法医物证学重点

1、第一章绪论法医物证学：法医物证学是应用多种学科的理论知识和技术研究并解决涉及法律方面有关生物性检材的检验与鉴定的一门学科。应用的学科包括：医学、生物 学、遗传学、免疫学、血型血清学、生物化学及分子生物学等。法医物证学：是以法医物证为研究对象，以提供科学证据为目的，研究应用生命科学技术解决案件中与人体有关的生物检材鉴定的一门学科。法医物证学是法 医学的分支学科，其研究内容属于法医学中的物证检验部分，是法医学研究的主 要内容之一。法医物证是一门应用科学，研究的方法涉及多种学科包括： 化学，物理学, 电子计算机，形态学，免疫血清学，生物化学，分子生物学，遗传 学等方法。法医物证的特点：法医物证的稳定

2、性受环境条件的影响；法医物证属于“科学证据”。第二章 法医物证分析的遗传学基础1、何谓遗传标记个体的单位遗传性状作为标志用于法医物证分析时，这种遗传性状就成为遗传标记GM2、何谓基因、基因型和表型1）基因型：是指个体一个或多个基因座上等位基因的组合，是生物体可见性 状的实际基因组成。2）表型：是指生物体某特定基因所表现的性状。表型由基因型决定。3、Hardy-Weinberg平衡定律的前提条件和意义1）前提条件：群体无限大、随机婚配、没有突变、没有大规模的迁移和没有选择 因素的影响。2）结论：群体中的基因频率和基因型频率在逐代传递中保持不变。3）意义：4）反映基因频率和基因型频率的关系（纯合子

3、基因型频率二基因频率的平方，杂合子=该两基因频率乘积的二倍）5）群体样本的检验4、非父排除概率（P23）PE是指孩子的非亲生父亲的男子，能够被某个遗传标记系统排除的概率。PE用于评估某一遗传标记系统在亲权鉴定案件中的实用价值。5、何谓个人识别概率（P22）个人识别概率（DP）是指在群体中随机抽取两个体，两者的遗传标记表型不相同的概率。DP是评价该遗产标记系统识别无关个体效能大小的指标，DP越高，效能越强。第三章DN够态性的分子基础1、何谓DN够态性（P37）1）在基因组DNA中，由不同碱基结构的等位基因所形成的多态性叫做DN够态性。2）按照DNA遗传标记的结构特征，DNA多态性可分为长度多态性

4、和序列多态 性。2、何谓 VNTR（P37）小卫星DNA中的可变数目串联重复序列称为 VNTR3、何谓STR微卫星的可变数目串联重复序列称为短串联重复序列，STR第四章DNA|£度多态性1、RFLP2、Amp-FLR3、DNAft纹图谱的基本特征1）遗传方式：孟德尔规律、所有片段独立遗传2）个体的组织同一性：稳定一致3）群体遗传学特征：4）突变率：配子细胞形成时重排、重组与交换4、DN微印图谱的基本特征1）高多态性2）遗传规律：共显性3）个体组织同一性：一致4）群体遗传学特征：5）高突变率：配子细胞形成时重排、重组、交换5、何谓扩增片段长度多态性分析Amp-FLR采用PCR技术扩增V

5、NTRt STR基因座等位基因进行 DNA长度多态性分 析的方法。6、RFLP与Amp-FL唯术有何异同（P74） 7、STR分型用于法医物证鉴定的主要优点1）高灵敏度：适用于微量降解检材2）高鉴别能力：节约检材、试剂和提高效率3）标准化分型：实现数字化结果，利于实验室间数据交换，建立数据库8、何谓miniSTRminiSTR分型有何法医学应用价值1） miniSTR:通过重新设计引物，使其结合在更靠近核心重复区的侧翼序列，从而降低扩增产物的大小， 进一步提高灵敏度和分型成功率，这种技术称为短片段STR分型或miniSTR分型。2） miniSTR法医学应用价值：? STR基因座的扩增片段较短

