常:如脾肿大(肝硬化、Banti综合征、血液被稀释(输入大量库存血或血浆。(2病理性血小板增多:血小板数量超过400109/L称为血小板增多。引起血小板数增多的原因:骨髓增生性疾病:如

9、原发性血小板增多症、真性红细胞增多症、慢性粒细胞白血病;急性大出血、急性溶血;脾切除后;感染及炎症性疾病:如骨髓炎、结核病、急性风湿热、类风湿关节炎;肿瘤;其他:如外科手术或创伤后、肾上腺皮质醇增多症、肾病综合征。二、血小板聚集实验原理:在血小板聚集仪特定的连续搅拌条件下,在富血小板血浆(PRP中加入各种诱导剂,由于血小板发生聚集,PRP悬液浊度随之下降,光电池将光浊度的变化转变为电讯号的变化,并纪录在纪录纸上。根据描记曲线即可计算出血小板聚集的程度和速度。补充部分罗马数字,与凝血因子有关:,1 】,2】,3】,4 】,5 】,6】,7】,8 】,9 】, 10】,11 】,12】一、PT实验

10、【原理】待测血浆加入过量的含钙组织凝血活酶,重新钙化的血浆在组织因子存在时激活因子X成为Xa,后者使凝血酶原转化为凝血酶,凝血酶使纤维蛋白原转化为不溶性纤维蛋白,测定凝固所需时间,即为待测血浆凝血酶原时间。【方法】取待测血浆0.1ml,37度孵育3min,加入37度预温PT试剂0.2ml,记录凝固时间,即为PT值。【参考值】:1014s【临床意义】:PT延长:先天性凝血因子II、V、VII、X缺乏症和低(无纤维蛋白原血症。获得性凝血因子缺乏,如严重肝病,维生素K缺乏症(影响因子II、V、VII、X合成、原发性纤溶亢进症、DIC等。血循环中存在抗凝物质,如口服抗凝剂等。PT缩短:先天性凝血因子V

11、增多症。高凝状态和血栓性疾病。药物影响:如长期服用避孕药等。二、APTT实验【原理】待测血浆加入部分凝血活酶溶液,在钙离子参与下使纤维蛋白原转化为不溶性纤维蛋白,测定凝固所需时间,即为待测血浆活化部分凝血酶时间。【方法】取待测血浆0.1ml,加入37度预温APTT试剂0.1ml,37度孵育5min,加入37度预温CaCl2溶液,记录凝固时间,即为APTT值。【参考值】:2238s【临床意义】: APTT是检测内源性凝血因子是否缺乏的比较灵敏的试验APTT延长:凝血因子VII、IX水平降低的血友病甲、乙,因子XI缺乏症,部分血管性血友病。因子I、II、V、X严重缺乏,如严重肝病、维生素K缺乏症等

12、。原发/继发性纤溶亢进。口服抗凝剂、应用肝素等。血液循环中存在病理性抗凝物质,如抗因子VIII 或IX抗体、狼疮样抗凝物等。APTT缩短:高凝状态和血栓性疾病,如DIC高凝期、心肌梗死、深静脉血栓形成等。一、TT 实验 【原理】37条件下，在待检血浆中加入“标准化”凝血酶后，直接将血浆纤维蛋白原转变为 纤维蛋白，使乏血小板血浆凝固，其凝固时间即为 TT。 【方法】37预温 0.2ml 待测血浆，加入 TT 试剂 0.2ml，记录凝固时间 【参考值】1016s 【临床意义】 TT 延长：低（无）纤维蛋白原血症和异常纤维蛋白原血症，其中更多见于获得性低纤维 蛋白原血症。肝素或类肝素抗凝物质，如肝素

13、治疗、肿瘤和 SLE 等。原发性或继发性 纤溶亢进时（如 DIC），由于 FDP 增多对凝血酶有抑制作用，可导致 TT 延长。 TT 缩短：一般无临床意义。 二、血浆优球蛋白溶解时间测定（ELT） 【原理】 血浆优球蛋白中含有纤维蛋白原、 纤溶酶原及其激活物等， 但不含有纤溶酶抑制物。 用蒸馏水稀释血浆，加稀醋酸使 pH 降至 4.5，此时优球蛋白沉淀；经离心去除纤溶抑制物， 并将此沉淀（即优球蛋白）溶于硼酸缓冲液中，再加入适量氯化钙（此为加钙法）或凝血酶 （此为加酶法）使其凝固，置 37下观察凝块完全溶解所需要的时间，即为优球蛋白溶解 时间。 【参考值】溶解时间120min，小于 90min

