医院制剂质量标准起草说明模版

1、3参榆灌肠液质量标准起草说明3J名称、汉语拼音，参榆灌肠液”名称,是按中药新药的命名要求之本制剂名称由处方中含有的饮片苦卷与地榆的简称加剂型而来,汉语拼音为“ShcnyuGuanchangye,3.2 处方处方为江苏省主任医部经验方，临床应用多年疗效显著3.3 制法前述制法,为三批中试产品的制品工艺.3.4 性状前述性状，系根据在三批中试产品的性状综合描述而得“3.5 鉴别351黄柏供试品溶液的制备取本品10ml,加氢氧化钠试泄调pH至11-13滤液用一氯甲烷提取2次，每次20ml，合并一氯甲烷提取液，挥干溶剂，残渣加甲醇】而溶解,作为供试品溶液.同法制备阴性对照溶液，对照药材溶液的制备取对照

2、药材lg.加100ml水煎煮I小时，油液同法处理，作为对照药材溶液.对照品溶液的制备取盐酸小鬼碱对照品，加甲辞制成每1ml含903咫的溶液，作为对照乩溶液.照薄层色谱法:附录V1B)试验，吸取上述四种溶液畀91，分别点于同一酢胶G薄层板匕以一氯甲烷乙酸乙丽甲醉.水(15;40:22:10)10七以下放置的下乂溶液为展开剂，展开,取出，晾干，置紫外光灯(365mn)卜检视口供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置匕显相同颜色的荧光斑点,阴性未见T扰。见图1、2o断液/层色调明1 m73 MHMVB* I 4 fflf!1 MMiini：2 MMinLi3 mLll.ZLS4 WttWfl

3、UW3 NJR+imMU191234图I挈榆沛帧液黄柏油层鉴别图(1)图中i为制剂；(2)图中2为对照我材：(3)国中3为对照品：4图中4为阴性对照图2卷榆港崎液,用薄层鉴别图(!)图中I.2、a为不同批号鎏榆港腼液;图中4为对照两忖；(3)图中5为对照陆3s2苦参供试品溶液的制备取本片50ml.如氨试液调pH至9-10,用裁甲烷振摇提取2次,俗次20mL合并二氯甲烷液，低温蒸干，残渣加乙科5ml使溶解.作为供试乩溶液“同法制备阴性供试品溶液。对照为材溶液的制备取苫缪对照弛材0%，加浓区试液02ml、一氯甲炕25ml，混匀,放置过夜，渡过，滤液播干,残渣加一氮甲烷Q3n】l使溶解，作为对照药材

4、溶液.照薄层色谱法(附录V1B)试验，吸取k述一种溶液各加匕分别点于同一用2%裁就化船溶液制备的研胶G薄层板上，以二氮甲烷甲殍-浓也试液(5:060.3)IOC以下放置的F层溶液为展开剂,展开，取出，晾十,依次喷以碘化锯用试液和亚硝酸钠乙酥试液。供试品色谱中,在与对照药材与谱相应的位曾匕显相同的橙色矗点，阴性无干扰。见图3、4r.留a萼榆褥脱液苦多薄层就别图口）圉中I为制剂*图中2为对照弱材;<3）图中3为阴愣对照：图4若榆浦的液苫誉海星禁冽图L1】图中L 2, 3为不同批号2榆靠圜液;1”图中4为对照的材；353三七供试M溶液的制备取木品40疝，用水饱和的正J醉溶液振摇提取3次,每次2

5、0ml,合并正丁静液,用5%氨试液15ml洗潇.分取正丁静液，蒸T，线渣加甲醇2m【使溶解,作为供成品溶液,同法制备阴性供试茄溶液.对照为材溶液的制备取三七对照药材1g,加水50ml,煎煮I小时,滤过,滤液用水饱和的正浙溶液振摇提取3次，加次20mL台并正J制液,用5%氢成液15ml洗潺，分取正丁醇液,蒸|“残渣加甲醇2ml使溶解,作为三七对服药材溶液.照一层色谱法（附录VIB）试验,吸取上述三种溶液各lOph分别点于同一硅胶G板t.以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酥-水（15:40:22:10）10七以下放附的卜层溶液为展开剂,展开，取出，I麻干.殖以硫酸溶液（l-dOK1051c加热至斑点显色清晰