6、，灵敏度更高，尤其适用于微量或降解生物检材的DNg型；?等位基因片段长度范围较窄，不易发生因小等位基因的优势扩增而造成的 等位基因丢失现象；?可对多个STR基因座进行复合扩增，从而节约检材、降低成本，提高单次 检测的信息量9、何谓多基因座复合扩增1）在一个PCRft：系中同时扩增多个靶基因座的方法叫做复合扩增。2）复合扩增可提高单次检测的信息量，提高个人识别率，也可降低成本和检 材的消耗。10、 Y-STR有何法医学应用特点1） Y染色体为男性特有2） Y-STR呈父系遗传特征3）单倍体遗传：在减数分裂过程中，Y-特异性区不发生重组，所有 Y-STR基因座均呈连锁遗传，等位基因频率不能以相乘方

7、法计算4） GD=PE5）结果不具有唯一性，不能认定11、 Amelogenin 基因（名解）牙釉基因（AMG：位于X染色体Xp22,编码牙原基质牙釉质蛋白，故命名牙釉基因。在人Y染色体中心粒附近有一类牙釉基因（ AMGL,与牙釉基因的碱基序列有90洞源性。用一对特异性引物可同时扩增 AM丽AMG咛列片段，X特异性片段长 度为977bp, Y为788bp。扩增后，男性可获得两条带，女性只观察到一条带。但是其扩增产物较长，不适合腐败血痕、过于陈旧血痕的性别鉴定。第五章STR自动分型1、简述STR自动分型技术的主要步骤1） DNA自动化提取2） PC尊色荧光标记STRM合扩增3） PC*物电泳前处

8、理4）自动毛细管电泳结合激光诱导的荧光检测5）自动数据采集并分型2、何谓 off-ladder1）在STR分型图谱中，常会遇到部分样本的少量片段峰未被程序化数字命名，在分型图谱中被标识为 off-ladder2）漂移作用和新等位基因都可标识为 off-ladder3、何谓LCNLCN基因组含量小于 100Pg的样本称为低拷贝 DNA（low copy number ）。第六章DN对列多态性DNA多态性(DNA polymorphisms ):基因水平上的多样性来自基因的突变， 当基因突变以等位基因形式在群体中得以保留，并能够从亲代遗传给子代，可形 成个体间的遗传差异。不同个体间的遗传差异形式是

9、不同的等位基因组成。等位 基因之间的差异可以是点突变引起的忤列不同也可以是因为碱基的插入或缺失引起的片段 长度不同都能构成具有个体特征的DNA遗传标记。DNA遗传标记可以出现在编码区，也可以存在于非编码区。在基因组DNA中，这种由不同碱基结构的等位基因所形成的多态性叫做DN够态性。DNA长度多态性(DNA length polymorphisms ):是指同一基因座上各等位基 因之间的DNA>t段长度差异构成的多态性。DNAfe度多态性靶序列主要是指可变数 目串联重复序列(VNTR, VNTF®存在于小卫星 DNA中，也存在于微卫星 DNA中。 由于命名习惯和为了便于区分，通常

10、小卫星DNA中的可变数目串联重复序列称为VNTR而把微卫星的可变数目串联重复序列称为短串联重复序列(STR)0DNAff列多态性(sequence polymorphisms ):是指一个基因座上，因不同个 体DNA序列有一个或多个碱基的差异而构成的多态性。可以理解为该基因座上所 有等位基因DNA长度相同，但是它们之间的序列存在差异。在基因组DNA中，无论是编码区或者非编码区，单碱基替换是最基础的突变形式。在人类基因组范围 内，如果任何单碱基突变使特定核昔酸位置上出现两种碱基，其中最少的一种在 群体中的频率不少于1%,就形成单核音酸多态性(single nucleotide polymorph

