动注射在线过滤稀释原子吸收法测定银杏黄酮的含量

1、动注射在线过滤稀释原子吸收法测定银杏黄酮的含量    【摘要】     目的建立复方银杏叶片中银杏总黄酮含量的测定方法。方法在中性介质中，银杏黄酮与Cu2+缔合为棕黄色沉淀，经流动注射在线过滤稀释，以AAS法测定反应剩余Cu2+的量来间接测定银杏黄酮的含量。结果银杏黄酮浓度在4.030 g/ml范围内与反应中剩余Cu2+的量呈良好的线性关系，方法的标准差1.1%，回收率101%105%。结论该法操作简便, 易于实现自动化，结果准确，专属性强，可作为银杏叶片的质量控制方法。   

2、0; 【关键词】  银杏黄酮 原子吸收 在线过滤 流动注射    银杏Ginkgo biloba叶的主要活性物质是银杏黄酮类（flavonoids）和银杏内酯化合物，研究表明，银杏黄酮类物质能促进心脑血管系统的代谢，作为植物药物能有效促进神经末梢和大脑的血液流通，对治疗心脑血管病和老年痴呆等多种顽疾具有明显的效果1，目前其测定方法主要有高效液相色谱法2，3、紫外分光光度法4，5 、荧光分光光度法6。    本文是在中性介质条件下，利用银杏黄酮结构中的临酚羟基与醋酸铜络合，产生棕黄色沉淀，用流动注射在线过滤

3、-原子吸收光谱法（FI-AAS）测定上层清液中剩余Cu2+ 的量，从而间接测定了银杏黄酮的含量。本法操作简便、快捷、灵敏度高、节省试剂、易于实现自动化，同时克服了一般AAS法中沉淀手工分离、洗涤、稀释的繁琐，用于银杏黄酮的测定，获得满意结果。1  器材与方法1.1  仪器与试剂TAS-968原子吸收分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；IFIS-B型智能流动注射进样器（西安瑞科数字记录有限公司）； 420Aplus型酸度计（美国ORION公司）；HH-4数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）。    银杏黄酮标准储备液：准确称取0.100 0

4、 g银杏黄酮标准品（99.2%，鼎国生物责任有限公司提供），用50%乙醇溶解并定容于100 ml容量瓶中，配制成1.0 mg/ml的标准储备液，用时稀释成0.2 mg/ml的标准使用液；醋酸铜溶液（1.0 mg/ml），用时稀释成0.1 mg/ml的标准使用液。     以上试剂均为分析纯，水为二次去离子水。1.2  仪器最佳条件波长324.7 nm；通带宽0.4 nm；灯电流3.0A；燃烧器高度5 mm；乙炔流量1.5 L/min，空气流量8.5 L/min。1.3  方法原理银杏黄酮的基本结构通式为：由于银杏黄酮分子结构中存在临酚羟基，故黄

5、酮分子在中性介质条件下能与铜离子络合生成难溶的棕黄色沉淀，经过流动注射在线过滤分离后，通过原子吸收法测定滤液中剩余的Cu2+，从而间接测定银杏黄酮的含量。1.4   实验方法移取一定量的银杏黄酮标准使用液于10 ml比色管中，加0.1 mg/ml的醋酸铜溶液，用水稀释至刻度，充分混匀，在80 水浴中反应20 min后，将溶液引入FI-AAS流路（见图1）进行测定。R试剂  S样品  P蠕动泵  F过滤器  RC反应盘管  D原子吸收分光光度计  W废液图1  FIAAS流路图（略）2  

6、; 结果与讨论2.1  化学参数的影响2.1.1  反应温度的影响移取一定量的银杏标准使用液，按实验方法在20100范围内进行实验。见图2。结果表明，随着温度的升高，沉淀增多，吸光度值逐渐减小；当温度在8090时吸光度值较稳定，说明此时沉淀反应完全。因此，实验在80水浴中进行。图2  反应温度对吸光度的影响（略）2.1.2   酸度的影响溶液酸度的大小对沉淀的生成有一定影响。取一定量银杏黄酮标准使用液，在不同的pH条件下，按实验方法进行实验，见图3。由图3可看出，pH值在6.08.0范围内吸光度值小而稳定。当pH6时，沉淀量少，溶液中剩余Cu2