6、。供就品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的斑点。阴性无干扰,见图5、6.图£范睢淅屈液七即屈鉴别图（I）图中1为制剂；C）圈中N为对眼药材;图中3为阴性对照图6一椅潴/液疗草前层鉴别图口）图中L 2, 3不同批号号榆游随海:O图中4为对源菊材以上二味饮的薄乂定性鉴别,经岁批样品试胎观察，方法专属.直观，取现性明故列人质吊机刈草.案3.6 检查根据泄拗制中华人民共和国药班1200年版二部附录IS）通则期定及参榆油肠液的特点，分别对pH值、相对密僮,装如及微生物限度等进行了检查.361pH值照中华人民共和国药典2010年版二部附录VIHpH值测定法,二批样品测定结果见发L友

7、】pH值测定结果批号III2I21112141H215pH值3.693.653.67根据三批样品pH值测定的结果，裨定样品的pH值为3.0-5。3.62相对密度解中华人民共展国药典2010年版二部附录VIA相对密，度测定法，三批栉品测定结果见表2.及2相对密度测定结果批号H12I21112141H215相对密度L051.051.05根据三批样品相对密度测定的结果，暂定样品的相对密度为不低于L02363装量差异照中华人民共和国蜀典下版二部附录XF【最低装量检叠法】检配结果见表表3装用差异检查结果批号随机抽取3瓶(ml)平均装量(ml)装量限度g】)111212154152153153】112】4

8、)53153154153符合111215153152152152按装量150ml规定.三批样品梅查结果均符合规定.3.6.4微生物限度3.6.4.1 方法验证材料与依据3.6.4.2 1供试品：参榆灌肠液规格：XXX生产企业：江苏省XXX医院批号：1112121112141112153.6.4.1.2 培养基：批号：110512厂家：XXX1 .营养琼脂培养基2 .玫瑰红钠琼脂培养基批号：1105172厂家：XXX3 .营养肉汤培养基批号：110126厂家：XXX4 .胆盐乳糖培养基批号：110408厂家：XXX5 .MUG培养基批号：110203厂家：XXX3.6.4.1.3 稀释剂：pH7

9、.0无菌氯化钠蛋白冻缓冲液500ml/瓶，批号：2011032801（如缓冲液为市场购买，需写明生产企业）3.6.4.1.4 菌种：菌种名称编号来源传代次数大肠埃希菌(Escherichiacoli)CMCC(B)44102南京巾药检所第3代金黄色葡稳球菌(Staphylococcusaureus)CMCC(B)26003南京巾药检所第3代铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)CMCC(B)10104南京巾药检所第3代枯草芽抱杆菌(Bacillussubtilis)CMCC(B)63501南京巾药检所第3代白色念珠菌(Candidaalbicans)CMCC(F)98001

10、南京巾药检所第3代黑曲霉(Aspergillusniger)CMCC(F)98003南京巾药检所第3代3.6.4.1.5 验证依据：中国药典2010年版二部附录XIJ微生物限度检查法方法验证。3.6.4.2验证实验操作根据中国药典2010年版二部附录微生物限度检查法方法，采用常规法（如常规法回收率未达70%,需采用培养基稀释法重新进行验证；如培养基稀释法回收率仍未达70%,可采用薄膜过滤法再次进行验证）对细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证。控制菌检查方法采用常规法（若阳性未生长采用培养基稀释法或薄膜过滤法），从而建立该样品的微生物限度检查方法。3.6.4.2.1 菌液制备方法：1 .接种大肠埃希

11、菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，置350C培养24小时，分别取上述培养物1ml加9ml0.9%的无菌氯化钠溶液，10倍递增稀释制成每1ml含菌数为50100cfu的菌悬液。2 .接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，置250C培养48小时，取上述培养物1ml加9ml0.9%的无菌氯化钠溶液，10倍递增稀释制成每1ml含菌数为50100cfu的菌悬液。3 .接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，置250C培养7天，加入5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%的无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱，并吸出抱子悬液至无菌试管内，用

12、含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%的无菌氯化钠制成每1ml含抱子数为50100cfu的抱子悬液。3.6.4.2.2供试液制备：取供13c品10ml,加pH7.0无菌氯化钠蛋白冻缓冲液至100ml,混均，作为1:10供试液。3.6.4.3 菌落计数方法的验证3.6.4.3.1 平皿法：(常规法)试验组：取1:10供试液1ml,分别加入10个平皿中，再依次加入大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、白色念珠菌、黑曲霉5种菌的菌悬液1ml(含50100cfu),每株菌平行制备2个平皿，立刻倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，分别置350C培养48小时和250C培养72小时。菌液组