11、isms , SNP。限制性片段长度多态性( restriction fragment length polymorphism,RFLP): RFLP分析是一种传统的分子生物学检测技术，广泛应用于突变分析、基因诊断、基因定位等各个方面。法医物证鉴定应用RFLP技术主要是对人类基因组中的VNT福因座进行分型，其技术核心是DNg子杂交,决定 RFLP分析图谱个体特异性的因素是限制性核酸内切酶的特异性和探针的特异性。检测所用的探针多 是由人类基因组 DNA中筛选出的小卫星序列，选择特异性不同的探针，在不同的 杂交条件下，可以只检出单个 VNTRS因座，也可同时检出多个VNTR基因座，前者称为pNAm

12、|,后者称之为pNAHl纹|，检测所用的相应探针分别被称为单基因 探车t ( single-locus probe)手口多基因探针 (multi-locus probe) 。Southern印迹杂交：是进行基因组DNA#定序列定位的通用方法。一般利用 琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固 定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检 测特定DNA分子的含量。其基本原理是:具有一定同源性的两条核酸单链在一定 的条件下，可按碱基互补的原则形成双链，此杂交过程是高度

13、特异的。由于核酸 分子的高度特异性及检测方法的灵敏性，综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的 结果，便可绘制出 DNA#子的限制图谱。Southern印迹杂交(Southern blot )是 研究DNAffl谱的基本技术，在遗传病诊断、DNAS谱分析及PCFT物分析等方面有 重要价值。Southern印迹杂交的基本方法是将DNAfe本用限制性内切酶消化后， 经琼脂糖凝胶电泳分离各酶解片段，然后经碱变性，Tris缓冲液中和和高盐下通过毛吸彳用将 DNA从凝胶中转印至硝酸纤维素膜上、烘干固定后即可用于杂交。凝胶中DNA片段的相又置在DNA片段转移到滤膜的过程中继续保持着，附着在 滤膜上的DNA与32

14、P标记的探针杂交，利用放射自显影术确立探针互补的每一条DNA3?的位置，从而可以确定在众多消化产物中含某一特定序列的DNNt段的位置和大小。(琼脂糖凝胶电泳f硝酸纤维素膜吸印)限制性内切酶常见的有那些 限制性内切酶(restriction endonuclease ): 一种在特殊核甘酸序列处水解双链DNA的内切酶。I型限制性内切酶既能催化宿主DNA的甲基化，又催化非甲基化的DNA勺水解；而n型限制性内切酶只催化非甲基化的DNA勺水解。合成引物白要点，PCR勺反应组成：标准的PCR反应体系10X扩增缓冲液10口4种dNTP昆合物200 仙 1引物10100卜1模板DNA2仙gTaq DNA聚合

15、酶N 1Mg2+L加双或二蒸水100 a 1PCR反应五要素：参加PCRS应的物质主要有五种即：模板DNA寡核甘酸引物，dNTP,反应缓冲液， TaqDNA聚合酶。PCR基本原理：PCR技术是模拟生物体内 DNA的半保留复制，在体外合成DNA链的方法，在模板、DNA引物、dNTR Taq酶存在的条件下经过：“高温变性一低温退火一中温延 伸”三步循环，获得大量扩增片段。合成引物的要点：引物合成是通过测定引物的 OD值，溶解引物，最终合成引物的一个完善的过程。目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。亚磷酰胺三酯法合成DNAt段，具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将D

16、NA固定在固相载体上完成 DNA链的合成的，合成的方向是由待合成引物的3'端向 5'端合成的，相邻的核昔酸通过 3' "5'磷酸二酯键连接。第一步，是将预先连接在固相载体CPG上的活性基团被保护的核昔酸与三氯乙酸反应，脱去其5'-羟基的保护基团DMT获得防?离的5'-羟基。第二步，合成DNA勺原料，亚磷酰胺保护核昔酸单体，与活化剂四氮嚏混合， 得到核昔亚磷酸活化中间体， 它的3'端被活化，5'-羟基仍然被DMT呆护，与溶 液中游离的5'-羟基发生缩合反应。第三步，带帽(capping)反应，缩合反应中可能有极少数