7、+浓度偏高，吸光度值较大；当pH8时，生成的沉淀物可能部分溶解，吸光度值较大。本文反应选择在中性介质中进行。图3  pH值对反应的影响（略）2.1.3   反应时间的影响取一定量的银杏黄酮标准使用液，按实验方法操作，在80水浴中反应不同的时间，测定其吸光度，见图4。结果表明，反应25 min以后，吸光度值趋于稳定。实验选用反应时间为25 min。图4  反应时间对吸光度的影响（略）2.1.4  试剂用量的影响醋酸铜溶液的用量对测定结果有一定影响。实验选用不同量的醋酸铜试剂进行实验。结果表明：沉淀剂用量太少，沉淀不易生成；用量太多，造成标准曲线弯

8、曲。当Cu2+用量大于1.0 ml时，溶液的吸光度值稳定且灵敏，反应完全，但不容易达到在线稀释的目的。故本文选择Cu2+ 用量为1.0 ml。2.2  流动注射参数的选择2.2.1  采样环体积、混合管长度及载流流速的影响在最佳化学反应条件下，研究了采样环体积、混合管长度及载流流速对测定结果的影响。结果表明，随着采样环体积增大，吸光度也增大，但为了达到在线稀释的目的，需要采用小体积的采样环；混合管道越长，稀释效果越明显，但当管长超过1 m后，吸光度增加缓慢，而且过长的管道也降低了采样频率；当采样体积、混合管道一定时，随流速的增加，吸光度值逐渐增大，但当流速大于4.5 ml/

9、min后，吸光度增加缓慢。这是由于载流越快，对流作用的增强与扩散作用的减弱相抵消，分散度不再变化7，综合考虑，本文选择流动注射参数的最佳值见表1。2.2.2  过滤器的选择本文选用了内填微孔滤膜为0.22 m的柱形过滤器，过滤效果比较理想，重现性也好。过滤器外径16 mm，内径12 mm，进出口孔径1 mm，内填树脂做的微孔滤膜一张。表1  流动注射参数的优化（略）2.3  重复性实验分别移取1 ml银杏黄酮的标准使用液10份，按实验方法测定，相对标准偏差为1.1%。2.4   标准曲线的绘制     分

10、别移取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.6 ml的银杏黄酮使用液于10 ml比色管中，按实验方法测定，以吸光度A对浓度C绘制工作曲线，如图5。其线性回归方程：A=-0.016 2C+0.619 8，r = 0.999 6。图5  银杏黄酮的标准工作曲线（略）2.5   共存物的影响经银杏黄酮内含物纯品验证：在银杏黄酮标准液中分别加入同倍于银杏黄酮的淀粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、滑石粉溶液，糊精、乳糖、维生素C，对测定结果无影响；而同倍的氨基酸、Pb2+对测定有干扰，但在一般情况下，银杏黄酮中氨基酸、Pb2+ 含量较少。为了减少氨基酸对测定的影

11、响，建议选用银杏黄酮在4.030 g的低浓度进行测定。3  样品的测定3.1   样品的前处理准确称取银杏黄酮药品15粒，研磨混匀，称取适量（相当于银杏黄酮100 mg）溶解，定容于100 ml容量瓶中，于过滤后取其滤液10 ml定容于100 ml容量瓶中，待测定。3.2   样品测定取银杏黄酮样品溶液1 ml，按实验方法测定，计算样品含量，同时做回收率实验。结果见表2。表2  样品的测定结果及方法回收率（略）    【参考文献】  1 黄天芳.银杏资源开发现状J.生物学杂志，1997，14（2）:26.2 袁 龙.高效液相色谱法测定银杏叶片剂中银杏黄酮含量J.西北药学杂志,2004,19(6):246.3 董文庚，邓晓丽，苗凤智. HPLC法测定银杏叶中黄酮的含量J.理化检验·化学分册 , 2005,41(8)：63.4 曾凡骏，陈松波，曾 里，等.一种改进的银杏黄酮紫外分光光度检测方法的研究J.食品科学 , 2003,24(11) :102.5 上官小东，郎惠云，赵