13、：分别取上述稀释的菌液1ml注入平皿内，每个菌平行制备2个平皿，测定所加的试验菌数。供试品对照组：取1:10供试液1ml分别注入4个平皿中，立刻注入营养琼脂和玫瑰红钠琼脂培养基，每种培养基制备2个平皿，分别置350C培养48小时和250C培养72小时。以测定供试品的本底菌数。上述方法平行实验3次结果见表1表1.参榆灌肠液细菌.霉菌和酵母菌回收率的测定(平皿法)菌种类型试验试验组菌液组供试品回收率()次数对照组试验组大肠埃布国14749095.9265620100361560100金黄色葡锢球菌13633010024445097.8345410100枯草芽抱杆菌13842090.52475009

14、4.036267092.5白色念珠菌14548083.323539089.735055090.9黑曲霉13438089.522731087.132829096.6试验组菌回收率(%)=试验组平均菌落数供试品对照组的平均菌落数M1000/菌液组的平均菌落数由表1可见参榆灌肠液用平皿菌落计数法，三次平行试验大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、白色念珠菌和黑曲霉的菌落回收都达到了70%,说明常规平皿法用于参榆灌肠液计数结果是准确的。备注：如采用常规平皿法菌落回收率都达到70%,则细菌、霉菌和酯母菌的计数方法验证即可完成，但如常规法一种或几种菌回收率三次均低于70%,需采用培养基稀释法重新进行试

15、验，具体操作如下：若细菌回收率低于70%则细菌数计数采用培养基稀释法，霉菌回收率低于70%则霉菌酯母菌计数采用培养基稀释法，二者均低于70%则同时采用培养基稀释法。验证资料中需体现常规法及培养基稀释法两种验证方法及结果。3.6.4.3.2 平皿法：（培养基稀释法）试验组：取1:10供试液0.2ml及各试验用菌液1ml分别注入平皿中，每种试验菌平行制备10个平皿，立刻倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，细菌350C培养48小时，霉菌及酵母菌250C培养72小时。菌液组：分别取上述稀释的菌液1ml注入平皿内，每个菌平行制备2个平皿，测定所加的试验菌数。供试品对照组：取1:10供试液0.2ml分

16、别注入20个平皿中，立刻倾注营养琼脂和玫瑰红钠琼脂培养基，每种培养基制备10个平皿，分别置350C培养48小时和250C培养72小时。以测定供试品的本底菌数。上述方法平行实验3次结果见表2表2.参榆灌肠液细菌.霉菌和酵母菌回收率的测定（培养基稀释法）菌种类型试验次数试验组菌液组供试品对照组回收率（）试验组大肠埃布国14749095.9265620100361560100金黄色葡锢球菌13633010024445097.8345410100枯草芽抱杆菌13842090.524750094.036267092.5白色念珠困14548083.323539089.735055090.9黑曲霉13438

17、089.522731087.132829096.6试验组菌回收率（）=试验组平均菌落数一供试品对照组的平均菌落数乂1000y菌液组的平均菌落数由表2可见参榆灌肠液用培养基稀释法，三次平行试验大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、白色念珠菌和黑曲霉的菌落回收都达到了70%,说明培养基稀释法用于参榆灌肠液计数结果是准确的。备注：如培养基稀释法回收率仍低于70%,采用薄膜过滤法再次进行试验。验证资料中需体现常规法、培养基稀释法及薄膜过滤法三种验证方法及结果。具体操作如下：3.6.4.3.3 薄膜过滤法：供试液制备：取1:10供试液10ml放入离心管中，将离心管放入离心机，500转/min离心3分

18、钟，取上清液。（注：仅细菌计数可用低速离心，霉菌及酵母菌计数不可采用。）试验组：取1:10上述供试液1ml加pH7.0的无菌氯化钠蛋白冻缓冲液100ml稀释过滤，用400ml（备注：具体用量依样品抑菌作用强弱而定，在试验中需设计不同的冲洗量进行冲洗，根据回收率的情况选择不同的冲洗量）pH7.0的无菌氯化钠蛋白冻缓冲液冲洗滤膜，每次100ml,在最后一次冲洗液中分别加入试验用菌液1ml,过滤后无菌方法取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂或玫瑰红钠琼脂平板上，细菌350C培养48小时，霉菌及酵母菌250C培养72小时。菌液组：分别取上述稀释的菌液1ml注入平皿内，每个菌平行制备2个平皿，测定所加的试验菌