17、 5'-羟基没有参加反 应(少于2%),用乙酸酊和1-甲基咪嚏终止其后继续发生反应，这种短片段可以在 纯化时分离掉。第四步，在氧化剂碘的作用下，亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。经过以上四个步骤，一个脱氧核昔酸被连接到固相载体的核昔酸上。再以三 氯乙酸脱去它的5'-羟基上的保护基团 DMT重复以上步骤，直到所有要求合成 的碱基被接上去。常染色体STR与性染色体STR有什么不同常染色体STR短串联重复序列(STR)是广泛存在于人类基因组中的一类具有 长度多态性的DNAf列。它由26个碱基对构成核心序列，呈串联重复排列，其长 度多态性主要由核心序列拷贝数目的变化而产生。一般认为，人

18、类基因组平均每610kb就有1个STR基因座，为法医个人识别和亲子鉴定提供了高信息基因座的 丰富来源。与限制性片段长度多态性产生的DNA指纹相比，用聚合酶链反应技术(PCR)扩增STR基因座产生的 DNA纹印具有更高的灵敏度。STR扩增片段较短(100300bp),对于常见含部分降解 DNA的陈旧斑痕，PCR扩增STR比DNAit纹分析更容易成功性染色体STR人类Y染色体属于近端着丝粒染色体，由长臂Yq和微小的短臂Yp组成，DNA长度约60Mb Y-DNA中大致有五类多态性遗传标记：卫星 DNA 小卫星DNA微卫星DNA插入或缺失及 SNP Y染色体ST就因座（Y-STR）是其 中一种重要的遗

19、传标记。与常染色体STR基因座相比，大多数 Y-STR基因座具有复杂的串联重复结构：一个基因座内常含有两种以上不同的重复单位，恒定重复 序列和可变重复序列同时存在。与常染色体STR基因座比较，Y-STR分型的法医学应用具有以下特点：Y染色体为男性所特有， Y-STR呈父系遗传特征，只能有 父亲传递给儿子，在减数分裂过程中，Y-特异性区不发生重组，评估 Y-STR鉴别能力的指标是遗传差异度，和mtDNA-样，Y-STR分型结果不具有唯一性，其法医学应用价值在于排除，而不能认定。X-STR基因座具有伴性遗传的特征，X-STR的遗传特征既不同于常染色体，也不同于Y染色体，表现为性连锁特征。进行分型检

20、测时，男性个体 X-STR显现一条片段，女性杂合子则显示两条等位基因 片段。低拷贝DNA（low copy number , LCN ：是指基因组含量小于 100Pg的样本。PCR循环测序的基本原理：PC做术能够快速、特异性地扩增靶DNA应用PCR 技术测定DNA序列分为两个步骤：先利用 PCRT增靶序列片段，制备测序模板， 然后再利用PCR4接测定序列。PCRffl序采用了热循环高效合成 DNA勺特性并结合 双脱氧核昔酸终止法，使引物链终止的延伸产物数量在热循环过程中得到增加， 因此称为循环测序。每个测序循环包括：PCFT增制备的模板 DN岐性成单链形 式；标记引物与其中的一条链上的互补序列

21、退火；退火后的引物在耐热DNA聚合酶催化下发生链延伸终止反应。本次循环产生的模板链与延伸终止链形成的 双链的产物，在下一轮测序循环中，再次被变性，释放出模板链，作为又一轮引发反应的模板，同时积累下一轮循环产生的链终止产物。上述循环步骤重复2040次，使链终止产物以线性方式获得扩增。DNA自动测序技术：DNA自动测序技术是以4种荧光染料基团分别作为 4种 ddNTP终止链的标记物，于20世纪80年代末期建立的一种高效、 快速、自动化的 序列测定技术。4种荧光染料分别作为测序反应中4种ddNTP终止链的标记物，即4种被双脱氧核昔酸终止的 DNA>t段分另U带上4种不同的颜色。这些DNAt段的

