干燥综合征患者外周血中T淋巴细胞亚群的检测及其临床意义

1、干燥综合征患者外周血中T淋巴细胞亚群的检测及其临床意义    【摘要】nbsp;nbsp;目的nbsp;了解干燥综合征(Sjgrennbsp;syndrome,nbsp;SS)患者外周血中T淋巴细胞亚群的变化及其临床意义。方法nbsp;用流式细胞术检测并比较SS患者与对照者外周血中T淋巴细胞亚群的差异。以血沉及血清中IgG来判     作者：庄俊汉，李博，林华鹏，何英，张丽君，李剑松，叶志中 作者单位：（广东省深圳市第四人民医院，广东深圳518040）    【摘要】

2、0; 目的 了解干燥综合征(Sjgren syndrome, SS)患者外周血中T淋巴细胞亚群的变化及其临床意义。方法 用流式细胞术检测并比较SS患者与对照者外周血中T淋巴细胞亚群的差异。以血沉及血清中IgG来判断SS病情活动，分析T淋巴细胞亚群与SS病情活动的关系。结果 SS患者外周血中CD3+T淋巴细胞、CD3+ CD4+T淋巴细胞、CD3+ CD8+T淋巴细胞亚群及CD3+ CD4+T淋巴细胞/CD3+ CD8+T淋巴细胞比值与对照组比较差异无统计学意义。但病情活动的SS患者的CD3+ T淋巴细胞亚群和CD3+ CD8+T淋巴细胞亚群均低于病情非活动者，而CD3+ CD4+T淋巴细胞/

3、CD3+ CD8+T淋巴细胞的比值则较后者高（P<0.01）。结论 SS患者外周血中T淋巴细胞亚群与对照组比较虽无显差，但当SS病情活动时T淋巴细胞亚群有显著改变，可能在SS发病过程中具有一定作用。 【关键词】  干燥综合征；T淋巴细胞；流式细胞术 基金项目：深圳市科技局科研立项经费资助（项目编号：200204135） Changes of T lymphocyte subsets in peripheral blood from patients with Sjgren's syndrome and its clinical significance ZHUANG J

4、unhan，LI Bo, LIN Huapeng, HE Ying, ZHANG Lijun, LI Jiansong ,YE Zhizhong (Department of Rheumatology, The Fourth People's Hospital of Shenzhen City, Shenzhen 518040, China) Abstract：Objective  To investigate the change of T lymphocyte subsets in peripheral blood from patients with Sjgren

5、9;s syndrome (SS) and its clinical significance.Methods  T lymphocyte subsets were determined by twocolor flowcytometry with various monoclonal antibodies. Erythrocytesedimentation rate(ESR) and serum IgG were used to classify the disease activity. The relationship between T lymphocyte subsets

6、and disease activity was analyzed.Results  Percentage of CD3+ T lymphocyte, CD3+ CD4+ T lymphocyte, CD3+ CD8+ T lymphocyte and the ratio of CD3+ CD4+ / CD3+ CD8+ did not significantly differ between in SS and the control healthful subjects. The percentage of CD3+ T lymphocyte and CD3+ CD8+ T ly

7、mphocyte significantly decreased but the ratio of CD3+ CD4+ / CD3+ CD8+ increased in patients with active SS. Conclusion   The percentage of T lymphocyte subsets might not be abnormal in patients with SS, but could relate to SS activity, which may play a role in the development of SS. 

8、0;   Key words: Sjgren syndrome; T lymphocyte subsets; flowcytometry 干燥综合征(Sjgren syndrome，SS)是一种自身免疫性外分泌腺病，典型临床表现为口眼干燥和血清中出现多种自身抗体(抗SSA抗体、抗SSB抗体等)，是我国临床最常见的弥漫型结缔组织病之一。SS的发病机制复杂，至今仍未完全清楚。近年来的有些研究表明，SS的发病与T淋巴细胞亚群的变化相关13。因此，对SS患者体内的T淋巴细胞进行研究，对于进一步阐明SS的发病机制可能具有非常重要的意义。国外很早以前就在这方面进行了相关研究，而国内尚未

9、见这方面的研究报道。本研究采用流式细胞术检测比较了SS患者及对照者外周血中T淋巴细胞亚群的差异，并以血沉及血清中IgG来判断SS病情活动，分析了SS患者外周血中T淋巴细胞亚群与SS病情活动的关系，旨在进一步阐明外周血中T淋巴细胞亚群在SS发病中的作用。     1  对象和方法     1.1  研究对象     本研究中的16例SS患者均为本院门诊或住院患者，均符合2002年pSS欧洲分类标准，全部为女性，平均年龄（40±3）岁。13例正常对照者为在本院体检的本院职工，全部

10、为女性，平均年龄（45±4）岁。16例其它自身免疫病对照者为在本院住院的伴有口干症状的RA患者、SLE患者及UCTD患者，其中男性1例，女性15例，平均年龄（44±2）岁。     1.2  实验方法     所有受检者均于清晨空腹时无菌采集外周静脉血，T淋巴细胞亚型的检测采用双色流式细胞方法。各样品测定管中各加入抗凝血标本50L，然后每管中分别加入荧光标记的单克隆抗体液10L，振荡混匀，室温避光孵育20min。加入溶血素1mL，振荡混匀，室温避光孵育10 min。然后1200 r/min离心5min。弃

11、上清液，加入PBS 1mL，1200 r/min离心5min。弃上清液，加入PBS 400L，混匀后上机检测。采用Simulset软件分析。血沉的检测采用魏氏法，IgG的检测采用免疫比浊法。以血沉及血清中IgG水平来判断SS病情活动，如果以上两个实验室指标高于正常，则认为SS存在病情活动45。     1.3  统计学处理     所有数据均用SPSS13.0统计软件包进行处理，采用单因素方差分析及t检验,P<0.05为差异有统计学意义。     2  结果  