19、数。供试品对照组：取1:10供试液1ml采用上述薄膜过滤法冲洗过滤，分别置350C培养48小时和250C培养72小时。以测定供试品的本底菌数。上述方法平行实验3次结果见表3表3.参榆灌肠液细菌.霉菌和酵母菌回收率的测定（薄膜过滤法）菌种类型试验试验组菌液组供试品回收率次数对照组试验组大肠埃布国14749095.9265620100361560100金黄色葡锢球菌13633010024445097.8345410100枯草芽抱杆菌13842090.524750094.036267092.5白色念珠菌14548083.323539089.735055090.9黑曲霉13438089.5227310

20、87.132829096.6(%)=试验组平均菌落数-供试品对照组的平均菌落数菌液组的平均菌落数10%试验组菌回收率由表3可见参榆灌肠液用薄膜过滤法，三次平行试验大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、白色念珠菌和黑曲霉的菌落回收都达到了70%,说明薄膜过滤法用于参榆灌肠液计数结果是准确的。3.6.4.4 控制菌(大肠埃希菌)检查方法的验证3.6.4.4.1 直接接种法(1)试验组：取1:10的供试液10ml,接种至100ml的胆盐乳糖增菌培养基内，加入49cfu大肠埃希菌，350C培养24小时，可见培养基混浊，有气体产生。取上述培养物0.2ml接种至5mlMUG培养基的试管内，培养5小时、

21、24小时，在366nm紫外线下观察，可见荧光反应，滴加靛基质试液，液面呈玫瑰红色.(2)阴性菌对照组：取1:10的供试液10ml,接种至100ml的胆盐乳糖增菌培养基内，加入33cfu金黄色葡萄球菌,350C培养24小时，培养基无混浊与气体产生。取上述培养液0.2ml接种至5mlMUG培养基的试管内，培养5小时、24小时，在366nm紫外线下观察，无荧光反应，滴加靛基质试液，液面均呈试剂本色。上述方法试验组检出了大肠埃希菌，阴性菌对照组未检出金黄色葡萄球菌。说明用100ml胆盐乳糖增菌培养基可以进行参榆灌肠液大肠埃希菌检查。备注：试验中若100ml阳性对照未生长，则加大胆盐乳糖增菌培养基用量，

22、分别作200ml、300ml,方法同以上方法。3.6.4.4.2 薄膜过滤法若直接接种法加大培养基用量阳性对照仍无法检出，则采用薄膜过滤法：(1)试验组：取1:10的供试液10ml,用离心机低速离心500r/min离心3分钟，取上清液定容至10ml,加入pH7.0的无菌氯化钠蛋白冻缓冲液稀释至100ml薄膜过滤，用400ml(备注：具体用量依样品抑菌作用强弱而定，在试验中需设计不同的冲洗量进行冲洗，根据回收率的情况选择不同的冲洗量)pH7.0的无菌氯化钠蛋白冻缓冲液冲洗滤膜，每次100ml,过滤后无菌方法取出滤膜，接种至100ml的胆盐乳糖增菌培养基内，加入49cfu大肠埃希菌，350C培养2

23、4小时，可见培养基混浊，有气体产生。取上述培养物0.2ml接种至5mlMUG培养基的试管内，培养5小时、24小时，在366nm紫外线下观察，可见荧光反应，滴加靛基质试液，液面呈玫瑰红色.(2)阴性菌对照组：取1:10的供试液10ml,用离心机低速离心500r/min离心3分钟，取上清液定容至10ml,加入pH7.0的无菌氯化钠蛋白冻缓冲液稀释至100ml薄膜过滤，用400ml(注：具体用量依样品抑菌作用强弱而定)pH7.0的无菌氯化钠蛋白冻缓冲液冲洗滤膜，每次100ml,过滤后无菌方法取出滤膜，接种至100ml的胆盐乳糖增菌培养基内，加入33cfu金黄色葡萄球菌,350C培养24小时，培养基无

24、混浊与气体产生。取上述培养液0.2ml接种至5mlMUG培养基的试管内，培养5小时、24小时，在366nm紫外线下观察，无荧光反应，滴加靛基质试液，液面均呈试剂本色。上述方法试验组检出了大肠埃希菌，阴性菌对照组未检出金黄色葡萄球菌，说明用100ml胆盐乳糖增菌培养基可以进行参榆灌肠液大肠埃希菌检查。备注：如制剂中含生药，需增加大肠菌群检查验证试验；如制剂中含动物药，需增加沙门菌检查验证方法；如制剂为外用药，需增加金黄色葡萄球菌、铜绿杆菌检查验证方法，每个品种具体要求见中国药典2010年版附录。其他控制菌检查常规法、培养基稀释法、薄膜过滤法方法同上述大肠埃希菌检查方法，需使用相应增菌及分离培养基