22、混 合物同时加在一个样品槽中电泳展开，相互间仅差1个碱基的DNA片段形成一条具有4种颜色的阶梯分布图像。 阶梯中的每-DNAt段由标记在该片段上的特征性 荧光基团发出的荧光所指示。荧光染料基团作为标记物的基本要求是经过激光诱发的吸收光谱波长在可见光波长范围内，不影响延伸反应，不影响标记后DNAt段的电泳性质。其次要求4 种荧光的吸收和激发光波长要有足够的差异，便于检测。荧光染料的掺入的方式 有两种：一种是将荧光染料预先标记在测序反应通用引物的5'端。4种荧光标记形成4种标记引物，测序反应分4个反应管进行，特定的荧光染料与相应的 ddNTP 是对应关系，例如荧光示踪染料JOE标记的通用引

23、物总是与 ddATP加在同一个反应管内，因此由ddATP终止的所有延伸链都带有JOE。这种方式被称为 Dye-Primers 。另一种是将荧光染料基团连在 ddNTP上，4种荧光染料分别与 4种 ddNTP底物连接，反应产生的4组DNA片段分别由特定ddNTP所终止，并且标记有 4种不同的荧光发色基团，A、C、G和T分别携带有绿、红、蓝、黄 4种荧光。这 种方式被称为 Dye-Terminators 。两种方式各有特点，不过前者要求A, G, C, T分4个反应进行，而后者的 4组反应可以在同一管中完成。上述两种方法都能确 定4种荧光与4种ddNTP所终止的DNA片段之间的对应关系，这是后来从

24、电泳中检测标记物信号以及最终读序的基础。自动测序仪器无论是变性PAG平板凝胶电泳还是毛细管电泳，都配置有激光束激发系统和荧光信号收集检测系统。当DNA片段电泳通过检测窗口时，在激光束的激发下，片段的电泳时间和被激发荧光的波长、强度等信号都被记录，由计算机自动作数据处理，最后在屏幕上显示每一样品的各终止片段电泳分离的模拟图像。不同颜色的峰标示各自标记的碱基及其排列顺序（如图所示）：MV|p（ minisatellite variant repeat）序列：称为具有变异核心序列的小卫星DNA是一类既有长度多态，性又有序列差异的DNAS复序列。第七章线粒体DN够态性1、人类核DNg mtDNA勺比较

25、（P179）2、mtDNA勺特点1）唯一的核外DNA来源2）拷贝数多和异质性（当两种不同的mtDNA序列存在同一个细胞、组织或者个体时称之为异质性）3）母系遗传4）抗外切酶的环状结构有助于分子稳定性，对高度降解检材奏效5）瓶颈效应和复制分离6）阈值效应3、mtDN附型的优点1）高变区作为遗传标记用于法医鉴定，高变区又称 D-环区2）当细胞核DNA量不足而无法进行分型时，线粒体DNA技术分析是唯一可以利用的技术3）生物检材中的毛发、骨干、牙齿和其他严重降解的检材也依赖线粒体DNA分析4）简单易操作、检材灵敏度高5）所需模板DNA®少6）减少DNA1级结构干扰4、mtDN附型的主要方法1

26、） mtDNAI取（抽提）2） PCR3）纯化PC*4）循环测序反应原理 ddNTPcore , only 1 primer5、mtDN附型的特殊问题1） mtDNA属于母系遗传，凡属同一母系的后代，mtDNA序列都是相同的。序列一致只能说明不排除同一个体的可能；2） mtDNA够提供的信息量有限（单倍型）”排除同一性（真正价值）3） mtDNA勺异质性违背同一个体 mtDNAf列必然是一致的前提条件，给个体识别 鉴定增加了变数；（如果多份检材异质性出现在同一位置的同一碱基贬义，反 而对认定同一个体检材有利）6、mtDN附型的法医学应用局限性1）分型技术要求高，耗时耗力耗钱2）识别力相对较低：