12、0;                          2.1  SS患者与对照者外周血T淋巴细胞亚群的比较     SS患者外周血中CD3+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞、CD3+CD8+T淋巴细胞亚群及CD3+CD4+T淋巴细胞/ CD3+CD8+T淋巴细胞比值与正常对照者及自身免疫病对照者相比均

13、无明显差异(P>0.05)，详见表1。 表1  SS患者及对照者外周血T淋巴细胞亚群的比较（略） 3组各项指标相比，P均>0.05 。 2.2  活动期SS患者与非活动期SS患者外周血中的T淋巴细胞亚群比较     与非活动期SS患者相比，活动期SS患者的CD3+ T淋巴细胞亚群及CD3+ CD8+T淋巴细胞亚群均低于病情非活动者，而CD3+ CD4+T淋巴细胞/CD3+ CD8+T淋巴细胞比值则较后者高，详见表2。     表2  活动期SS患者与非活动期SS患者外周血T淋巴细胞亚群的比较（

14、略） 与非活动期SS组比较，*P<0.01，*P>0.05 。 3  讨论     血清中出现多种自身抗体，包括类风湿因子、抗SSA抗体、抗SSB抗体等，是SS的一个显著特征。已有研究表明，这些自身抗体的产生与SS患者体内T淋巴细胞异常有关。因此，对SS患者体内的T淋巴细胞进行研究，对于进一步阐明SS的发病机制可能具有非常重要的意义。在国外，Bakhshi等6及Ichikawa等7很早以前就在这方面进行了研究。Bakhshi等6率先应用单克隆抗体及流式细胞技术在18例SS患者外周血中对T淋巴细胞亚群进行了研究,结果发现:T淋巴细胞的比例明显低

15、于正常对照;在原发性SS患者中，可以与抗Leu2a抗体反应的抑制性/细胞毒性T淋巴细胞及可以与抗Leu3a抗体反应的辅助性/诱导性T淋巴细胞的比例均明显低于正常对照，但是辅助性/抑制性T淋巴细胞的比例与正常对照无明显差异;在继发性SS患者中，只有抑制性/细胞毒性T淋巴细胞的比例下降。Ichikawa等7用双色流式细胞技术对23例SS患者、16例类风湿关节炎患者及31例正常对照外周血T淋巴细胞亚群进行了研究,结果发现SS患者及的类风湿关节炎患者CD3+CD8+T淋巴细胞及CD8+CD11+T淋巴细胞均比正常对照者低。迄今为止，国内尚未见这方面的文献报道。     为

16、了明确国内SS患者体内外周血中T淋巴细胞亚群的情况，本研究率先在16例中国SS患者、13例正常对照者及16例自身免疫病对照者中对外周血T淋巴细胞亚群进行了检测。结果发现与正常对照组相比，SS患者外周血中CD3+T淋巴细胞、CD3+ CD4+T淋巴细胞、CD3+ CD8+T淋巴细胞亚群及CD3+ CD4+T淋巴细胞/ CD3+ CD8+T淋巴细胞比值与两个对照组相比差异均无统计学意义。其中病情活动的SS患者的CD3+ T淋巴细胞亚群及CD3+ CD8+T淋巴细胞亚群均低于病情非活动者，而CD3+ CD4+T淋巴细胞/ CD3+ CD8+T淋巴细胞比值则较后者高。以上结果与上述国外报道存在一定的差

17、异，可能与检测对象种族不同等有关。T淋巴细胞是一种重要的免疫活性细胞，CD4+细胞和CD8+细胞是T淋巴细胞中功能相异的两个亚群，在免疫应答中分别发挥正、负调节作用，形成T细胞网络。机体的相对免疫平衡状态主要由它们间的相互影响来维持，两亚群细胞比例的失调就会产生免疫功能失常，因此CD4+/CD8+比值代表了整体的免疫平衡8。在本研究中，与非活动期SS患者相比，活动期SS患者的CD3+ CD4+T淋巴细胞/ CD3+ CD8+T淋巴细胞比值显著高于病情非活动者，提示在活动期SS患者中，辅助性T淋巴细胞的比例相对较高，可能会存在免疫功能紊乱，引起自身抗体的产生，这也与临床上所观察到的现象非常吻合。

18、     本研究初步表明，SS患者外周血中T淋巴细胞亚群与对照组比较虽未见异常，但与SS病情活动有关，可能在SS发病过程中具有一定作用。由于本研究例数较少，所以有关结果尚有待进一步探讨。 【参考文献】   1MANDL T, BREDBERG A, JACOBSSON L T, et al. CD+4 T lymphocytopenia a frequent finding in antiSSA antibody serupositive patients with primary Sjogren's syndromeJ. J Rheumatol

19、, 2004, 31(4):726728.    2GOTTENBERG J E, LAVIE F, ABBED K, et al. CD4 CD25high regulatory T cells are not impaired in patients with primary Sjogren's syndromeJ. J Autoimmun， 2005, 24(3):235242.    3KOHRIYAMA K, KATAYAMA Y. Disproportion of helper T cell s

20、ubsets in peripheral blood of patients with primary Sjogren's syndromeJ. Autoimmunity, 2000, 32(1):6772.    4VAN WOERKOM J M, KRUIZE A A, WENTINGVAN WIJK M J, et al. Salivary gland and peripheral blood T helper 1 and 2 cell activity in Sjogren's syndrome compared with nonSjogren's sicca syndromeJ. Ann Rheum Dis, 2005,64(10):14741479.    5BERTORELLO R, CORDONE M P, CONTINI P, et al. Increased levels of interleukin10 in saliva of