25、o如金黄色葡萄球菌使用营养肉汤增菌，甘露醇氯化钠琼脂分离等。结论：参榆灌肠液按中国药典2010年版二部附录微生物限度检查法方法验证试验：取供试品10g,加pH7.0无菌氯化钠蛋白冻缓冲液至100ml，混匀,作为1:10供试液。细菌、霉菌及酵母菌数测定：可用常规平皿法（或培养基稀释法、薄膜过滤法）；大肠埃希菌检查可用100ml胆盐乳糖增菌培养基进行增菌培养（或其他量的培养基、薄膜过滤法），依法检查。金黄色葡萄球菌采用。依法检查，铜绿假单胞菌采用。00000000依法检查。（备注：上文中黑体斜体部分文字仅为验证过程中指导之用）3.64.5参檎灌肠液的微生物限度检查方法供试液的制备：吸取供试乩10m

26、L加pH7.0无菌氯化钠.蛋臼陈缓冲液至tOOmL振福均匀，作为】:10供试液取上述供试液】ml,加入pH70无菌氯化钠.蛋自豚级冲液如制得1：1炉供试液，备用,3,6A5J细菌，鹫菌及醉母菌计数（I）细菌数计数样品细菌数测定：分别吸取样陆I：10的供试液1E1,分别10个无菌平皿中.每每个平肥0川，平行试验二份，立即帧注1V20川温度不超过45t营养琼脂培养基.混匀，凝固,3075七倒置培养4&小时.计放，】0个平皿中的细菌数之和即为每ml供试液中细数，阴性对照t取pH7.0无菌氯化钠-蛋门脓缓冲液】ml无篇手皿中，平行制备2个平板,立即倾注l5-20ml温度不超过45T营养琼脂培养

27、基，混匀.梃固,3075七倒四培养48小时，不得有菌生长，霉菌及酵母菌计数:样品福菊及菊母菌计数测定：分别吸取样品h】0的供试液】mi,分别10个无菌平HIL中，呼个平皿Qml，平行试验一份，立即倾注15-20而温度不超过45匕攻魂红纳琼脂培养基，混匀,凝固，25-28C倒置培养48小时，计数，10个平叭中的细菌数之和即为将ml供试液中霉菌数.阴性对照，取pH7.0无菌氯化钠蛋白天点冲液1mL置无的平皿中,平行制备2个平板,立即倾注154Oml温度不超过45匕玫瑰红的琼脂培养基，混匀，凝固.2328匕倒置培养72小时，不得有的生长.3瓜452控制菌检查（I）样品大肠埃希菌检充取h10供试液】0

28、mL加入100ml胆盐乳糖培养基3经35、37培养24小时后,若有菌生长，再进行MUG和标基质试脸，以确定是否染菌.阴性对照I取pH70无菌氯化钠.蛋白脐缓冲液10mL加入I00H胆盐乳精培养基中，经35-37C培养24小时,不得有菌生长、（2）样品金黄色葡僦球前检查取1:10供试液】Qmh加入IQQml营养肉渴培养基中,经35-37C培养24小时后，若有菌生长，再进行分离培养和甘露醇商蒜试验，以确定是否染菌.阴性时照；取pH7.0无菌氯化钠洸白腺缓冲液10mL加入100ml营养肉汤培养基中，经3537c培养24小时.不得有菌生长0（3）样品铜绿假单胞菌检查取1:10供试液iOml,加入100

29、ml胆盐乳糖培养基中，经3577匕培养24小时后,若有菌生长，再进行分离培养和42*C生长试验,以确定是否染菌.阴性对照：取pH7.0无菌氯化钠蛋白豚缓冲液10mL加入100ml胆盐乳糖培养基中,经35-37P培养24小时.不得有常生长.按照中国药典2010年版一部附录XIIIC微小物限度检杳法检音，将ml药物中细菌数应300个信，寄菌、酵母菌数应Wiw/g,不得检出大肠埃肃菌金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌,365三批中试产品微生物限度检查结果按中华人民共和国药典2010年版一部附录XIIIC微生物限度检杳法要求，结合验证试验结论，依法时参揄灌肠液进行微生物限度检行，结果见表】，表15参榆灌肠液