27、非个体唯一，共有单倍体（母系遗传）3）异质性4）数据库规模：易高估其识别能力5）无法进行混合斑的检测第八章红细胞血型1、何谓ABOB型的正反定型1）正定性试验：根据 RBC与特异性抗体的反应来分型，即用抗A抗体判定A抗原，用抗B抗体判定B抗原。2）反定型试验：依据血清中的凝集素与标准型 RBC莫上的凝集原反应的性质， 即用标准的A型RBCJ定抗A抗体，用标准的B型RBCJ定抗B抗体，同 时也应用抗H抗体判定H抗原。2、试述ABOB型的DN附型方法1） PCR-SS存列特异性引物 PC做术：特异性强、重复性好 2） PCR-RFLP3、中和试验的基本原理1）不完全Ab2）遮断作用3）判断不完全A

28、b是否与Ag凝集4、Oh型血清学特点1）在RBC上及唾液中均无 ABHB原，即不被抗 A、抗B及抗H所凝集2）血清中有抗A、抗B及抗H凝集素，可分别凝集 A、B、。型RBC第九章白细胞血型1、HLA抗原的分布1） HLA-I类抗原：分布广发，几乎存在于所有的有核细胞表面，以淋巴细胞 上的密度最高。2）成熟RBC上没有HLA-A、B、和DR抗原，幼稚 RBC却有。3） HLA-II类抗原：密度最高者为DC单核细胞，一些吞噬细胞亚群及 B细胞；4） II类抗原作为一种分化抗原在不同细胞上表达，大多数骨髓分化细胞具有HLA-II类抗原。2、HLA命名原则1）以大写字母A、D、C.表示HLA遗传区域中

29、的座位2） HLA抗原特异性用数字表示3）为防止与补体组分命名相混淆，HLA-C抗原特异性以Cw为字首命名4） HLA基因命名一般以4位数字表示，其中前2位数字表示对应最相近的 HLA 抗原特异性，后2位数字则用于表示亚型的等位基因，如 A*01015）如果出现第五位数字，则代表“沉默取代”，即该基因虽发生了个别碱基的 替换，但新密码子与原密码子属简并密码，不影响所编码的氨基酸序列6）第6、7位数字代表相应的启动子序列的多态性7）末尾加英文字母N表示无效基因或不表达基因8）在不能区分等位基因时，可允许最前面的2位或4位数字表示该HLA的特异性3、HLA®传特征1）共显性遗传：每个 H

30、LA基因座表达一对抗原，人类 HLA每个基因座上有众 多等位基因。故如果血清学方法分型时，个体只检测出了一个抗原则有三 种可能：该抗原的纯合子、HLA血清板不完全、存在一种至今尚未发现的抗 原。2）单倍型遗传：单倍体是指一条染色体上HLA各基因座的基因紧密连锁组成的基因遗传单位3）连锁不平衡：HLA在实际群体调查发现，各基因座的基因并非完全随机组成单倍型，有些单倍型观察频率高于期望频率或低于期望频率，这种现象称为连锁不平衡。处于连锁部平衡状态说明HLA不同基因座的基因之间存在关联，具有一同遗传的趋向。4） HLA高多态性4、微量淋巴细胞毒性试验原理（血清学分型）1）微量淋巴细胞毒性试验或称补体

31、依赖的细胞毒性试验，其分型原理为2） Ag-Ab-C:淋巴细胞膜上的HLA抗原与已知HLA血清中相应抗体结合后，形成 抗原抗体复合物，再结合补体。3） C激活、破坏Lc：被激活的补体系统产生细胞毒性，攻击淋巴细胞，淋巴细胞 膜破坏。4）死细胞着色：经过染色，染料进入破损细胞内着色，为阳性结果。5）计数：在倒置相差显微镜下观察，计数着色细胞所占细胞数目的百分比。5、HLA抗血清与交叉反应成功的关键是HLA抗血清的质量根据与抗原决定链的反应，可把 HL丽体分为2组：1）抗体仅与一种HLA基因产物反应2）抗体能与不止一种HLA基因产物结合6、斑点杂交（PCR-SS讨型方法）将PCRT增片段制成斑点，