14、 为异常。 【临床意义】 纤溶活性增强：见于原发/继发性纤溶亢进，后者多见于大面积创伤、外科手术后、休克、 恶性肿瘤广泛转移、急性白血病、肝硬化晚期、胎盘早剥、羊水栓塞等；此时 ELT 可显著 缩短常70min。 纤溶活性减弱：见于血栓前状态、血栓性疾病和应用抗纤溶药物等，此时 ELT 可延长。 补充一些名解 学部分的为主，故和血液学的正文合在一起） （均是正文里所没有的，因这些名解以血液 非红系细胞百分比(non erythroid cell，NEC，NEC 是指去除有核红/淋巴/浆/肥大/巨噬细胞 外的有核细胞百分比。 副染色质: 位于细胞核内，染色较浅、呈淡色或不着色的称为副染色质，不含

15、 DNA。通常是 指核染色质与核染色质之间的间隙，细胞越成熟，副染色质越分明。 核浆发育不平衡：通常细胞质和细胞核的发育之间是彼此同步的，但有时也可能速度不同， 称为“核浆发育不平衡”。 贫血(anemia：是指患者的红细胞计数(RBC、血红蛋白浓度(Hb、血细胞比容(HCT低于 相应的年龄组、性别组和地域组人群的参考范围下限的一种症状。 再生障碍性贫血（AA）：简称再障，是因为化学、物理、生物因素及不明原因使骨髓造血 组织减少导致骨髓造血功能衰竭，引起外周血全血细胞减少的一组造血干细胞疾病。 巨幼细胞贫血（MgA）：是由于维生素 B12 或（和）叶酸缺乏，使细胞 DNA 合成障碍，导 致细胞

16、核发育障碍所致的骨髓三系细胞核浆发育不平衡及无效造血性贫血， 也称脱氧核苷酸 合成障碍性贫血。 缺铁性贫血（IDA）：由于机体铁的需要量增加和（或）铁吸收减少，导致体内储存铁耗尽 而缺乏，又不能得到足够的补充，致使用于合成血红蛋白的铁不足所引起的贫血。 为小细 胞低色素性贫血。 白血病（leukemia）：是一类造血干细胞克隆性恶性增值性疾病，其特点为白血病细胞异常 增生、分化成熟障碍，并伴有凋亡（apoptosis减少。在骨髓和其他造血组织中白血病细胞 大量增生积聚，并浸润其他器官和组织。临床出现不同程度的贫血、出血、发热及肝、脾、 淋巴结肿大等。 急性白血病：白血病细胞分化停滞在较早阶段，

17、多为原始细胞和早期幼稚细胞，病情发展 迅速，自然病程仅数个月。 慢性白血病：白血病细胞分化停滞在较晚阶段，多为较成熟幼稚细胞和成熟细胞，病情发 展慢，自然病程可达数年。 Auer 小体：在瑞氏或吉姆萨的血或骨髓涂片中，白细胞胞质中出现染红色细杆状物质，一 条或数条不等，长 16um，称为 Auer 小体（棒状小体）。有的胞质含有短而粗的 AUER 小体，几条、十几条或几十条，可呈束状交叉排列，酷似柴捆样，故名柴捆细胞。 骨髓增殖性肿瘤（MPN）：原称骨髓增殖性疾病，是以骨髓中分化成熟相对正常的一系或多 系髓系（粒/红/巨核系和肥大细胞）细胞持续性异常增殖为特征的一组克隆性造血干细胞疾 病。 慢

18、性粒细胞白血病 （CML） 是起源于造血干细胞的慢性克隆性骨髓增殖性肿瘤。 ： 病程缓慢， 主要涉及粒细胞系，表现为持续性、进行性外周血白细胞数量增加，分类中出现不同分化阶 段的粒细胞，尤其以中性粒细胞显著增多为主，中位稳定期 4 年左右。 骨髓增生异常综合征 (MDS：是一组获得性的、造血功能严重紊乱的造血干细胞克隆性疾 病，以髓系中一系或多系血细胞减少或发育异常、无效造血为特征，转化为急性髓系白血病 的风险增大。 慢性淋巴细胞白血病（CLL，慢淋）：是一种淋巴细胞克隆性增殖的肿瘤性疾病，主要表现 为形态上成熟的小淋巴细胞在外周血、骨髓、淋巴结和脾脏等淋巴组织的侵袭。 急性淋巴细胞白血病（ALL，急淋）：是由于原始及幼稚淋巴细胞在造血组织异常增殖并可 浸润各组织脏器的一种造血系统恶性克隆性疾病。 浆细胞肿瘤：系单克隆浆细胞异常增生，并分泌单克隆免疫球蛋白和（或）多肽链亚单位的 一组肿瘤性疾病。 多发性骨髓瘤（MM）：是骨髓内单一浆细胞株异常增生的一种恶性肿瘤，其特征是单克隆 浆细胞恶性