30、微生物限度检在结果表检查菌批号111212IH214H12I5细菌总数<10<10<J0醉母的.<10<10<10盅菌总数金黄色葡萄球篷未检出未检出未检出大肠埃希菌未检出未检出未检出铜绿假单胞菌未检出未检出未检出活蜻未检出未检出未检出检查结果表明，三批样品微生物限度均符合规定.3.7含量测定37】测定对象及成分的选择参榆灌肠液由黄柏、石百浦，普参、地榆等七味中药组成，具有祛温得火，止血生肌.敛疮愈痛之功效,用干久痢，腹痛,腹泻,粘液脓血使,里急后重-方中黄柏是君药。黄柏中的生物碱类成分具有广泛的药理作用，包括抗菌、抗真菌，镇咳、降压、抗滴虫、抗肝炎、增强免疫

31、功能、抗溃疡作用等，而他酸小聚碱又是其主要成分,因此，本试骑选择盐酸小窠碱作为指标性成分，用高效液相色谱法测定其含辅，以控制制剂脑M，保证临床疗效。试骁结果表明，HPLC灵敏度高，重复性好,测定结果准确.可用于参榆海惭液中盐酸小聚彼的含量测定。3.7.2含量测定37.2.1仪器与试药AgilemllOO高效液相色潸仪,西元集（G13I1A）.柱温箱（GI316ALVWD检测器（G1314A）P匚作站<Chemstation）»盐酸小舞碱对照品（批号II07I3T002%含后测定用*购自中国药品生物制乩检定所）:MQ万电子分析天平（BPQ11D型.德国SM万us）1ASB2200

32、型超用波清洗器（天津奥特赛恩斯仪器公司卜参榆灌肠液（批号111212,114，1112151;水为超纯水,乙脂，甲醉为色谱姓，H余化学试剂为分析纯，3.72.2方法与结果照中华人民共和国药典2010隼版二部高效液相测定法（附录VD）测定.3.7221对照品溶液的制备取盐酸小嘿碱对照品适量，精密称定，加甲醛溶解制成每1ml含244圈的溶液。3.722.2供试品溶液的制备精密吸取本品2ml,置50ml量瓶中,加流动相超声处理功率250W,频率MkH"20分钟,放冷.用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液*同法制备阴性供试品溶液.*7.223色谱条件与系统适应性试脸色谱柱：

33、HederaODS-2Cistl（25046mm,5pm）t以乙胞*0.1%磷酸溶液50:50）（每100ml加十一烷基磺酸仍01g）为海动相:检测波长为265nm；柱温：30。；流速；LOmlmin分别精密吸取盐酸小菜碱对照品溶液，供试品溶液及阴件供试品溶液各1口心.注入高效液相色谱仪中，测定，供试品与对照品在相同的位置有较大吸收.阴性对照无干扰色谱样的理论板数按盐酸小聚碱峰计算不低于4000,分离度大于L5.37224线性关系考察取上述对照品溶液，用甲醇分别稀释至122.0、6L0、30$15.25、7625、3,8125脂司1分别精密吸取各不同浓度的对照品溶液103.注入寤效液相色谱仪中

34、测定。经线性网归.窗起檄小樊碱回归方程y=4±85x+4,4244,尸0399%盐酸小聚减在工X125-12工0地E范雨内，马峰面积的积分值呈良好的线性关系.结果如图一图7盐酸小蟾碱标准曲线37225精密度试验精密吸取同一对照品溶液】0山.注入病效液相色谱仪，重更进样6次，测定，以峰面一根枳分值计算，RSD为。.15%,结果见表16口表】6精懵度试验结果表Nd123456A1110.11106.71110.71108211065H07.4RSD(%)0.153,72.2.6重复性试验精密吸取同一批号(111214)的本品2ml,共6份，按“3.7222.项下处理方法制备供试晶溶液。分别精密吸收供试晶溶液10用，注入高效液相色惜仪中,测定，以盐酸小聚碱含鼠计算,RSD为L61%,结果见表17。表17爪更件试验结果表No一123456含她mg1ml)1.004L0261,054L008L0I71.017RSD(%)1.6137227稳定性试胎取同一供试品溶液，按上述色谱条件，TO.2.*6、8、12h分别进样，测定色谱峰而积，R$D为0,0'说明本品在12b内检定，结果见表表18稳定性试验结果表时间Ch)0246812A1811.61807,6181).8I81Z7181