32、用等位基因特异性寡核昔酸探针（ASQ杂交，通过探针放射自显影结果进行 HLA分型。反向斑点杂交（RDB：把探针预先固定在膜上，标记PCR引物。7、比较HLA血清学分型和DNg型方法的可靠性HLA个体遗传差异的本质不是在于血清学方法所检测的抗原，而是在编码基因产物的DNA#子上。DNg型优于血清学方法在于：1）试剂由化学合成，便于标准化和实验室间相互比较结果2）对检材要求不高（血清学方法因需要活细胞而难以用于斑痕HLA分型）3）血清学与DNA#型不完全相同的分型误差得以解决血清学方法发生的错误主要集中在：1）交叉反应抗原2）能否正确指定属于 A9和A19的亚型，这些抗原多在交叉组内或是宽特异性

33、抗原的裂解产物3）未能检出WHOT名的全部基因4）纯合子细胞中存在假阳性反应5） HLA-C大量“空白”基因，没有相应的抗血清检测它们的产物（DNg型技术促进和改善了对HLA多态性的分辨率）8、HLA在法医学上的意义1）高度多态性2）出生时已完全发育，终身不变For同一认定、个人识别第十章血清型1、等电聚焦技术for亚型2、Hp分型原理、方法及法医学应用评价? Hp：结合珠蛋白，血清中，能与 Hb结合使Hb过氧化物酶样活性显着？的糖蛋 白? 分型：HP1-1、Hp2-1 及 Hp2-2? 遗传变异，Hp0 （无结合珠蛋白血症）：f不能用于流产胚胎或v 4mon的新生 儿的亲子鉴定。? 原因：1

34、 ）溶血性贫血，特发性贫血，白血病，尿毒症等，患者的血浆Hp含量明显下降；2 ）严重肝脏疾病如急性肝炎、肝硬化，Hp合成障碍；3 ）胎儿及部分新生儿（4个月后大部分能检出）；4 ）少数正常个体（注意假阴性）。? 分型原理：1）型别分离：PAG圆盘电泳：利用PAG勺分子筛作用和电场作用， 在柱状凝胶 中分离不同型别的Hp蛋白。Hp-Hb, Hb过氧化物酶样活性使联苯胺f氧化 为联苯胺蓝f显色；（just for 新鲜血清中Hp型别）2） Hp亚型等电聚焦电泳分型3） DNA#型：利用基因特异性探针进行杂交分型、PCRT增3、Gc分型原理、方法及法医学应用评价Gc：维生素D结合蛋白DPB也成型特异

35、性成分，电泳属 a2球蛋白，主要生物学 功能是结合和转运维生素 D分型原理：1）免疫电泳2） PAG!盘电泳3）等电聚焦技术4） DNA#型Gc法医学应用评价1）个人识别率为2）非父排除率为%3）室温保存4个月的血痕可检出 Gc型4） 4c条件下保存6个月的尿液可检出 Gc型5）在血痕检测中，优于 Hp4、试述免疫球蛋白同种异型分型原理、方法及法医学应用评价同种异型：是指免疫球蛋白上具有表达个体差异的抗原决定簇，由编码免疫球蛋 白多肽链基因的等位基因所表达产生，表现为同一种属不同个体的免疫球蛋白抗 原性不同，具有遗传多态性。人类免疫球蛋白同种异型的命名是根据抗原决定簇位于重链或是轻链。分型方法

36、：1）血凝抑制试验2）酶联免疫试验3）胶体金免疫层析技术4） PCFT 增法医学应用评价：1） G侦 Km系统DP及PE均高于已知的 RBCB型、RBCM型及其他血清型2） G侦Km抗原在常温下或碱性环境中颇为稳定，溶血对抗原性无大影响5、等位基因排斥现象：免疫球蛋白同种异型的遗传，在重链或轻链的同一位置上氨基酸不相同的同种异型是由常染色体共显性基因遗传的。但基因的表达具有等位基因排斥现象。虽然杂合子的两个等位基因同时表达，但任何一个免疫球蛋白分子只有一个同种异型。因为一个B细胞只能表达一种等位基因，称为等位基因排斥现象。6、Gm系统：免疫球蛋白同种异型两个相互独立的连锁群基因的其中重链标记，

37、决定IgG同种异型。第十一章酶型1、同工酶的分型方法1）同工酶的多态性采用凝胶电泳方法进行分型? 区带电泳：利用酶蛋白分子的大小和所携带电荷数量（酶蛋白的电荷密度的差异）f Rf? 等电聚焦技术：根据酶蛋白分子的等电点不同，在pH梯度介质中，酶蛋白分子聚焦在相应的等电点pH位置上，形成狭窄而清晰的区带2）凝胶介质上酶区带的显现及鉴定?直接底物显色法：常用于测定水解酶，无色底物被酶催化反应转变成有色产物?荧光染色法：酶催化下，非荧光底物生成高度荧光的产物或使荧光底物转化成非荧光产物（负荧光染色）? 电子转移染料染色：酶催化下，同时NAD或NADP还原成NADHK NADPH同时提供电子。染料还原

38、成暗蓝紫色的不溶性甲月替。2、PGM份型原理、方法及法医学应用评价PGM磷酸葡萄糖变位酶（Mg2H （+）, Zn2- （-）PGM伺工酶活性很高，广泛存在于人体和动物体内各种组织中，esp心、肝。分型：? 淀粉凝胶电泳或琼脂糖凝胶电泳，的缓冲系统：从（-）”（+）,谱带顺序为a、b、c、d （PGM 1基因产物，具有个体差异）、e、f、g （PGM28因座产物， 多态性较低）。PGM1-1=ac PGM12-1=abcd PGM1=ac PGM2=bd? 亚型使用PAG?电聚焦技术? DNA-RFL吩型：在PGM的exon4和exon8中多态性碱基均涉及限制性内切酶 识别序列的改变检出时限：

39、? 室温保存的血痕样品4-6w内可以准确分型? 条件较好、保存得当：3-4mon? 低温保存：更长时间? 陈旧血痕：可能在d带区域出现一条扩散的谱带，干扰正常判型3、EsD分型原理、方法及法医学应用评价EsD酯酶D,存在于RBC?口组织中的水解酶EsD表型：3 种表型，EsD1-1=12, EsD2-2=23, EsD2-1=123 （其中 1 带活性最高） 分型方法：淀粉凝胶电泳或琼脂糖凝胶电泳法：分辨率较好、方法简便、较常用? 醋酸纤维素膜电泳法? PAG等电聚焦法检出时限：室温3-4mon,低温；组织检材 EsD分型的检出时限较血痕短。4、EAP分型原理、方法及法医学应用评价1） EAP红细胞酸性磷酸酶，酶活性以前列腺最好，RBC次之。2） 分型：?淀粉凝胶电泳或琼脂糖凝胶电泳?醋酸纤维素膜电泳? PAG等电聚焦电泳3）检出时限：室温9w4）早孕绒毛组织EAP表型能代表胎儿表型，可用于妊娠早期的亲自鉴定5、作为个人识别和亲自鉴定的同工酶的条件：1）酶型多态性程度高，鉴别能力及 PE高2）酶的催化活性易于测定3）酶活性高而稳定，不易受干燥和其他理化因素影响4）电泳检测操作简便，结果重复性好5）除血液外，在其他人体组织及细胞也可检出相同的型别第十二章亲子鉴定1、何谓PEPE:非父排除概率，是指不是小孩生父的男子（简称非父